Myofibrils were extracted using the

Myofibrils were extracted using the method of Weaver, Bowker, and Gerrard (2009) from a subset of loin samples that were frozen 24-h post-mortem (n = 53) equally representing carcasses that qualified for kosher and those that did not. Briefly, an approximately 1 g sample was removed from the freezer, minced, and homogenized using a blender (Waring Laboratory Science, Torrington, CT) in 5 volumes of ice-cold rigor buffer [75 mM KCl, 10 mM imidazole, 2 mM MgCl2, 2 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 1 mM NaN3; pH 7.2; with 0.1 mM phenylethyl sulfonyl fluoride (PMSF)] using a Kinematica PT 10/35 Polytron homogenizer with PTA-10S generator (Brinkmann, Westbury, NY). After centrifugation at 20,000 ×g and 4 °C for 30 min, myofibrils were washed several times with rigor buffer and then resuspended in 5 volumes of rigor buffer and 5 volumes of glycerol and stored at − 20 °C for approximately 2 months until further process- ing. To estimate sarcomere length, myofibrils were fixed on slides with 3% (v/v) formaldehyde in rigor buffer, mounted in media [75 mM KCl, 10 mM Tris (pH 8.5), 2 mM MgCl2, 2 mM EDTA, 1 mM NaN3, 1 mg/mL p-phenylenediamine, 75% (v/v) glycerol], and sealed under coverslips (Weaver, Bowker, & Gerrard, 2008). Five different microscopic field images were captured for each slide using the Zeiss Axio Imager M2 up- right microscope equipped with high resolution AxioCamMRc3 camera and the A-Plan100x 1.25 oil Ph3 objective (Carl Zeiss Microscopy, LLC; Thornwood, NY). The first 20 myofibrils observed that were positioned in a straight-line orientation and at least 5 full sarcomeres in length were measured using Image-Pro Plus 5.0 software (Media Cybernetics, Bethesda, MD). The average sarcomere length for each slide (loin sample) was recorded.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Myofibrils ถูกสกัดโดยใช้วิธี ของช่างทอผ้า Bowker, Gerrard (2009) จากการย่อยตัวอย่างหยิบที่ถูกแช่แข็ง 24 h ลงพ้น (n = 53) ซากแทนที่มีคุณสมบัติสำหรับอิสลาม และผู้ที่ไม่เท่าเทียมกัน สั้น ๆ การประมาณ 1 g อย่างถูกเอาออกจากตู้แช่แข็ง สับ และ homogenized เป็นกลุ่มใช้เบลนเดอร์ (Waring ห้องปฏิบัติการวิทยาศาสตร์ Torrington, CT) ในปริมาณ 5 บัฟเฟอร์ rigor ฉ่ำ [75 mM KCl, MgCl2, 2 มม. ethylenediaminetetraacetic กรด (EDTA), 2 มม. 10 มม.