2.6. Assay of cell wall softening e

2.6. Assay of cell wall softening enzymes: polygalacturonase (PG),
pectin methylesterase (PME), pectate lyase (PL) and cellulase (CX)
Fruit ripening is closely related to the cell wall softening related
enzymes including PG, PME, PL and CX. The activities of these
enzymes were determined as described by Guo et al. (2014) and
Zhang et al. (2010).
2.7. Extraction and assay of ACC synthase (ACS) activity
The homogenate (1 g pulp tissue) was prepared in extraction
buffer as described as Kato et al. (2000). One gram frozen pulp
24 X. Zhu et al. / Postharvest Biology and Technology 107 (2015) 23–32
tissue were homogenized with a mortar and pestle in 3 mL of
extraction buffer (0.1 M EPPS-KOH buffer, pH 8.5, 10 mM
2-mercaptoethanol, and 10 mM pyridoxal phosphate) at 4 C. The
homogenate was centrifuged at 25,000

g for 20 min at 4 C. The
supernatant was desalted by passing through PD-10 column
(Amersham Pharmacia Biotech) with 10 mM EPPS-KOH buffer, pH
8.5, containing 10 mM 2-mercaptoethanol and 10 mM pyridoxal
phosphate. The eluent was assayed for ACC synthase activity in a
reaction mixture consisting of 50 mM EPPS-KOH buffer, pH 8.5,
50 mM SAM, and the enzyme preparation with a total volume of
1 mL. The reaction mixture was incubated for 30 min at 30 C and
then the reaction was stopped by adding 0.2 mL of 10 mM HgCl2.
ACC formed in the reaction was assayed by the method of Lizada
and Yang (Concepcion et al., 1979). ACS activity was expressed as
the ethylene production in the reaction (milligram per kilogram
per second).
2.8. Extraction and assay of ACC oxidase (ACO) activity
The ACO activity was measured in vitro. The homogenate (1 g
pulp tissue) was prepared in extraction buffer as described by Kato
et al. (2000) with some modifications. 1 g frozen pulp tissue were
homogenized in 4 mL of extraction buffer (0.1 M Tris-HCl, pH 7.2,
5 mM dithiothreitol, 30 mM Na-ascorbate, and 10% glycerol (v/w))
at 2 C. The homogenate was
filtered by 2 layers of cotton gauze
and then centrifuged at 20,000

g for 20 min at 4 C. The
supernatant was used for assay of ACO. ACO activity was measured
as described by Moya-Leon and John, (1994). ACO activity was
expressed as the ethylene production in the reaction (milligram
per kilogram per second).
2.9. Analysis of volatile compounds
The extraction and analysis of volatile compounds were
described as Zhu et al. (2010).
2.10. Statistical analysis
Experiments were arranged using a completely randomized
design. Data were analyzed by analysis of variance (ANOVA) using
SPSS version 16.0. Duncan’s multiple range tests (P < 0.05) were
used to compare differences among mean values.
3. Results
3.1. The effect of ethephon+1-MCP treatment on banana fruit
As shown in Fig. 1A, all 1-MCP treatments could delay the
ripening of banana fruit. Among the treatments, 400 and 600 nL
L
1 1-MCP treatments had a similar effect and better than
200 nL L
1 1-MCP treatment, which could significant delay the
ripening of banana fruit. However, fruit treated by 600 nL L
1 1-
MCP could not ripen regularly, and the peel did not turn yellow
completely, even treated by ethephon at the 14th day. A 1-MCP
treatment of 400 nL L
1 delayed fruit ripening better than 600 nL
L
1 1-MCP.
Although 400 nL L
1 1-MCP performed best among the treatments
and significantly delayed fruit ripening, the fruit peel still
turned yellow unevenly. Therefore, ethephon treatments were
employed to solve this problem. As shown in Fig. 1B and C, the
different ethephon+1-MCP treatments were conducted to maintain
fruit quality. Among the three treatments, 50 mL L
1 ethephon
+ 400 nL L
1 1-MCP treatment was the best combination
treatment. Fruit treated by 400 nL L
1 1-MCP turned soft regularly
but did not turn yellow normally. 100 mL L
1 + 400 nL L
1 1-MCP
treatment had a relatively quick ripening rate. Therefore, 50 mL L
1
ethephon + 400 nL L
1 1-MCP treatment was selected as the
optimal treatment for this study.
