Establishment of aseptic explantsMa

Establishment of aseptic explants
Mature rhizomes of B. rotunda were purchased from herbal supplier
at a local Market in Kuala Lumpur, Malaysia. The rhizomes were
cleaned and rinsed. The cleaned rhizomes were then placed in an
open container to allow shoots to sprout two to four cm in length.
The sprouting buds were collected and washed with 20% (v/v)
clorox for 15 min. Under aseptic conditions, shoots were surface
sterilized with 0.5% (w/v) aqueous solution of mercuric chloride
(HgCl2) solution for five minutes and followed by three rinses in
sterile distilled water. The shoot buds had their external leaves
removed and trimmed down until the size ranged from 0.5 to 0.8
mm and used as explants (Figure 1A to C). They were then
inoculated into 350 ml glass jar containing MS (Murashige and
Skoog, 1962) medium supplemented with 30.0 g/l sucrose and 2.0
g/l gelrite for 30 days. The pH of the medium was adjusted to 5.7
prior to autoclaving at 121°C for 21 min. The cultures were
maintained in a culture room with 16/8 h photoperiod (light/dark) at
25 ± 2°C. After 30 days, the aseptic buds of this species were
transferred onto MS medium supplemented with 3.0 mg/l BAP and
0.5 mg/l NAA, the optimum medium was formulated for other
Zingiberaceae species by Yusuf et al. (2007) for shoot multiplication
for four (4) weeks (Figure 1D). The multiple shoots produced were
separated and transferred into MS medium devoid of plant growth
regulators for four (4) weeks and were used for all subsequent
experiments.
Induction of multiple shoots
Isolated shoot buds were inoculated onto MS (Murashige and
Skoog, 1962) medium containing 30.0 g/l sucrose and 2.0 g/l gelrite
as solidifying agent supplemented with cytokinins (6-benzylaminopurine
(BAP)) ranging from 0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 and 5.0 mg/l
and auxin (α-naphthaleneacetic acid (NAA)) ranging from 0.0, 0.5,
1.0 and 2.0 mg/l, for shoot multiplication. A single shoot was
cultured into each 350 ml glass jar and 10 experimental units were
used for each medium combination.
Scoring of data
All cultures were examined periodically, and the morphological
changes were recorded on the basis of visual observations and
were made after one to four weeks of culture for four consecutive
subcultures. There were 10 cultures per treatment for shoot multiplication
and subculturing was carried out at an interval of four
weeks. The effect of different treatments and subcultures were
quantified on the basis of percentage of cultures showing response
for multiple shoots formation.
Yusuf et al. 1195
Acclimatization
In vitro rooted plantlets of B. rotunda (Figure 1E) were removed
from the solid MS medium and the roots were washed under
running tap water to remove residual agar. Each plantlet was then
planted into pots containing mixture of organic soil and sand (1:1)
without direct sunlight. The percentage of surviving plantlets was
recorded after four weeks of transfer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จัดตั้ง explants ปลอดเชื้อ
เหง้าผู้ใหญ่ของข หอกที่ซื้อมาจากผู้ผลิตสมุนไพร
ที่ตลาดท้องถิ่นในกรุงกัวลาลัมเปอร์ประเทศมาเลเซีย เหง้าถูก
ทำความสะอาดและล้าง เหง้าทำความสะอาดถูกวางไว้แล้วในภาชนะ
เปิดให้หน่องอก 2-4 เซนติเมตรยาว.
