Aggregation data were collected usi

Aggregation data were collected using a
filtration aggregation 96-well assay. This assay was developed to allow
testing of multiple parameters with replicates in a 96-well plate. Filtration
rigs were built by sandwiching a 50-
m mesh between two pipette tip
racks (Tip One; USA Scientific) and sealing this mesh in place with silicon.
The resultant apparatus was designated a “filtration rig.” The filtration rig
fit neatly in a 96-well plate and retained aggregates on the mesh, while
nonaggregated algal cells (diameter, 2 to 3
m) passed through into the
wells of the microtiter plate. In a typical aggregation experiment, 150
l of
algae at 1  107 cells/ml was pipetted into a round-bottom 96-well plate.
A 100-fold-concentrated bacterial suspension (1.5
l; original density,
1107 cells/ml) was added to the algae in the designated wells to give a 1:1
alga-to-bacterium ratio. Wells not receiving bacteria served as negative
controls for aggregation induced by the addition of bacteria. The plate was
sealed with Parafilm, and the contents were mixed by vortexing for 1 min.
Afiltration rig was placed on a round-bottom 96-well plate, and the 150
l
containing the aggregates was pipetted from the first microtiter plate into
the top of the filtration rig using wide-bore pipette tips. The plate and rig
were centrifuged at 100g for 10 s to ensure that the entire volume in the
rig passed through the mesh into the second, lower 96-well plate. At this
point, the aggregates were retained on the mesh and the nonaggregated
cells had passed into the second plate. The algae in the second plate were
suspended and diluted into the linear range for chlorophyll fluorescence
measurement in a Spectromax M5 microplate reader. Chlorophyll fluorescence
was measured with an excitation wavelength of 488 nm, a 515-
nm-cutoff filter, and an emission wavelength of 685 nm. From these data,
the percentage of algae that had aggregated and remained on the mesh was
calculated from the fluorescence of the algae that were not aggregated
using the formula P[1(A/N)] · 100, where P is the percentage of algae
aggregated, A is the fluorescence of the filtrate from the aggregated sample,
and N is the fluorescence of the filtrate from the nonaggregated
