MATERIALS AND METHODSTrolox (Hoffma

MATERIALS AND METHODS
Trolox (Hoffman-La Roche) (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethychroman-2-carboxylic
acid; Aldrich Chemical
Co., Gillingham, Dorset, UK) was used an antioxidant
standard. Trolox (2.5 mM) was prepared in ethanol or 5
mM phosphate buffered saline, pH 7.4, (PBS), for use as
a stock standard, as described previously [1]. Fresh
working standards were prepared daily on dilution with
ethanol. ABTS, 2,29-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-
sulfonic acid) diammonium salt, and potassium persulfate
(di-potassium peroxdisulfate) were obtained from
Sigma-Aldrich (Poole, Dorset, UK) and HPLC grade
ethanol from Rathburn Chemicals Ltd. (Walkerburn,
Peebleshire, Scotland).
Hydroxycinnamates, anthocyanidins, and flavonoids
were obtained from Extrasynthese (Lyon-Nord, France),
carotenoids, b-carotene and lycopene, from AOCS (Bitterne,
Hampshire), and ascorbic acid and a-tocopherol
from Sigma-Aldrich (95% pure). Stock solutions of the
carotenoids were prepared in dichloromethane and concentrations
confirmed using the extinction coefficient.
Stock solutions of flavonoids and hydroxycinnamates
were prepared by dissolution in ethanol and subsequently
diluted in ethanol for introduction into the assay system
at concentrations within the activity range of the assay
(1.5 mM to 15 mM final concentration). Anthocyanidins
were diluted in acidic ethanol pH 1.3 to a concentration
of 0.5 mM. Ascorbic acid and uric acid were prepared as
stock solutions in 18 MV water to a concentration of 5
mM, and a-tocopherol in ethanol at 2 mM. None of the
solvents interfere in the assay.
The antioxidant activity was assessed as described
below. Experiments were performed on the HewlettPackard
spectrophotometer model HP 8453 (Cheadle
Heath, Stockport Cheshire, UK) fitted with peltier temperature
control.
Assay protocol—decolorization assay in ethanolic
solution
ABTS was dissolved in water to a 7 mM concentration.
ABTS radical cation (ABTS•1) was produced by
reacting ABTS stock solution with 2.45 mM potassium
persulfate (final concentration) and allowing the mixture
to stand in the dark at room temperature for 12–16 h
before use (Fig. 1). Because ABTS and potassium persulfate
react stoichiometrically at a ratio of 1:0.5, this
will result in incomplete oxidation of the ABTS. Oxidation
of the ABTS commenced immediately, but the absorbance
was not maximal and stable until more than 6 h
had elapsed. The radical was stable in this form for more
than two days when stored in the dark at room temperature.
For the study of phenolic compounds and food
extracts, the ABTS•1 solution was diluted with ethanol
and for plasma antioxidants with PBS, pH 7.4, to an
absorbance of 0.70 (60.02) at 734 nm and equilibrated at
30°C. Stock solutions of phenolics in ethanol, carotenoids
in dichloromethane and plasma antioxidants in
water were diluted such that, after introduction of a 10-
ml aliquot of each dilution into the assay, they produced
between 20%–80% inhibition of the blank absorbance.
After addition of 1.0 ml of diluted ABTS•1 solution
(A734nm 5 0.700 6 0.020) to 10 ml of antioxidant com

