electrode. A 0.1 M phosphate buffer solution was used to gently
rinse the biosensor and remove those of the glutaraldehyde molecules,
which did not react with the polymeric matrix.
In the second procedure FDH was directly wired into the Ospolymer
hydrogel. This method involved a thorough mixing of
10
lL of a solution of the Os-polymer (10 mg/ml) in Milli-Q water,
1
lL of an aqueous solution of PEDGE (2.5 mg/mL) and 10 lLofa
solution of FDH (10 U). Successively, a 10
lL aliquot of this solution
was deposited on the CNTP electrode surface and left to dry overnight
at room temperature (Antiochia & Gorton, 2007). The modified
electrode was rinsed carefully with 0.1 mol/L phosphate buffer
at pH 7.0 before use. A schematic representation of the wiring of
FDH through the Os-polymer redox hydrogel on the CNTP electrode
is shown in Fig. 1.
2.4. Electrochemical characterization
Electrochemical measurements were performed using an Autolab
electrochemical system equipped with PGSTS-12 with GPES
software (Eco Chemie, Utrecht, The Netherlands). All electrochemical
experiments were carried out in a conventional three-electrode
cell at room temperature with the modified CNTP electrode
(3 mm diameter) as working electrode, an Ag|AgCl/KCl(sat) as the
reference and a platinum wire as the counter electrode. The electrochemical
cell contained 10 mL of 0.1 M phosphate buffer or
0.1 M acetate buffer at various pHs. A fixed potential, +200 mV versus
Ag|AgCl, was used to make the amperometric experiments.
2.5. Biosensor response
For fructose determinations aliquots of a stock solution of
D-fructose in 0.1 M acetate buffer at pH 5.0 were successively
added in the electrochemical cell and the steady-state current values
were recorded. The steady-state current was achieved within
20–25 s.
2.6. Analysis of food samples
The fructose biosensor was tested for the analysis of food samples
like honey and some beverages, like fruit juice, soft and energy
drinks, purchased from local supermarkets. Fructose concentra-
tions in real samples were determined in five replicates on the basis
of the calibration curve obtained for the standard fructose
solution. The results obtained were compared with those obtained
with the enzymatic spectrophotometric assay kit (Mannheim,
Germany, Cat.N. 139106). The determination of fructose is related
to the amount of NADPH formed and spectrophotometrically mea-
sured at 340 nm. Honey and beverage samples did not require any
pretreatment. The honey samples were diluted as follows: 1 g of
อิเล็กโทรด แก้ไขปัญหาบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.1 M ใช้เบา ๆล้าง biosensor และลบของโมเลกุล glutaraldehydeซึ่งไม่ได้ตอบสนองกับเมทริกซ์พอลิเมอในขั้นตอนสอง FDH ได้ตรงสายเข้า Ospolymerhydrogel วิธีการนี้เกี่ยวข้องกับตัวอย่างการผสมของ10จะแก้ไขปัญหาของการปฏิบัติพอลิเมอร์ (10 mg/ml) ในน้ำ Q1จะของการละลายของ PEDGE (2.5 mg/mL) และ 10 lLofaโซลูชั่น FDH (10 U) ติด ๆ กัน 10ส่วนลงตัวจะของโซลูชันนี้มีฝาก CNTP พื้นผิวอิเล็กโทรดและซ้ายให้แห้งข้ามคืนที่อุณหภูมิห้อง (Antiochia & Gorton, 2007) Modifiedอิเล็กโทรดถูก rinsed อย่างระมัดระวังกับ 0.1 โมล/L ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 7.0 ก่อนใช้ การนำเสนอสายของมันFDH ผ่าน hydrogel redox Os-พอลิเมอร์ในอิเล็กโทรด CNTPจะแสดงใน Fig. 12.4 การไฟฟ้าจำแนกดำเนินการวัดทางเคมีไฟฟ้าโดยใช้การ Autolabระบบไฟฟ้าพร้อม PGSTS-12 กับ GPESซอฟต์แวร์ (Eco Chemie อูเทรคต์ ประเทศเนเธอร์แลนด์) ไฟฟ้าทั้งหมดทดลองได้ดำเนินการไฟฟ้าสามธรรมดาเซลล์ที่อุณหภูมิห้องกับอิเล็กโทรด CNTP modified(เส้นผ่าศูนย์กลาง 3 มิลลิเมตร) เป็นอิเล็กโทรดทำงาน การ Ag| AgCl/KCl(sat) เป็นการอ้างอิงและลวดแพลทินัมเป็นอิเล็กโทรดตัวนับ การไฟฟ้าเซลล์อยู่ 10 mL ของบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.1 M หรือ0.1 บัฟเฟอร์ acetate M ที่ pHs ต่าง ๆ fixed มีศักยภาพ, + 200 mV เมื่อเทียบกับAg|AgCl, was used to make the amperometric experiments.2.5. Biosensor responseFor fructose determinations aliquots of a stock solution ofD-fructose in 0.1 M acetate buffer at pH 5.0 were successivelyadded in the electrochemical cell and the steady-state current valueswere recorded. The steady-state current was achieved within20–25 s.2.6. Analysis of food samplesThe fructose biosensor was tested for the analysis of food sampleslike honey and some beverages, like fruit juice, soft and energydrinks, purchased from local supermarkets. Fructose concentra-tions in real samples were determined in five replicates on the basisof the calibration curve obtained for the standard fructosesolution. The results obtained were compared with those obtainedwith the enzymatic spectrophotometric assay kit (Mannheim,Germany, Cat.N. 139106). The determination of fructose is relatedto the amount of NADPH formed and spectrophotometrically mea-sured at 340 nm. Honey and beverage samples did not require anypretreatment. The honey samples were diluted as follows: 1 g of
การแปล กรุณารอสักครู่..