sample.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รวมข้อมูลถูกเก็บรวบรวมใช้เป็นเครื่องกรองรวม 96 ดีทดสอบ ทดสอบนี้ได้รับการพัฒนาให้การทดสอบพารามิเตอร์หลายด้วยเหมือนกับจานดี 96 เครื่องกรองสร้าง โดย sandwiching ตาข่าย 50 m ระหว่างแนะนำสองเปตต์ rigsชั้น (คำแนะนำหนึ่ง ทางวิทยาศาสตร์ของสหรัฐอเมริกา) และปิดผนึกนี้ตาข่ายที่พร้อมผลแก่เครื่องถูกกำหนดเป็น "กรองอุปกรณ์" อุปกรณ์เครื่องกรองพอดีอย่างในจานดี 96 และสะสมผลบนตาข่าย ขณะที่nonaggregated algal เซลล์ (เส้นผ่าศูนย์กลาง ม. 2-3) ผ่านเข้าไปในตัวบ่อจาน microtiter ในการทดลองทั่วไปรวม 150 lสาหร่ายที่ 1 107 เซลล์/ml ถูก pipetted ในจานดี 96 รอบล่าง100-fold-เข้มข้นแบคทีเรียระงับ (1.5 l ความหนาแน่นเดิม1 107 เซลล์/มล.) ถูกเพิ่มสาหร่ายในบ่อกำหนดให้ 1:1อัตราส่วน alga แบคทีเรีย บ่อที่ไม่ได้รับแบคทีเรียทำหน้าที่เป็นค่าลบตัวควบคุมการรวมที่เกิดจากการเพิ่มของแบคทีเรีย จานได้ปิดผนึก ด้วย Parafilm และเนื้อหาถูกผสม โดย vortexing ใน 1 นาทีAfiltration เสื้อผ้าวางอยู่บนจานดี 96 รอบล่าง และ 150 lประกอบด้วยผลได้ pipetted จากแผ่น microtiter แรกเข้าโรงแรมยอดนิยมในการใช้อุปกรณ์กรองไวด์กระบอกสูบเปตต์เคล็ดลับ จานและอุปกรณ์มี centrifuged ที่ 100 กรัม 10 s เพื่อให้แน่ใจว่าไดรฟ์ข้อมูลทั้งหมดในการอุปกรณ์ผ่านตาข่ายเป็นที่สอง ล่าง 96 ทั้งแผ่น ที่นี้จุด เพิ่มถูกเก็บไว้บนตาข่ายและที่ nonaggregatedเซลล์ที่ได้ผ่านเข้าไปในแผ่นที่สอง สาหร่ายในแผ่นที่สองได้หยุดชั่วคราว และข้อยกเว้นในช่วงเชิงเส้นสำหรับ fluorescence คลอโรฟิลล์วัดในตัว Spectromax M5 microplate อ่าน Fluorescence คลอโรฟิลล์ถูกวัด ด้วยความยาวคลื่นในการกระตุ้นของ 488 nm, 515 การ -nm-ตัดตัวกรอง และความยาวคลื่นการเล็ดรอดของ 685 nm จากข้อมูลเหล่านี้เปอร์เซ็นต์ของสาหร่าย ที่มีรวมอยู่ในตาข่ายได้คำนวณจาก fluorescence ของสาหร่ายที่ถูกรวมใช้· P [1 (A/N)] สูตร 100 เปอร์เซ็นต์ของสาหร่าย Pรวม คือ fluorescence ของจากตัวอย่างรวมและ N คือ fluorescence ของจากที่ nonaggregatedตัวอย่างการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวมข้อมูลที่ถูกเก็บรวบรวมโดยใช้
การรวมตัวกรองทดสอบ 96 หลุม การทดสอบนี้ได้รับการพัฒนาเพื่อให้
การทดสอบของพารามิเตอร์หลายซ้ำในแผ่น 96 หลุม กรอง
เสาเข็มถูกสร้างขึ้นโดยประกบ 50 เมตรตาข่ายระหว่างสองปลายปิเปต?
ชั้น (เคล็ดลับหนึ่ง; สหรัฐอเมริกาวิทยาศาสตร์) และการปิดผนึกตาข่ายนี้ในสถานที่ที่มีซิลิกอน.
อุปกรณ์ผลลัพธ์ถูกกำหนดให้เป็น "แท่นขุดเจาะกรอง." แท่นขุดเจาะกรอง
พอดีอย่างเรียบร้อยใน แผ่น 96 ดีและสะสมมวลรวมในตาข่ายขณะที่
nonaggregated เซลล์สาหร่าย (เส้นผ่าศูนย์กลาง 2-3? เมตร) ผ่านเข้าไปใน
หลุมของแผ่นไมโคร ในการทดลองการรวมทั่วไป 150 ลิตร
สาหร่ายวันที่ 1? 107 เซลล์ / มิลลิลิตรปิเปตในรอบล่างแผ่น 96 หลุม.
100 เท่าเข้มข้นระงับเชื้อแบคทีเรีย (1.5 l;? หนาแน่นเดิม
? 1 107 เซลล์ / ml) ถูกบันทึกอยู่ในสาหร่ายในบ่อที่กำหนดให้ 1: 1
อัตราส่วนสาหร่ายต่อแบคทีเรีย เวลส์ไม่ได้รับแบคทีเรียที่ทำหน้าที่เชิงลบเป็น
ตัวควบคุมสำหรับการรวมที่เกิดจากการเพิ่มขึ้นของเชื้อแบคทีเรีย แผ่นถูก
ปิดผนึกด้วย Parafilm และเนื้อหาที่ถูกผสมโดย vortexing เวลา 1 นาที.