3.2. The effect on fruit ripening
As shown in Fig. 2A, fruit treated by 1-MCP only showed
delayed ripening but did not turn yellow regularly. Ethephon + 1-

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การทดสอบของผนังเซลล์อ่อนเอนไซม์: polygalacturonase (PG),เพกทิน methylesterase (PME), pectate lyase (PL) และ cellulase (CX)ผลไม้สุกเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับผนังเซลล์อ่อนที่เกี่ยวข้องเอนไซม์ PG, PME, PL และ CX กิจกรรมเหล่านี้เอนไซม์ถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้โดย Guo et al. (2014) และZhang et al. (2010)2.7 การสกัดและวิเคราะห์กิจกรรม ACC synthase (ACS)Homogenate (เนื้อเยื่อเยื่อ 1 กรัม) ถูกเตรียมสกัดบัฟเฟอร์ที่อธิบายเป็นคา et al. (2000) หนึ่งกรัมแช่เยื่อ24 X. Zhu ร้อยเอ็ด / ชีววิทยาและ 107 เทคโนโลยีหลังการเก็บเกี่ยว (2015) 23 – 32เนื้อเยื่อถูก homogenized มีครกและสากใน 3 mLแยกบัฟเฟอร์ (0.1 M EPPS-เกาะบัฟเฟอร์ pH 8.5, 10 มม.2-mercaptoethanol และ 10 มม. pyridoxal ฟอสเฟต) ที่ c 4homogenate ถูกเหวี่ยงที่ 25,000g 20 นาทีที่ 4 csupernatant ถูก desalted โดย PD-10 คอลัมน์(Amersham เทคโนโลยีชีวภาพ Pharmacia) มีบัฟเฟอร์ 10 มม. EPPS-เกาะ วัดค่า pH8.5, pyridoxal 10 มม.และ 10 มม. 2-mercaptoethanolฟอสเฟต Eluent ถูก assayed ACC synthase กิจกรรมในการประกอบด้วยบัฟเฟอร์ 50 มม. EPPS-เกาะ วัดค่า pH 8.5 ส่วนผสมของปฏิกิริยา50 มม. SAM และการเตรียมเอนไซม์ มีปริมาณรวมของ1 mL ส่วนผสมของปฏิกิริยาได้รับการกก 30 นาทีที่ 30 C และแล้ว หยุดปฏิกิริยา โดยเพิ่ม 10 mM HgCl2 0.2 มิลลิลิตรACC ที่เกิดขึ้นในปฏิกิริยาถูก assayed โดยวิธีการ Lizadaและยาง (Concepcion et al. 1979) กิจกรรม ACS ถูกแสดงเป็นการผลิตเอทิลีนในปฏิกิริยา (มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมต่อวินาที)2.8 การสกัดและวิเคราะห์กิจกรรม ACC oxidase (พูดคุยใน)กิจกรรมพูดคุยในการถูกวัดในหลอดทดลอง Homogenate (1 กรัมเยื่อกระดาษเยื่อ) จัดเตรียมในบัฟเฟอร์สกัดตามที่อธิบายไว้ โดยคาร้อยเอ็ด (2000) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ได้แช่แข็งเนื้อเยื่อเยื่อ 1 กรัมhomogenized ในบัฟเฟอร์สกัด 4 mL (0.1 M HCl ทริ ค่า pH 7.25 มม. dithiothreitol, 30 มม. ascorbate นา และกลีเซอรอล 10% (v/w))ที่ 2 c Homogenate ถูกกรอง ด้วยผ้าฝ้าย 2 ชั้นแล้ว เหวี่ยงที่ 20,000g 20 นาทีที่ 4 csupernatant ถูกใช้สำหรับการทดสอบการพูดคุยใน พูดคุยในกิจกรรมที่มีวัดตามที่อธิบายไว้ โดย Moya ลีออนและจอห์น, (1994) ได้พูดคุยในกิจกรรมแสดงเป็นการผลิตเอทิลีนในปฏิกิริยา (มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมต่อวินาที)2.9 การวิเคราะห์สารที่ระเหยการสกัดและวิเคราะห์สารที่ระเหยได้อธิบายเป็นซู et al. (2010)2.10. สถิติวิเคราะห์การทดลองถูกจัดการโดยใช้การสุ่มอย่างสมบูรณ์การออกแบบ มีวิเคราะห์ข้อมูล โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA)SPSS รุ่น 16.0 หลายช่วงทดสอบของดันแคน (P < 0.05) ได้ใช้ในการเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่างค่าเฉลี่ย3. ผลลัพธ์3.1. ผลของ ethephon + 1-MCP รักษาผลไม้กล้วยดังแสดงในรูป 1A ทั้งหมด 