ตาแตกหน่อถูกเก็บรวบรวมและการล้างด้วย 20% (v / v)
Clorox 15 นาที ภายใต้เงื่อนไขที่ปราศจากเชื้อโรคยอดอ่อนพบว่าพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วย
0.5% (w / v) สารละลายของคลอไรด์ปรอท
(hgcl2) วิธีแก้ปัญหาสำหรับห้านาทีและตามด้วยสามซักน้ำใน
ผ่านการฆ่าเชื้อน้ำกลั่น ตายิงมีใบภายนอกของพวกเขา
ออกและตัดลงไปจนมีขนาดอยู่ระหว่าง 0.5-0.8
มม. และใช้เป็นชิ้นส่วน (รูปที่ 1a กับ c) พวกเขาแล้ว
เชื้อลงใน 350 มล. ขวดแก้วที่มีมิลลิวินาที (Murashige และ
skoog, 1962) สื่อเสริมด้วยน้ำตาลซูโครส 30.0 กรัม / ลิตรและ 2.0
g / l gelrite เป็นเวลา 30 วัน ph ของกลางมีการปรับ 5.7
ก่อนที่จะ autoclaving ที่ 121 ° C เป็นเวลา 21 นาที วัฒนธรรมที่ได้รับการเก็บรักษาไว้
ในห้องวัฒนธรรมที่มี 16/8 ชั่วโมงต่อช่วงแสง (แสง / สีดำ) ที่
25 ± 2 องศาเซลเซียส หลังจาก 30 วันตาปลอดเชื้อของสายพันธุ์นี้มี
โอนไปยังมิลลิเสริมกลางที่มี bap 3.0 mg / l
และ 0.5 mg / l NAA, ขนาดกลางที่ดีที่สุดเป็นสูตรอื่น ๆ ชนิด
zingiberaceae โดย yusuf ตอัล (2007) การคูณยิง
สี่ (4) สัปดาห์ (รูป 1d) ถ่ายหลายที่ผลิตได้
แยกจากกันและโอนเข้ามิลลิกลางไร้เจริญเติบโตของพืช
ควบคุมสี่ (4) สัปดาห์และถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองต่อมา
.
เหนี่ยวนำหลายใบ
แยกตายิงได้รับเชื้อเข้าสู่มิลลิวินาที (Murashige และ
skoog, 1962) ที่มีขนาด 30.0 g / l ซูโครสและ 2.0 g / l
gelrite เป็นตัวแทนของแข็งเสริมด้วย cytokinins (6-benzylaminopu​​rine
(BAP)) ตั้งแต่ 0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 และ 5.0 มก. / ลิตรและ
ออกซิน (กรดα-naphthaleneacetic (NAA)) ตั้งแต่ 0.0, 0.5, 1.0 และ
2.0 mg / l เพื่อเพิ่มปริมาณยอดยิงคนเดียวเป็น
เพาะเลี้ยงในแต่ละขวด 350 มล. แก้วและ 10 หน่วยทดลอง
ใช้สำหรับแต่ละชุดกลาง.
การให้คะแนนของข้อมูล
ทุกวัฒนธรรมมีการตรวจสอบเป็นระยะ ๆ และก้าน
การเปลี่ยนแปลงที่ถูกบันทึกไว้บนพื้นฐานของการสังเกตภาพและ
ที่ถูกสร้างขึ้นหลังจาก 1-4 สัปดาห์ของว​​ัฒนธรรมสี่ติดต่อกัน
วัฒนธรรมมี 10 ต่อการรักษาวัฒนธรรมการคูณยิง
และ subculturing ถูกหามออกในช่วงเวลาสี่สัปดาห์
ผลของการรักษาที่แตกต่างกันและวัฒนธรรมที่ถูก
วัดบนพื้นฐานของร้อยละของวัฒนธรรมที่แสดงให้เห็นถึงการตอบสนอง
สำหรับการสร้างยอดหลาย ๆ .