แท่นขุดเจาะ Afiltration ถูกวางลงบนรอบด้านล่างแผ่น 96 หลุมและ 150 ลิตร
ที่มีมวลได้รับการปิเปตจากแผ่นไมโครครั้งแรกใน
ด้านบน ของแท่นขุดเจาะการกรองโดยใช้เคล็ดลับปิเปตกว้างเจาะ แผ่นและแท่นขุดเจาะ
ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 100 กรัมสำหรับ 10 วินาทีเพื่อให้แน่ใจว่าปริมาณทั้งหมดใน
แท่นขุดเจาะผ่านเข้าไปในตาข่ายที่สองลดลงแผ่น 96 หลุม ตอนนี้
จุดมวลถูกเก็บไว้บนตาข่ายและ nonaggregated
เซลล์ได้ผ่านเข้ามาในจานที่สอง สาหร่ายในจานที่สองที่ถูก
ระงับและปรับลดลงในช่วงเชิงเส้นสำหรับการเรืองแสงคลอโรฟิล
วัดใน M5 Spectromax อ่าน microplate เรืองแสงคลอโรฟิล
ได้รับการวัดที่มีความยาวคลื่นกระตุ้นของ 488 นาโนเมตร 515-
นาโนเมตรตัดกรองและการปล่อยความยาวคลื่น 685 นาโนเมตร จากข้อมูลเหล่านี้
ร้อยละของสาหร่ายที่ได้รวบรวมและยังคงอยู่ในตาข่ายถูก
คำนวณจากการเรืองแสงของสาหร่ายที่ไม่ได้รวม
โดยใช้สูตร P? [1? (A / N)] · 100 ที่ P คือเปอร์เซ็นต์ ของสาหร่าย
รวม, เป็นเรืองแสงของกรองจากกลุ่มตัวอย่างรวม,
และ N คือการเรืองแสงของกรองจาก nonaggregated
ตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การรวบรวมข้อมูลโดยใช้
กรองรวม 96 ก็ ( . . . วิธีนี้ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อช่วยให้
การทดสอบพารามิเตอร์หลายด้วยซ้ำใน 96 ครับจาน การกรอง
แท่นถูกสร้างขึ้นโดย sandwiching 50 - ตาข่าย M
ระหว่างสองชั้นปลายปิเปตต์ ( ;
เคล็ดลับสหรัฐอเมริกาวิทยาศาสตร์ ) และปิดผนึกตาข่ายนี้ในสถานที่ที่มีซิลิคอน ซึ่งเป็นเขต
- " การกรองอุปกรณ์ ." การเลือกใช้
พอดีอย่างเรียบร้อยใน 96 ดีจานปริมาณมวลรวมบนตาข่าย ขณะที่
nonaggregated สาหร่ายเซลล์ ( เส้นผ่าศูนย์กลาง 2
M ) ผ่านเข้าสู่
เวลส์ของไมโครเพลท ในการทดลองรวมทั่วไป 150
l
สาหร่าย 1  107 เซลล์ / มิลลิลิตร เป็น pipetted เป็นรอบล่าง 96 ดีจาน .
100 พับเข้มข้น bacterial suspension ( 1.5
l ;
ความหนาแน่น , ต้นฉบับ1  107 เซลล์ / มิลลิลิตร ) คือเพิ่มสาหร่ายในเขตเวลส์ให้อัตราส่วน 1 : 1
สาหร่ายแบคทีเรีย เวลไม่ได้รับแบคทีเรีย ทำหน้าที่ควบคุมการเกิดลบ
สำหรับโดยการเพิ่มของแบคทีเรีย จาน
ปิดผนึกด้วยพาราฟิล์ม และเนื้อหาที่ถูกผสมโดย vortexing 1 นาที
afiltration Rig ถูกวางอยู่บนก้นกลม 96 ดีจาน และ 150

lที่มีมวลรวมเป็น pipetted จากแผ่นแรกลงในไมโคร
ด้านบนของอุปกรณ์การกรองโดยใช้เคล็ดลับเปตเจาะกว้าง จานและอุปกรณ์
เป็นระดับที่ 100  G 10 s เพื่อให้แน่ใจว่าปริมาณทั้งหมดใน
เจาะผ่านตาข่ายเข้าไปสอง ลดลง 96 ครับจาน ณจุดนี้
, มวลรวมถูกเก็บไว้บนตะแกรงและ nonaggregated
เซลล์ที่ผ่านเป็นจานที่สอง สาหร่ายในจานที่สอง
หยุดชั่วคราว และเจือจางลงในช่วงเชิงเส้นสำหรับการวัดคลอโรฟิลล์ฟลูออเรสเซนซ์
ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย spectromax M5 เครื่องอ่าน คลอโรฟิลล์ฟลูออเรสเซนซ์
เป็นวัดที่มีโครงสร้างความยาวคลื่น nm 488 , 515 -
nm ตัวกรองและการปล่อยความยาวคลื่น 685 nm .
จากข้อมูลเหล่านี้เปอร์เซ็นต์ของสาหร่ายที่ได้รวบรวมและยังคงอยู่บนตาข่ายคือ
คำนวณจากเรือง ของสาหร่ายที่ไม่รวม
ใช้สูตร P  [ 1  ( A / N ) ] ด้วย 100 ที่ p คือเปอร์เซ็นต์ของสาหร่าย
รวมเป็นเป็นเรืองของการรวม ตัวอย่างจาก
, และ N คือการเรืองแสงของกรองจาก nonaggregated
ตัวอย่าง