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการTrolox (แมน-ลาโรช) (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethychroman-2-carboxylicกรด สารเคมี Aldrichจำกัด Gillingham ดอร์เซ็ท UK) ถูกใช้เป็นสารต้านอนุมูลอิสระมาตรฐาน จัดทำในเอทานอลหรือ 5 Trolox (2.5 มม.)มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4, (PBS), น้ำเกลือสำหรับใช้เป็นมีในสต็อกมาตรฐาน ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [1] สดใหม่มาตรฐานการทำงานถูกจัดบนเจือจางด้วยเอทานอล รเรียน 2,29-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-เกลือ diammonium ลกรด) และเพอร์ซัลเฟตโพแทสเซียม(โพแทสเซียม di peroxdisulfate) ได้รับจากSigma Aldrich (Poole ดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร) และเกรด HPLCเอทานอลจาก Rathburn เคมี จำกัด (WalkerburnPeebleshire สกอตแลนด์)Hydroxycinnamates, anthocyanidins และ flavonoidsได้รับจาก Extrasynthese (Nord ลียง ฝรั่งเศส),แคโรทีนอยด์ b-แคโรทีน และไลโค ปีน จากของ AOCS (Bitterneแฮมไชร์), และกรดแอสคอร์บิคและ a tocopherolจาก Sigma Aldrich (บริสุทธิ์ 95%) โซลูชั่นของสต็อกแคโรทีนอยด์วจัด dichloromethane และความเข้มข้นยืนยันโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียละลายของ flavonoids และ hydroxycinnamatesเตรียมได้ โดยละลาย ในเอทานอล และต่อมาเจือจางในเอทานอแนะนำเข้าสู่ระบบการทดสอบที่ความเข้มข้นอยู่ในช่วงกิจกรรมของการทดสอบ(1.5 mM ความเข้มข้นสุดท้าย 15 mM) Anthocyanidinsถูกเจือจางในเอทานอลเป็นกรด pH 1.3 ความเข้มข้นของ 0.5 มม. กรดแอสคอร์บิคและกรดยูริกถูกเตรียมไว้เป็นละลายในน้ำ MV 18 ความเข้มข้น 5มม. และ a tocopherol ในเอทานอล 2 มม. ไม่มีการสารละลายแทรกแซงในการทดสอบกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระได้รับการประเมินตามด้านล่างนี้ การทดลองได้ดำเนินการในการ HewlettPackardสเปครุ่น HP 8453 (พญาไทสุขภาพ สต็อคพอร์ตแมนเชสเตอร์ สหราชอาณาจักร) ประกอบ ด้วยอุณหภูมิที่อาศัยการควบคุมAssay โพรโทคอล — ทดสอบบำบัดใน ethanolicวิธีการแก้ไขปัญหารเรียนที่ละลายในน้ำความเข้มข้น 7 มม.ผลิตโดยรกรเรียนรุนแรง (ABTS•1)โซลูชันหุ้นรเรียนทำปฏิกิริยากับโพแทสเซียม 2.45 มม.เพอร์ซัลเฟต (ความเข้มข้นสุดท้าย) และช่วยให้ส่วนผสมยืนในมืดอุณหภูมิห้องสำหรับ 12-16 ชมก่อนใช้ (รูปที่ 1) เพราะเพอร์ซัลเฟตรเรียนและโพแทสเซียมตอบสนอง stoichiometrically ที่อัตรา 5 อัตราส่วนนี้จะทำให้ออกซิเดชันที่ไม่สมบูรณ์ของการรเรียน ออกซิเดชันรเรียนเริ่มทันที แต่ค่าที่ได้ไม่สูง และมีเสถียรภาพมากกว่า 6 ชมได้ล่วงเลยไป อนุมูลมีเสถียรภาพในแบบฟอร์มนี้สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกว่า 2 วันเมื่อเก็บในมืดที่อุณหภูมิห้องสำหรับการศึกษาของสารฟีนอและอาหารสารสกัดจาก ABTS•1 โซลูชันถูกเจือจาง ด้วยเอทานอลและ สำหรับสารต้านอนุมูลอิสระพลาสม่าด้วย PBS, pH 7.4 เพื่อการค่าของ 0.70 (60.02) ที่ 734 nm และ equilibrated ที่30 องศาเซลเซียส ละลายของ phenolics ในเอทานอล แคโรทีนอยด์สารต้านอนุมูลอิสระ dichloromethane และพลาสม่าในน้ำถูกเจือจางที่ หลังจากแนะนำ 10 -มล.ส่วนลงตัวของแต่ละเจือจางลงในการทดสอบ พวกเขาผลิตระหว่าง 20%-80% การยับยั้งค่าว่างเปล่าหลังจากเพิ่ม 1.0 มิลลิลิตรเจือจาง ABTS•1 โซลูชัน(A734nm เกซน 0.700 5 6 0.020) ถึง 10 ml ของสารต้านอนุมูลอิสระ com

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
Trolox (ฮอฟแมน La Roche) (6 ไฮดรอกซี-2,5,7,8-tetramethychroman-2-คาร์บอกซิ
กรด; ดิชเคมี
Co. , จิลลิ่ง, ดอร์เซตสหราชอาณาจักร) ถูกนำมาใช้สารต้านอนุมูลอิสระ
มาตรฐาน Trolox (2.5 มิลลิเมตร) ถูกจัดทำขึ้นในเอทานอลหรือ 5
มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือค่า pH 7.4 (PBS) เพื่อใช้เป็น
มาตรฐานหุ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [1] สด
มาตรฐานการทำงานในชีวิตประจำวันได้เตรียมการลดสัดส่วนกับ
เอทานอล ABTS, 2,29-azinobis (3 ethylbenzothiazoline-6-
กรด) เกลือ diammonium และโพแทสเซียมเพอร์ซัลเฟต
(di-โพแทสเซียม peroxdisulfate) ที่ได้รับจาก
Sigma-Aldrich (พูลดอร์เซ็สหราชอาณาจักร) และ HPLC เกรด
เอทานอลจาก Rathburn Chemicals Ltd . (Walkerburn,
Peebleshire สกอตแลนด์).