yusuf ตอัล 1195

เคยชินกับสภาพในหลอดทดลองต้นรากของข หอก (รูป 1e) ถูกถอดออก
จากสูตร MS ที่มั่นคงและรากถูกล้างภายใต้
ใช้น้ำประปาเพื่อเอา​​วุ้นที่เหลือ แต่ละต้นพันธุ์จากนั้นก็
ปลูกลงกระถางที่มีส่วนผสมของดินอินทรีย์และทราย (1:1)
โดยไม่ต้องถูกแสงแดดโดยตรง เปอร์เซ็นต์ของต้นที่รอดตายเป็น
บันทึกหลังจากสี่สัปดาห์ของการถ่ายโอน.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จัดเข้มข้น explants
ซื้อเหง้าผู้ใหญ่ของเหลี่ยมเกิดจากสมุนไพรจำหน่าย
ที่ตลาดท้องถิ่นในกัวลาลัมเปอร์ มาเลเซีย เหง้าได้
ทำความสะอาด และ rinsed ด้วย เหง้าทำความสะอาดแล้วไว้ใน
คอนเทนเนอร์เปิดให้ถ่ายภาพงอก 2-4 ซม.ยาว
อาหาร sprouting เก็บ และล้าง ด้วย 20% (v/v)
clorox สำหรับ 15 นาที ภายใต้เงื่อนไขที่เข้มข้น ถ่ายภาพได้ผิว
sterilized ด้วย 0.5% (w/v) ละลายของ mercuric chloride
(HgCl2) ห้านาที และตาม ด้วย rinses สามใน
น้ำกลั่นฆ่าเชื้อ อาหารยิงมีใบไม้ของภายนอก
เอาออก และตัดลงจนอยู่ในขนาดที่ช่วงจาก 0.5 ถึง 0.8
มม. และใช้เป็น explants (รูป 1A ถึง C) พวกแล้ว
inoculated ลงในขวดแก้ว 350 มล.ประกอบด้วย MS (Murashige และ
Skoog, 1962) สื่อเสริม ด้วยซูโครส 30.0 g/l และ 2.0
gelrite g/l สำหรับ 30 วัน PH ของตัวกลางถูกปรับปรุง 5.7
ก่อน autoclaving ที่ 121 ° C สำหรับ 21 min วัฒนธรรมถูก
เก็บรักษาในห้องวัฒนธรรม h 16/8 ชั่วโมง (มืดแสง) ที่
25 ± 2 องศาเซลเซียส หลังจาก 30 วัน อาหารเข้มข้นชนิดนี้ได้
โอนย้ายไปยัง MS กลางเสริม ด้วย 3.0 mg/l BAP และ
0.5 mg/l NAA สื่อที่เหมาะสมเป็นสูตรสำหรับอื่น ๆ
พันธุ์วงศ์ขิงโดยยูซุฟ et al. (2007) สำหรับยิงคูณ
4 (4) สัปดาห์ (รูปที่ 1D) ถ่ายภาพหลายที่ผลิตได้
แยก และโอนเข้ากลาง MS ปราศจากพืชเจริญเติบโต
เร็คกูเลเตอร์สำหรับสัปดาห์ที่สี่ (4) และใช้สำหรับทั้งหมดต่อมา
ทดลอง
เหนี่ยวนำของถ่ายภาพหลาย
ยิงแยกอาหารถูก inoculated ไปยัง MS (Murashige และ
Skoog, 1962) กลางประกอบด้วยซูโครส 30.0 g/l และ gelrite 2.0 g/l
เป็นแข็งตัวแทนเสริม ด้วย cytokinins (6-benzylaminopurine
(BAP)) ตั้งแต่ 0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 และ 5.0 mg/l
และออกซิน (α-naphthaleneacetic กรด (NAA)) ตั้งแต่ 0.0, 0.5,
1.0 และ 2.0 mg/l สำหรับคูณยิง ถูกยิงที่เดียว
อ่างขวดแก้วละ 350 มล.และ 10 หน่วยทดลองได้
ใช้สำหรับแต่ละขนาดรวมกัน
Scoring ข้อมูล
วัฒนธรรมทั้งหมดถูกตรวจสอบเป็นระยะ ๆ และสัณฐานที่
บันทึกการเปลี่ยนแปลงตามสังเกตภาพ และ
เกิดขึ้นหลังจากหนึ่งถึงสี่สัปดาห์ของวัฒนธรรมสำหรับสี่ติดต่อกัน
subcultures มีวัฒนธรรม 10 ต่อรักษาคูณยิง