1-MCP สามารถชะลอการการสุกของผลไม้กล้วย ระหว่างรักษา nL 400 และ 600L 1 ทรีทเมนท์ 1-MCP มีลักษณะคล้ายกัน และดีกว่า200 nL L รักษา 1-MCP 1 ซึ่งอาจล่าช้าอย่างมีนัยสำคัญการสุกของผลไม้กล้วย อย่างไรก็ตาม ผลไม้รักษา โดย 600 nL L 1 1-MCP จะสุกอย่างสม่ำเสมอ และเปลือกไม่เปิดสีเหลืองอย่างสมบูรณ์ แม้รักษา โดย ethephon ที่วัน 14 1-MCPรักษา 400 nL L 1 ล่าช้าผลไม้สุกดีกว่า 600 nLL 1 1-MCPแม้ว่า 400 nL L 1 1-MCP ทำดีในการรักษาและล่าช้ามากผลไม้ที่สุก ผลไม้เปลือกยังคงใช้สีเหลืองเป็นงาน ดังนั้น ethephon รักษาได้มาใช้ในการแก้ปัญหานี้ ดังแสดงในรูป 1B และ C การethephon แตก + ทรีทเมนท์ 1-MCP ได้ดำเนินการเพื่อรักษาคุณภาพของผลไม้ ระหว่างการรักษา 3, 50 mL ethephon L 1+ 400 nL L รักษา 1-MCP 1 เป็นชุดที่ดีที่สุดการรักษา ผลไม้รักษา โดย 400 nL L 1 1-MCP เปิดน้ำอัดลมเป็นประจำแต่ไม่เปิดสีเหลืองตามปกติ 100 มิลลิลิตร L 1 + 400 nL L 1 1-MCPการรักษามีอัตราสุกค่อนข้างรวดเร็ว ดังนั้น 50 mL L 1ethephon + 400 nL L เลือกรักษา 1-MCP 1 เป็นการการรักษาที่เหมาะสมสำหรับการศึกษานี้3.2. ผลผลไม้สุกดังแสดงในรูป 2A ผลไม้รักษา โดย 1-MCP เพียงพบล่าช้าสุก แต่ไม่เปิดสีเหลืองเป็นประจำ Ethephon + 1-

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 Assay ของเอนไซม์ผนังเซลล์อ่อน: polygalacturonase (PG)
methylesterase เพคติน (PME) pectate ไอเลส (PL) และเซลลูเลส (CX)
ผลไม้สุกที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับผนังเซลล์อ่อนที่เกี่ยวข้องกับ
เอนไซม์รวมทั้ง PG, PME, PL และ CX กิจกรรมเหล่านี้
เอนไซม์ได้รับการพิจารณาตามที่อธิบาย Guo et al, (2014) และ
Zhang et al, (2010).
2.7 การสกัดและการทดสอบของแม็กเทส (ACS) กิจกรรม
homogenate (เนื้อเยื่อ 1 กรัม) ถูกจัดทำขึ้นในการสกัด
บัฟเฟอร์ตามที่อธิบายไว้เป็น Kato, et al (2000) หนึ่งกรัมแช่แข็งเยื่อกระดาษ
24 X. จู้ et al, / หลังการเก็บเกี่ยวชีววิทยาและเทคโนโลยี 107 (2015) 23-32
เนื้อเยื่อถูกปั่นด้วยครกและสาก 3 มล
บัฟเฟอร์สกัด (0.1 M-EPPS KOH บัฟเฟอร์พีเอช 8.5, 10 มิลลิ
2 mercaptoethanol และ 10 มมฟอสเฟต pyridoxal) ที่ 4? C
homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 25,000
?
กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส
ใสถูก desalted โดยผ่าน PD-10 คอลัมน์
(Amersham Pharmacia ไบโอเทค) กับบัฟเฟอร์ขนาด 10 MM-EPPS เกาะพีเอช
8.5 ที่มีขนาด 10 MM 2 mercaptoethanol และ 10 มิลลิ pyridoxal
ฟอสเฟต ชะได้รับการวิเคราะห์กิจกรรมที่เทสแม็กใน
ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 50 มิลลิบัฟเฟอร์ EPPS-เกาะพีเอช 8.5,
ขนาด 50 มม SAM และการเตรียมเอนไซม์ที่มีปริมาณรวมของ
1 มิลลิลิตร ผสมปฏิกิริยาถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีวันที่ 30 องศาเซลเซียสและ
จากนั้นปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่ม 0.2 มล 10 มิลลิเมตร HgCl2.
แม็กรูปแบบในการทำปฏิกิริยาได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี Lizada
และหยาง (คอนเซ็ป et al., 1979) กิจกรรมเอซีเอสได้รับการแสดงเป็น
การผลิตเอทิลีนในการทำปฏิกิริยา (มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม
ต่อวินาที).
