Microbiologic InvestigationRNA was

Microbiologic Investigation
RNA was extracted from 10 mg of the placenta,lungs, heart, skin, spleen, thymus, liver, kidneys,and cerebral cortex with the use of a TRIzol Plus RNA purification kit (Thermo Fisher Scientific).
Real-time RT-PCR for the detection of ZIKV RNA (NS5) and one-step RT-PCR for the detection of the envelope-protein coding region (360 bp) were performed as described previously.7,8 In addition,next-generation sequencing was performed in samples of fetal brain tissue with the use of Ion Torrent (Thermo Fisher Scientific) and Geneious software, version 9.0.6. Reads from both runs were combined and mapped to the reference sequence (ZIKV MR766; LC002520) with the use
of default measures. For phylogenetic analysis, complete-genome ZIKV sequences were used, and
multiple sequence alignments (ClustalW) were
performed. A neighbor-joining phylogenetic tree
(GTR+G+I model) was constructed, with the use
of the MEGA6 software system,9 to show the
phylogenetic relationships. The nucleotide sequence
of ZIKV that was obtained in this study
has been deposited in GenBank under accession
number KU527068. A detailed description of the
molecular methods is provided in the Supplementary
Appendix, available with the full text of
this article at NEJM.org. The results of comprehensive
serologic analyses of maternal serum
and a description of the molecular differential
diagnostic procedures used with fetal tissue
samples are provided in Tables S1 and S2 in the
Supplementary Appendix. All the authors vouch
for the completeness and accuracy of the data
and analyses presented.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจสอบ microbiologicRNA ถูกแยกจาก 10mg ของรก ปอด หัวใจ ผิวหนัง ม้าม ต่อมไทมัส ตับ ไต และสมองด้วยการใช้ชุดฟอก TRIzol บวก RNA (เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์)แบบเรียลไทม์ RT-PCR สำหรับตรวจหาอาร์เอ็นเอ ZIKV (NS5) และขั้นตอนเดียว RT-PCR สำหรับตรวจหาโปรตีนซองจดหมายเข้ารหัสภูมิภาค (360 bp) ดำเนินการเป็น previously.7,8 อธิบายนอกจากนี้ ดำเนินการลำดับยุคในตัวอย่างของเนื้อเยื่อสมองของทารกในครรภ์ด้วยการใช้ Torrent ไอออน (เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์) และซอฟต์แวร์ Geneious รุ่น 9.0.6 อ่านจากทั้งสองทำงานร่วม และแมปไปลำดับการอ้างอิง (ZIKV MR766 LC002520) ด้วยการใช้มาตรการเริ่มต้น สำหรับการวิเคราะห์ผล ลำดับจีโนมที่สมบูรณ์ ZIKV ใช้ และมีหลายลำดับจัด (ClustalW)การดำเนินการ ต้นไม้ทางเพื่อนบ้านเข้าร่วม(รุ่น GTR + G + I) สร้างขึ้น มีการใช้MEGA6 ซอฟต์แวร์ระบบ 9 เพื่อแสดงการความสัมพันธ์ทาง ลำดับนิวคลีโอไทด์ของ ZIKV ที่ได้รับในการศึกษานี้ได้รับฝากไว้ใน GenBank ใต้ภาคยานุวัติหมายเลข KU527068 คำอธิบายโดยละเอียดของการวิธีโมเลกุลเข้าตีนจกมีข้อความเต็มของ ภาคผนวกบทความนี้ที่ NEJM.org ครอบคลุมผลการการวิเคราะห์แอนติเจนของซีรั่มมารดาและคำอธิบายของค่าต่างระดับโมเลกุลใช้กับเนื้อเยื่อทารกตรวจวินิจฉัยที่มีให้ในตาราง S1 และ S2 ในตัวภาคผนวกเสริม ผู้เขียนรับรองถึงสอบความถูกต้องของข้อมูลและการวิเคราะห์ที่นำเสนอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จุลชีววิทยาสืบสวน
RNA ถูกสกัดจาก 10 มิลลิกรัมของรก, ปอด, หัวใจ, ผิวหนังม้ามไธมัส, ตับ, ไตและเยื่อหุ้มสมองสมองที่มีการใช้อาร์เอ็นเอบริสุทธิ์ชุด Trizol พลัส (Thermo Fisher Scientific) ได้.
แบบ Real-time RT- PCR ในการตรวจหา ZIKV อาร์เอ็นเอ (NS5) และขั้นตอนเดียว-RT-PCR ในการตรวจหาซองโปรตีนภูมิภาคเข้ารหัส (360 BP) ที่ถูกดำเนินการตามที่อธิบายไว้ใน previously.7,8 นอกจากนี้รุ่นต่อไปลำดับที่ได้ดำเนินการใน ตัวอย่างของเนื้อเยื่อสมองของทารกในครรภ์ที่มีการใช้ Ion Torrent (Thermo Fisher Scientific) และซอฟต์แวร์ Geneious รุ่น 9.0.6 อ่านจากทั้งสองวิ่งมารวมกันและแมปกับลำดับการอ้างอิง (ZIKV MR766; LC002520) กับการใช้งาน
ของมาตรการการเริ่มต้น สำหรับการวิเคราะห์สายวิวัฒนาการที่สมบูรณ์จีโนมลำดับ ZIKV ถูกนำมาใช้และ
หลายการจัดแนวลำดับ (ClustalW) ได้รับการ
ดำเนินการ เพื่อนบ้านเข้าสู่ต้นไม้สายวิวัฒนาการ
(GTR + G + I Model) ถูกสร้างขึ้นด้วยการใช้งาน
ของระบบซอฟแวร์ MEGA6, 9 เพื่อแสดง
ความสัมพันธ์ phylogenetic ลำดับเบส
ของ ZIKV ที่ได้รับในการศึกษาครั้งนี้
ได้รับการฝากใน GenBank ภายใต้การภาคยานุวัติ
จำนวน KU527068 คำอธิบายรายละเอียดของ
วิธีการโมเลกุลให้ไว้ในเสริม
ภาคผนวกที่สามารถใช้ได้กับเนื้อหาเต็มของ
บทความนี้ที่ NEJM.org ผลของการที่ครอบคลุม
เรื่องเซรุ่มวิเคราะห์ของซีรั่มของมารดา
และคำอธิบายของโมเลกุลที่แตกต่างกัน
ขั้นตอนการวินิจฉัยใช้กับเนื้อเยื่อของทารกในครรภ์
ตัวอย่างได้แสดงไว้ในตาราง S1 และ S2 ใน
เสริมภาคผนวก ผู้เขียนทั้งหมดรับรอง
ความครบถ้วนและความถูกต้องของข้อมูล
และการวิเคราะห์ที่นำเสนอ