และ subculturing ถูกดำเนินการในช่วงของสี่
สัปดาห์ มีลักษณะพิเศษแตกต่างกันและ subcultures
quantified ตามเปอร์เซ็นต์ของวัฒนธรรมที่แสดงตอบสนอง
สำหรับหลายหน่อก่อ
al. ร้อยเอ็ดยูซุฟ 1195
Acclimatization
plantlets rooted ในของเกิดเหลี่ยม (รูปที่ 1E) ออก
จาก MS แข็ง ปานกลางและรากถูกล้างใต้
ทำน้ำประปาเอา agar ที่เหลือ Plantlet ละถูกแล้ว
ปลูกลงในกระถางที่ประกอบด้วยส่วนผสมของดินอินทรีย์และทราย (1:1)
โดยแสงแดดโดยตรง มีเปอร์เซ็นต์การรอดตาย plantlets
บันทึกหลังจาก 4 สัปดาห์ของการโอนย้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การจัดตั้ง explants aseptic
, Rhizomes สำหรับผู้ที่ บรรลุนิติภาวะ แล้วของหลังคาทรงกลม B .ได้ซื้อจากผู้จัดให้บริการ ผลิตภัณฑ์ สมุนไพร
ที่ตลาดท้องถิ่นในกรุงกัวลาลัมเปอร์ประเทศมาเลเซีย , Rhizomes ได้
ซึ่งจะช่วยทำความสะอาดและล้างทำความสะอาด ให้ทำความสะอาด, Rhizomes อยู่แล้ววางในที่
ซึ่งจะช่วยเปิดให้บริการ ภาชนะ บรรจุให้ยิงประตูในการงอกสองถึงสี่ซม.ในความยาว.
ที่ขนอ่อนเอียร์บัดจะถูกรวบรวมและล้างด้วย 20% ( v / v )
clorox สำหรับ 15 นาทีตาม aseptic เงื่อนไข,ยิงประตูมีพื้นผิว
ฆ่าเชื้อได้พร้อมด้วย 0.5% ( v w /)โซลูชันที่เกิดจากน้ำของโซลูชัน
( hgcl 2 )คลอไรด์ซึ่งมาจากปรอทห้านาทีและตามด้วยล้างน้ำกลั่นใน
ซึ่งจะช่วยฆ่าเชื้อขวดนม เอียร์บัดถ่าย ภาพ ที่ได้ออกจาก ภายนอก ของพวกเขา
ซึ่งจะช่วยถอดออกและหั่นเป็นท่อนขนาดลงจนกว่าจะออกจาก 0.5 ถึง 0.8
มม.และใช้เป็น explants (รูปที่ 1 C ) พวกเขาก็แล้ว
ตามมาตรฐานinoculated เข้าสู่ 350 มล.โถปั่นแก้วที่มี MS ( murashige และ
skoog , 1962 )ขนาดกลางและเสริมด้วย 30.0 กรัม/ L ซูโครสและ 2.0
G / L gelrite สำหรับ 30 วัน. ค่า pH ของที่มีขนาดกลางมีการปรับถึง 5.7
ก่อน autoclaving ที่ 121 ° C สำหรับ 21 นาทีที่วัฒนธรรมมี
ซึ่งจะช่วยได้รับการดูแลรักษาเป็นอย่างดีในห้องที่พร้อมด้วยวัฒนธรรมที่ 16/8 H photoperiod (ไฟ/สีเข้ม)ที่
25 ± 2 ° C หลังจาก 30 วันสำหรับอาหาร aseptic ของสายพันธุ์นี้มี
ตามมาตรฐานจะพาท่านไปส่งยังเสริมขนาดกลาง ms ด้วย, BAP 3.0 มก./ลิตรและ
NAA 0.5 มก./ L มีขนาดกลางที่เหมาะสมเป็นสูตรสำหรับสายพันธุ์
ทิ้งใบร่วงแล้วพืชตามทุ่งหญ้าอื่นๆโดย yusuf et al . ( 2007 )สำหรับ D สำหรับสี่( 4 )สัปดาห์(รูปที่ 1 คูณ
ซึ่งจะช่วยถ่าย ภาพ ) ยิงประตูได้หลายที่ผลิตได้
ซึ่งจะช่วยแยกออกจากกันและจะพาท่านไปส่งยังไร้ผู้ควบคุมกฎของการขยายตัวโรงงาน
ขนาดกลางมิลลิวินาทีสำหรับผู้ใช้บริการสี่( 4 )หลายสัปดาห์แล้วและได้ถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองทั้งหมดต่อมา
.