อิมิดาโซล 1 มม. NaN3; pH 7.2 กับ 0.1 มม. phenylethyl sulfonyl ฟลูออไรด์ (PMSF)] ด้วย homogenizer ฝากระจกโค้ง PT Kinematica 10/35 เป็นเครื่องกำเนิดไฟฟ้า 10 PTA (Brinkmann , Westbury, NY) หลังจาก centrifugation 20000 × g และ 4 ° C ใน 30 นาที myofibrils ได้ล้างหลายครั้ง ด้วยบัฟเฟอร์ rigor แล้ว resuspended ในปริมาณ 5 rigor บัฟเฟอร์และ 5 ปริมาณของกลีเซอร แล้วเก็บที่− 20 ° C ประมาณ 2 เดือนจนถึงกระบวนการเพิ่มเติม-ing การประมาณความยาว sarcomere, myofibrils มีถาวรบนภาพนิ่งด้วย 3% (v/v) ฟอร์มาลดีไฮด์ใน rigor บัฟเฟอร์ ติดตั้งสื่อ [75 mM KCl ตรี (pH 8.5), MgCl2, EDTA, NaN3, 1 มม. 2 มม. 1 mg/mL p-phenylenediamine กลีเซอร 75% (v/v) 2 มม. 10 มม.], และปิดผนึกภายใต้ coverslips (ช่างทอผ้า Bowker, & Gerrard, 2008) รวม 5 ภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟิลด์แตกต่างกันสำหรับแต่ละภาพนิ่งโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ขึ้นขวา M2 Zeiss Axio ถ่ายภาพด้วยกล้องความละเอียดสูง AxioCamMRc3 และ 1.25 A Plan100x น้ำมัน Ph3 วัตถุประสงค์ (Carl Zeiss Microscopy, LLC Thornwood, NY) สังเกต myofibrils 20 อันดับแรกที่มีตำแหน่งในแนวเส้นตรง และ sarcomeres น้อย 5 เต็มที่ความยาวที่วัดโดยใช้ซอฟต์แวร์ภาพ Pro Plus 5.0 (Cybernetics สื่อ เบเทสดา MD) ความยาวเฉลี่ย sarcomere สำหรับแต่ละภาพนิ่ง (หยิบตัวอย่าง) ถูกบันทึกไว้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

myofibrils ถูกสกัดโดยใช้วิธีการของผู้ประกอบการ Bowker และเจอร์ราร์ด (2009) จากการย่อยของตัวอย่างเนื้อซี่โครงที่ถูกแช่แข็งตลอด 24 ชั่วโมงชันสูตรศพ (n = 53) อย่างเท่าเทียมกันเป็นตัวแทนของซากที่มีคุณสมบัติสำหรับโคเชอร์และผู้ที่ไม่ได้ สั้น ๆ ประมาณ 1 กรัมตัวอย่างถูกลบออกจากช่องแช่แข็งสับและปั่นโดยใช้เครื่องปั่น (Waring ห้องปฏิบัติการวิทยาศาสตร์ทอร์, CT) ใน 5 เล่มของบัฟเฟอร์ความรุนแรงเย็น [75 มิลลิ KCl 10 มิลลิ imidazole 2 มิลลิ MgCl2 2 มิลลิกรด Ethylenediaminetetraacetic (EDTA) 1 มิลลิ NaN3; พีเอช 7.2; 0.1 มิลลิ phenylethyl ฟลูออไร sulfonyl (PMSF)] โดยใช้ Kinematica PT 10/35 Polytron homogenizer กับเครื่องกำเนิดไฟฟ้า PTA-10S (Brinkmann, นิวยอร์กซิตี้) หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 20,000 ×กรัมและ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที, myofibrils ถูกล้างหลายครั้งด้วยบัฟเฟอร์ความรุนแรงและ resuspended แล้ว 5 เล่มของบัฟเฟอร์ความรุนแรงและ 5 เล่มของกลีเซอรอลและเก็บไว้ที่ - 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลาประมาณ 2 เดือนจนกว่ากระบวนการต่อไป - ไอเอ็นจี ในการประมาณการระยะเวลาในซีก, myofibrils ได้รับการแก้ไขในสไลด์ที่มี 3% (v / v) ดีไฮด์ในบัฟเฟอร์ความรุนแรงที่ติดตั้งอยู่ในสื่อ [75 มิลลิ KCl 10 มิลลิ Tris (pH 8.5) 2 มิลลิ MgCl2 2 มิลลิ EDTA, 1 มิลลิ NaN3 