Testing for Grapevine leafroll-asso

Testing for Grapevine leafroll-associated virus 1 (GLRaV-1) is mandatory in certification schemes of propagation material within the EU. Accurate and reliable diagnostic assays are necessary for implementation of this measure. During routine detection of GLRaV-1, using double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (DAS-ELISA) and reverse transcription (RT) followed by polymerase chain reaction (PCR), evidence was obtained that positive samples could be overlooked by either or both detection methods. With the aim of improving serological detection tools for GLRaV-1, a total of 20 isolates were analyzed and 83 new complete capsid protein (CP) gene sequences were obtained. This set, together with the CP sequences available at GenBank was used for a comprehensive in silico analysis. To obtain a specific antibody able to recognize all known CP variants, conserved regions with suitable antigenicity profile were identified along the deduced CP AA sequences and a 14 AA sequence was chosen for commercial peptide synthesis and immunization. Initially polyclonal antibodies were produced and tested, followed by purification of the respective monospecific antibody and conjugation with alkaline phosphatase or fluorescein isothiocyanate (FITC). These serological tools were tested successfully on all the available positive samples and proved adequate for in situ immunoassay (ISIA). Further testing showed that the monospecific antibody could also be used in tissue print immunoblotting (TPIB), a technique that allows rapid processing of large sample sets, which is highly suitable to implement protocols ensuring that, for each vine analyzed, enough random samples are taken and processed, before certification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบ Grapevine สัมพันธ์ leafroll ไวรัส 1 (GLRaV-1) เป็นข้อบังคับในแผนงานการรับรองวัสดุเผยแพร่ภายใน EU Assays วินิจฉัยถูกต้อง และเชื่อถือได้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการดำเนินงานของวัดนี้ ในระหว่างการตรวจสอบประจำของ GLRaV-1 คู่ใช้แอนติบอดีแซนด์วิชเอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay (DAS-ELISA) และย้อน transcription (RT) ตาม ด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR), หลักฐานได้รับที่อาจมองข้าม โดยวิธีตรวจสอบอย่างใดอย่างหนึ่ง หรือทั้งสองตัวอย่างบวก มีจุดมุ่งหมายของการพัฒนาเครื่องมือตรวจสอบสภาวะสำหรับ GLRaV-1 จำนวน 20 แยกถูกวิเคราะห์ และ 83 ใหม่สมบูรณ์ capsid โปรตีน (CP) ยีนลำดับได้รับ ชุด พร้อมลำดับ CP ที่ GenBank ถูกใช้สำหรับครอบคลุมใน silico วิเคราะห์ ได้รับแอนติบอดีเฉพาะ CP ย่อยรู้จักทั้งหมดได้ ระบุภูมิภาคที่นำ มี antigenicity เหมาะโปรไฟล์ตามลำดับ CP AA deduced และลำดับ AA 14 ถูกเลือกสำหรับการสังเคราะห์เพปไทด์พาณิชย์และรับวัคซีน แอนตี้ polyclonal เริ่มถูกผลิต และทดสอบ ตาม ด้วยการทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดี monospecific เกี่ยวข้องการ conjugation ด้วยอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสหรือ fluorescein isothiocyanate (FITC) เครื่องมือเหล่านี้สภาวะถูกทดสอบในทั้งหมดมีค่าบวกตัวอย่างเรียบร้อย และพิสูจน์เพียงพอสำหรับใน situ immunoassay (ISIA) ทดสอบเพิ่มเติมพบว่า เนื้อเยื่อพิมพ์ immunoblotting (TPIB), เทคนิคที่ช่วยให้การประมวลผลอย่างรวดเร็วของชุดตัวอย่างขนาดใหญ่ ที่เหมาะจะใช้โปรโตคอลมั่นใจว่า สำหรับไวน์แต่ละวิเคราะห์ พอสุ่มตัวอย่างมา และประมวล ผล ก่อนออกใบรับรอง จะยังใช้แอนติบอดี monospecific