เตาแม่เหล็กไฟฟ้าของหลายหน่อ
แยกชิ้นใดยิงได้ inoculated เข้ากับมิลลิวินาที( murashige และ
skoog , 1962 )ขนาดกลางที่มี 30.0 กรัม/ L ซูโครสและ 2.0 กรัม/ L gelrite
agent เป็นขึ้นช่วยกระชับและเสริมด้วย cytokinins ( 6 - benzylaminopurine
(, BAP ))ตั้งแต่ 0.0 , 0.5 , 1.0 , 2.0 , 3.0 และ 5.0 มก./ L
และ auxin (กล้อง - naphthaleneacetic กรด( NAA ))ตั้งแต่ 0.0 , 0.5 ,
1.0 และ 2.0 มก./ลิตร,สำหรับถ่าย ภาพ คูณ.ที่เดียวยิงได้
ทางวัฒนธรรมในแต่ละโถปั่นแก้ว 350 มล.และ 10 ทดลองมี
ซึ่งจะช่วยนำไปใช้สำหรับแต่ละขนาดกลางผสมผสาน.

ซึ่งจะช่วยให้คะแนนการร้องของข้อมูลทั้งหมดเป็นวัฒนธรรมตรวจสอบเป็นระยะๆและที่เกี่ยวกับวิชาว่าด้วยรูปร่างลักษณะ
ซึ่งจะช่วยการเปลี่ยนแปลงมีการบันทึกที่เป็น ภาพ ของการสังเกตการณ์และ
ซึ่งจะช่วยทำให้ได้หลังจากหนึ่งถึงสี่สัปดาห์ของวัฒนธรรมสำหรับผู้ใช้บริการสี่ครั้งต่อเนื่องกัน
ทัศนะ.มีอยู่ 10 วัฒนธรรมต่อการปฏิบัติสำหรับถ่าย ภาพ การคูณ
และ subculturing ก็ถูกหามออกมาในช่วงเวลาหนึ่งในสี่
สัปดาห์ ผลของการบำบัดที่แตกต่างกันและทัศนะ
ซึ่งจะช่วยได้คำนวณออกมาเป็นรูปธรรมได้หรืออยู่บนพื้นฐานที่เป็นเปอร์เซ็นต์ของวัฒนธรรมการแสดงการตอบสนอง
ซึ่งจะช่วยให้ยิงประตูได้หลายรูปแบบ.
yusuf et al . 1195

ซึ่งจะช่วยทำให้เคยชินกับอากาศ plantlets ใน Vitro หยั่งรากลึกของหลังคาทรงกลม B (รูปที่ 1 )ได้ถูกลบออก
จากที่มีขนาดกลางและรากมีล้างใต้
น้ำแตะเพื่อลบสาหร่ายทะเลส่วนที่เหลือ plantlet แต่ละครั้งก็ปลูกลงในหม้อที่มีส่วนผสมของหาดทรายและดินอินทรีย์( 1 : 1 )
ไม่มีแสงแดดโดยตรงแล้ว
เปอร์เซ็นต์ของส่วนประกอบ Ancient Wonders ที่ยังคงหลงเหลืออยู่เป็น plantlets
ที่บันทึกหลังจากสี่สัปดาห์ของการโอน.