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรพี Phenylenediamine 75% (v / v) กลีเซอรอล] และปิดผนึกภายใต้ coverslips (ประกอบ Bowker และเจอร์ราร์ด, 2008) ห้าที่แตกต่างกันภาพสนามกล้องจุลทรรศน์ถูกจับในแต่ละสไลด์ใช้ Zeiss Axio Imager M2 กล้องจุลทรรศน์ที่เหมาะสมขึ้นพร้อมกับกล้องความละเอียดสูง AxioCamMRc3 และ A-Plan100x 1.25 น้ำมันวัตถุประสงค์ PH3 (Carl Zeiss กล้องจุลทรรศน์, LLC; Thornwood นิวยอร์ก) ครั้งแรกที่ 20 myofibrils สังเกตเห็นว่าอยู่ในตำแหน่งในแนวเส้นตรงและอย่างน้อย 5 sarcomeres เต็มรูปแบบในระยะเวลาที่ถูกวัดโดยใช้ภาพโปรพลัสซอฟแวร์ 5.0 (Media ไซเบอร์เนติกส์, Bethesda, MD) ความยาวซีกเฉลี่ยสำหรับแต่ละภาพนิ่ง (เนื้อซี่โครงตัวอย่าง) จะถูกบันทึก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไมโอไฟบริลถูกสกัดโดยใช้วิธีวีเวอร์ อยู่ และ เจอร์ราร์ด ( 2009 ) จากส่วนย่อย ( ตัวอย่างที่ 24-h ชันสูตรศพแช่แข็ง ( n = 53 ) เท่าเทียมกันแทนซากที่เหมาะสมสำหรับ Kosher และผู้ที่ไม่ได้ สั้นประมาณ 1 กรัมตัวอย่างถูกลบออกจากช่องแช่แข็ง , สับและบดด้วยเครื่องปั่น ( waring ห้องปฏิบัติการวิทยาศาสตร์ , ทอร์ ,CT ) ใน 5 เล่มของเย็นการบัฟเฟอร์ [ 75 KCl อิมิดาโซล 10 mm , 2 mm ชุด 2 มิลบอน acid ( EDTA ) , 1 มม. nan3 ; pH 7.2 ; กับ 0.1 มิลลิเมตร phenylethyl sulfonyl ฟลูออไรด์ ( PMSF ) ] ใช้ kinematica PT 10 / 35 polytron Homogenizer กับ pta-10s เครื่องกำเนิดไฟฟ้า ( brinkmann เบอรี่ , , NY ) หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 20000 × g และ 4 ° C เป็นเวลา 30 นาทีไมโอไฟบริลถูกล้างหลายๆ ครั้งการบัฟเฟอร์แล้ว resuspended ใน 5 เล่ม 5 เล่ม การบัฟเฟอร์ และกลีเซอรอลและการเก็บที่ - 20 องศา C − ประมาณ 2 เดือน จนกว่ากระบวนการไอเอ็นจีเพิ่มเติม ประมาณการความยาวซาร์โคเมียร์ไมโอไฟบริล , ถูกกำหนดบนภาพนิ่ง 3 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ในการใช้บัฟเฟอร์ที่ติดตั้งในสื่อ [ 75 มม. 10 มม. หรือ KCl ( pH 8.5 ) , 2 มม. ชุด 2 มม. EDTA , nan3 1 มิลลิเมตร1 mg / ml p-phenylenediamine 75 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กลีเซอรอล ] และเก็บไว้ภายใต้ coverslips ( วีเวอร์ อยู่& , เจอร์ราร์ด , 2008 ) ห้าภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์สนามที่แตกต่างกันสำหรับแต่ละภาพนิ่งถูกใช้ Zeiss โรล่า แอกซิโอ ) M2 ขึ้น - ขวาพร้อมกับ axiocammrc3 กล้องจุลทรรศน์กล้องความละเอียดสูงและ a-plan100x 1.25 น้ำมัน ph3 วัตถุประสงค์ ( Carl Zeiss กล้องจุลทรรศน์ , LLC ; Thornwood , NY )20 คนแรกไมโอไฟบริลสังเกตที่วางในแนวเส้นตรงและอย่างน้อย 5 sarcomeres เต็มความยาววัดโดยใช้ภาพโปรพลัส 5.0 ซอฟต์แวร์ ( สื่อไซเบอร์เนติกส์ , Bethesda , MD ) ความยาวซาร์โคเมียร์เฉลี่ยในแต่ละสไลด์ ( ( ตัวอย่าง ) จะถูกบันทึก