2.8 การสกัดและการทดสอบของ ACC oxidase (ACO) กิจกรรม
กิจกรรม ACO วัดในหลอดทดลอง homogenate (1 กรัม
เนื้อเยื่อ) ถูกจัดทำขึ้นในบัฟเฟอร์สกัดตามที่อธิบาย Kato
, et al (2000) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง 1 กรัมแช่แข็งเนื้อเยื่อถูก
ปั่นใน 4 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์สกัด (0.1 M Tris-HCl พีเอช 7.2,
5 มิลลิ dithiothreitol, 30 มิลลิเมตรนา ascorbate และกลีเซอรีน 10% (v / w))
ที่ 2? C homogenate ถูก
กรองโดย 2 ชั้นของผ้ากอซฝ้าย
แล้วหมุนเหวี่ยงที่ 20,000
?
กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส
สารละลายที่ใช้สำหรับการทดสอบของ ACO กิจกรรม ACO วัด
ตามที่อธิบาย Moya-Leon และจอห์น (1994) กิจกรรม ACO ถูก
แสดงเป็นผลิตเอทิลีในการทำปฏิกิริยา (มิลลิกรัม
ต่อกิโลกรัมต่อวินาที).
2.9 การวิเคราะห์สารระเหย
สกัดและการวิเคราะห์สารระเหยถูก
อธิบายว่าจู้ et al, (2010).
2.10 การวิเคราะห์สถิติ
การทดลองจัดโดยใช้สุ่มสมบูรณ์
การออกแบบ วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) โดยใช้
โปรแกรม SPSS เวอร์ชัน 16.0 ดันแคนทดสอบช่วงหลาย ๆ (P <0.05) ถูก
ใช้ในการเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่างค่าเฉลี่ย.
3 ผลการค้นหา
3.1 ผลของการรักษา Ethephon + 1-MCP ผลไม้กล้วย
ดังแสดงในรูป 1A ทุกการทดลองที่ 1-MCP สามารถชะลอการ
สุกของผลไม้กล้วย ท่ามกลางการรักษา, 400 และ 600 nL
L? 1 รักษา 1-MCP มีผลที่คล้ายกันและดีกว่า
200 nL L? 1 รักษา 1-MCP ซึ่งอาจมีนัยสำคัญล่าช้า
สุกของผลไม้กล้วย แต่ผลไม้ที่ได้รับการรักษาโดย 600 nL L? 1 1-
MCP ไม่สามารถทำให้สุกอย่างสม่ำเสมอและเปลือกไม่ได้เปลี่ยนเป็นสีเหลือง
สมบูรณ์ได้รับการรักษาได้โดย Ethephon ในวันที่ 14 1-MCP
รักษา 400 nL L? 1 ล่าช้าผลไม้สุกดีกว่า 600 nL
L? 1 1-MCP.
แม้ว่า 400 nL L? 1 1-MCP ดำเนินการที่ดีที่สุดในการรักษา
และความล่าช้าอย่างมีนัยสำคัญผลไม้สุกเปลือกผลไม้ยังคง
หัน สีเหลืองไม่สม่ำเสมอ ดังนั้นการรักษา Ethephon ถูก
ใช้ในการแก้ปัญหานี้ ดังแสดงในรูป 1B และ C ที่
Ethephon รักษา + 1-MCP ที่แตกต่างกันได้ดำเนินการเพื่อรักษา
คุณภาพของผล หนึ่งในสามรักษา 50 มล L? 1 Ethephon
+ 400 nL L? 1 รักษา 1-MCP เป็นชุดที่ดีที่สุด
การรักษา ผลไม้ได้รับการรักษาโดย 400 nL L? 1-MCP 1 หันนุ่มเป็นประจำ
แต่ไม่ได้เปลี่ยนเป็นสีเหลืองตามปกติ 100 มล L? 1 + 400 nL L? 1-MCP 1
รักษามีอัตราการสุกค่อนข้างรวดเร็ว ดังนั้น 50 มล L? 1
Ethephon + 400 nL L? 1 รักษา 1-MCP ได้รับเลือกเป็น
การรักษาที่ดีที่สุดสำหรับการศึกษานี้.
3.2 ผลกระทบต่อผลไม้สุก
ดังแสดงในรูป 2A ผลไม้ได้รับการรักษาโดย 1-MCP แสดงให้เห็นเพียง
สุกล่าช้า แต่ไม่ได้เปลี่ยนเป็นสีเหลืองอย่างสม่ำเสมอ Ethephon + 1-