Hydroxycinnamates, anthocyanidins และ flavonoids
ที่ได้รับจาก Extrasynthese (Lyon-Nord, ฝรั่งเศส),
carotenoids, B-แคโรทีนและไลโคปีนจาก AOCS (Bitterne,
นิวแฮมป์เชียร์) และวิตามินซีและโทโคฟีรอ
จาก Sigma-Aldrich (95% บริสุทธิ์) การแก้ปัญหาสต็อกของ
carotenoids ได้จัดทำขึ้นไดคลอโรมีเทนและความเข้มข้น
ได้รับการยืนยันโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสีย.
โซลูชั่นหุ้นของ flavonoids และ hydroxycinnamates
ถูกจัดทำขึ้นโดยการละลายในเอทานอลและต่อมา
เจือจางในเอทานอลเพื่อนำเข้าสู่ระบบการทดสอบ
ที่ระดับความเข้มข้นในช่วงกิจกรรมของการทดสอบ
( 1.5 มม 15 มมเข้มข้นสุดท้าย) anthocyanidins
ถูกเจือจางในเอทานอลที่เป็นกรดพีเอช 1.3 ความเข้มข้น
0.5 มิลลิเมตร วิตามินซีและกรดยูริคได้จัดทำขึ้นเป็น
โซลูชั่นหุ้นใน 18 น้ำ MV กับความเข้มข้นของ 5
มิลลิและโทโคฟีรอในเอทานอลที่ 2 mm ไม่มี
ตัวทำละลายแทรกแซงในการทดสอบได้.
กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระได้รับการประเมินตามที่อธิบายไว้
ด้านล่าง การทดลองดำเนินการใน HewlettPackard
รุ่น spectrophotometer HP 8453 (เชอร์ริล
เฮลธ์, มอร์นิง Cheshire, UK) พอดีกับอุณหภูมิ Peltier
ควบคุม.
ทดสอบการวิเคราะห์โปรโตคอลลดสีในเอทานอล
แก้ปัญหา
ABTS ถูกละลายในน้ำให้มีความเข้มข้นประมาณ 7 มม.
ABTS ไอออนรุนแรง (ABTS • 1) ถูกผลิตโดย
ปฏิกิริยา ABTS วิธีการแก้ปัญหาที่มีหุ้น 2.45 มิลลิโพแทสเซียม
เพอร์ซัลเฟต (ความเข้มข้นสุดท้าย) และช่วยให้ส่วนผสม
ที่จะยืนอยู่ในที่มืดที่อุณหภูมิห้องนาน 12-16 ชั่วโมง
ก่อนการใช้งาน (รูปที่ 1). เพราะ ABTS และโพแทสเซียมเพอร์ซัลเฟต
ตอบสนอง stoichiometrically ในอัตราส่วน 1: 0.5 นี้
จะมีผลในการเกิดออกซิเดชันที่ไม่สมบูรณ์ของ ABTS ออกซิเดชัน
ของ ABTS เริ่มทันที แต่ดูดกลืนแสง
ไม่ได้และมีเสถียรภาพสูงสุดจนถึงมากกว่า 6 ชั่วโมง
ที่ผ่านไป หัวรุนแรงมีเสถียรภาพในรูปแบบนี้มานาน
กว่าสองวันเมื่อเก็บไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิห้อง.
สำหรับการศึกษาของสารประกอบฟีนอลและอาหาร
สารสกัดที่ ABTS • 1 แก้ปัญหาที่ถูกเจือจางด้วยเอทานอล
และสารต้านอนุมูลอิสระพลาสมาพร้อมพีบีเอสพีเอช 7.4 ไปยัง
การดูดกลืนแสง 0.70 (60.02) ที่ 734 นาโนเมตรและ equilibrated ที่
อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส การแก้ปัญหาสต็อกของฟีนอลในเอทานอลนอยด์
ในไดคลอโรมีเทนและพลาสมาสารต้านอนุมูลอิสระใน
น้ำถูกปรับลดดังกล่าวว่าหลังจากการเปิดตัวของ 10-
หารมล. ของแต่ละเจือจางลงไปทดสอบที่พวกเขาผลิต
ระหว่าง 20% -80% การยับยั้งของการดูดกลืนแสงว่างเปล่า.
หลังจากที่ นอกเหนือจาก 1.0 มิลลิลิตรเจือจาง ABTS • 1 การแก้ปัญหา
(A734nm 5 6 0.700 0.020) 10 มิลลิลิตร COM สารต้านอนุมูลอิสระ