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดสอบสำหรับเกรปไวน์ไวรัส leafroll ที่เกี่ยวข้อง 1 (GLRaV-1) มีผลบังคับใช้ในรูปแบบของวัสดุที่ได้รับการรับรองการขยายพันธุ์ภายในสหภาพยุโรป การตรวจวินิจฉัยที่ถูกต้องและเชื่อถือได้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการดำเนินการตามมาตรการนี​​้ ในระหว่างการตรวจสอบตามปกติของ GLRaV-1 โดยใช้แอนติบอดีเอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโนแซนวิชคู่ (DAS-ELISA) และการถอดรหัสย้อนกลับ (RT) ตามด้วยวิธี polymerase chain reaction (PCR) หลักฐานได้ว่ากลุ่มตัวอย่างที่เป็นบวกอาจจะมองข้ามโดยหนึ่งหรือทั้งสอง วิธีการตรวจสอบ โดยมีวัตถุประสงค์ของการปรับปรุงเครื่องมือตรวจจับทางภูมิคุ้มกันสำหรับ GLRaV-1 จำนวน 20 สายพันธุ์ที่ได้มาวิเคราะห์และ 83 ใหม่โปรตีน capsid สมบูรณ์ (CP) ลำดับยีนที่ได้รับ ชุดนี้ร่วมกับลำดับซีพีที่มีอยู่ใน GenBank ที่ใช้สำหรับการที่ครอบคลุมในการวิเคราะห์ silico ที่จะได้รับแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงสามารถรับรู้สายพันธุ์ซีพีเป็นที่รู้จักในทุกภูมิภาคท​​ี่มีรายละเอียดการอนุรักษ์ antigenicity เหมาะสมถูกระบุตามลำดับซีพีเอเออนุมานและลำดับที่ 14 AA เป็นทางเลือกสำหรับการสังเคราะห์เปปไทด์ในเชิงพาณิชย์และการสร้างภูมิคุ้มกันโรค ตอนแรกแอนติบอดี้โพลีถูกผลิตและทดสอบตามด้วยการทำให้บริสุทธิ์ของแอนติบอดี monospecific ที่เกี่ยวข้องและเชื่อมต่อกันด้วยด่าง phosphatase หรือ fluorescein isothiocyanate (FITC) เครื่องมือเหล่านี้ได้รับการทดสอบทางภูมิคุ้มกันที่ประสบความสำเร็จในทุกตัวอย่างในเชิงบวกที่มีอยู่และได้รับการพิสูจน์ที่เพียงพอสำหรับใน immunoassay แหล่งกำเนิด (Isia) การทดสอบเพิ่มเติมพบว่าแอนติบอดี monospecific ยังสามารถนำมาใช้ในการพิมพ์เนื้อเยื่อ immunoblotting (TPIB) เทคนิคที่ช่วยให้การประมวลผลอย่างรวดเร็วของชุดตัวอย่างที่มีขนาดใหญ่ซึ่งเหมาะอย่างยิ่งที่จะใช้โปรโตคอลการสร้างความมั่นใจว่าสำหรับเถาแต่ละวิเคราะห์ตัวอย่างที่สุ่มพอที่จะได้รับ และประมวลผลก่อนที่จะได้รับการรับรอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทดสอบสำหรับเกรปไวน์ leafroll เกี่ยวข้องไวรัส 1 ( glrav-1 ) เป็นข้อบังคับในการรับรองรูปแบบของวัสดุขยายพันธุ์ภายในสหภาพยุโรป ที่ถูกต้องและเชื่อถือได้สำหรับการตรวจวินิจฉัยเป็นวัดนี้ ในการตรวจหา glrav-1 รูทีนใช้ดับเบิ้ลแอนติบอดีแซนวิช enzyme-linked immunosorbent assay ( das-elisa ) และ reverse transcription ( RT ) ตามด้วยวิธีพีซีอาร์ ( PCR ) หลักฐานได้ว่าตัวอย่างบวกอาจจะมองข้ามโดยการอย่างใดอย่างหนึ่งหรือทั้งสองวิธี โดยมีวัตถุประสงค์ของการปรับปรุงระบบการตรวจสอบเครื่องมือสำหรับ glrav-1 ,จำนวน 20 ไอโซเลตโปรตีนแคปซิด วิเคราะห์และ 83 ใหม่สมบูรณ์ ( CP ) ลำดับยีนที่ได้รับ ชุดนี้ ร่วมกับ ซีพี ลำดับของที่พบถูกใช้ในการวิเคราะห์ที่ครอบคลุมสำหรับ . จะได้รับเฉพาะแอนติบอดีจำทุกสายพันธุ์ซีพีเป็นที่รู้จักบริเวณอนุรักษ์ด้วยเหมาะเจื้อยโปรไฟล์ถูกระบุตามได้ลำดับและ 14 ตามลำดับ CP AA AA ถูกเลือกสำหรับการสังเคราะห์เปปไทด์ เชิงพาณิชย์ และภูมิคุ้มกัน . ตอนแรกใช้แอนติบอดี้ถูกผลิต และทดสอบตามด้วยการ monospecific แอนติบอดี และการเกี่ยวข้องกับอัลคาไลน์ ฟอสฟาเตสไอโซไทโอไซยาเนต ( หรือี่ fitc )เครื่องมือระบบเหล่านี้ถูกทดสอบประสบความสำเร็จในทั้งหมดของบวก ตัวอย่าง และพิสูจน์ให้เพียงพอใน situ Immunoassay ( isia ) การทดสอบเพิ่มเติมพบว่าแอนติบอดี monospecific สามารถใช้ในการพิมพ์ ( เนื้อเยื่อ ) tpib ) เป็นเทคนิคที่ช่วยให้การประมวลผลอย่างรวดเร็วของชุดตัวอย่างขนาดใหญ่ซึ่งมีความเหมาะสมที่จะใช้โปรโตคอลเพื่อให้มั่นใจว่าสำหรับแต่ละเถา วิเคราะห์ แล้วสุ่มตัวอย่างจะได้รับและประมวลผล ก่อนการรับรอง