Natural Killer (NK) cell activity a

Natural Killer (NK) cell activity assay
Peripheral blood mononuclear cells (PBMC)
were washed, resuspended and adjusted to 2x106
cells/ml in complete RPMI 1640 containing 10%
FBS. PBMC were incubated in the absence or
presence of the extracts at the final concentrations
of 10 ng/ml, 100 ng/ml, 1 g/ml, 10 g/ml and 100
g/ml at 37oC for 18 hours. After incubation, the
cultures were washed and then used as effector
cells for the assay of NK cell activity.
K 562 cells were used as target cells and
were grown in complete RPMI 1640 containing
10% FBS. The target cells (2x106 cells) were
labeled with 100 Ci of Na2
51CrO4 (specific activity
37.0 MBq/g: Amersham, Buckinghamshire, UK)
at 37oC 5% CO2 for 60 minutes, and washed 3
times with cold RPMI 1640 containing 10% FBS.
The cytotoxicity assay was performed as
described (Sriwanthana and Chavalittumrong,
2001). In brief, 2x103 target cells/well and a PBMC
effector-to-target cell ratios (E:T) of 90:1, 30:1,
10:1, and 3:1 were set up in triplicate in 96-well
round-bottom microtiter plates (Corning Incorporated,
Corning, NY, USA). The plates were
incubated for four hours at 37oC with 5% CO2.
After incubation, supernatants from each well (100
l) were transferred into tubes and counted in a
Gamma counter (Cobra Series Gamma Counter
Systems, Packard Instrumental Co., CT, USA). The
percentage of cytolysis was calculated according
to the following formula: %cytolysis = (experimental
release - spontaneous release) / (maximal
release - spontaneous release). Spontaneous release
was measured by incubation of target cells with
medium alone, while maximal release was
measured by lysis of target cells with 5% Triton
X-100. NK cell activity was expressed as lytic
units (LU)/107 PBMCs as determined by least
squares analysis derived from the percentage of
specific lysis of all E:T ratios. One LU was defined
as the number of effector cells required for 20%
specific lysis of 1x104 target cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบกิจกรรมเซลล์นักฆ่า (NK) ธรรมชาติเลือดต่อพ่วง mononuclear เซลล์ (PBMC)ถูกล้าง resuspended และปรับปรุงให้ 2 x 106เซลล์/มล.ใน RPMI 1640 สมบูรณ์ที่ประกอบด้วย 10%FBS PBMC ได้ incubated ในการขาดงาน หรือของสารสกัดที่ความเข้มข้นสุดท้าย10 ng/ml, 100 ng/ml, 1 g/ml, g 10 ml และ 100g/ml ที่ 37oC 18 ชั่วโมง หลังจากบ่ม การเครื่องซักผ้า และใช้เป็น effector วัฒนธรรมเซลล์สำหรับการวิเคราะห์ของกิจกรรมของเซลล์ NKใช้ K 562 เซลล์เป็นเซลล์เป้าหมาย และมีปลูกในสมบูรณ์ RPMI 1640 ประกอบด้วย10% FBS เซลล์เป้าหมาย (2 x 106 เซลล์) ได้ติดป้าย Ci 100 ของ Na251CrO4 (เฉพาะกิจกรรม37.0 MBq/g: Amersham บักกิงแฮมเชอร์ อังกฤษ)ที่ 37oC 5% CO2 สำหรับ 60 นาที และหิน 3ครั้งกับ RPMI 1640 เย็นที่ประกอบด้วย 10% FBSทำการทดสอบ cytotoxicity เป็นอธิบาย (Sriwanthana และ Chavalittumrong2001) . สังเขป 2 x 103 เป้าหมายเซลล์/ดีและ PBMCอัตราส่วนของเซลล์ effector เป้าหมาย (E:T) ของ 90:1 บท10:1 และ 3:1 ได้ตั้งค่าใน triplicate ใน 96-ดีรอบล่างแผ่น microtiter (คอร์นทำ Incorporatedคอร์นทำ NY สหรัฐอเมริกา) แผ่นได้incubated 4 ชั่วโมงที่ 37oC กับ 5% CO2หลังจากบ่ม supernatants จากดีละ (100l) เป็นท่อ และนับในการเคาน์เตอร์แกมมา (งูเห่าชุดแกมมาเคาน์เตอร์ระบบ บริษัท Packard บรรเลง CT สหรัฐอเมริกา) ที่มีคำนวณตามเปอร์เซ็นต์ของ cytolysisสูตรต่อไปนี้: % cytolysis = (ทดลองปล่อย - ปล่อยขาด) / (สูงสุดปล่อย - ปล่อยอยู่) ปล่อยอยู่ถูกประเมิน โดยคณะทันตแพทยศาสตร์ของเซลล์เป้าหมายมีเพียงอย่างเดียว ในขณะที่รุ่นสูงสุดปานกลางวัด โดย lysis ของเซลล์เป้าหมาย 5% ไตรตั้นX-100 กิจกรรมของเซลล์ NK ได้แสดงเป็น lyticหน่วย (LU) / 107 PBMCs น้อยที่สุดวิเคราะห์เหลี่ยมมาจากเปอร์เซ็นต์ของlysis เฉพาะของอัตราส่วนทั้งหมด E:T ลูหนึ่งถูกกำหนดเป็นจำนวนเซลล์ effector ที่จำเป็นสำหรับ 20%lysis เฉพาะของเป้าหมาย 1 x 104 เซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

นักฆ่าธรรมชาติ (NK) การทดสอบการทำงานของเซลล์
โมโนนิวเคลียร์เซลล์ในเลือด (PBMC)
ถูกล้าง, resuspended และปรับให้ 2x106
เซลล์ / มลสมบูรณ์ใน RPMI 1640 ที่มี 10%
FBS PBMC ถูกบ่มในกรณีที่ไม่มีหรือ
ปรากฏตัวของสารสกัดที่เข้มข้นสุดท้าย
10 ng / ml, 100 ng / ml 1 g / ml, 10 g / ml และ 100
g / ml ที่ 37oC 18 ชั่วโมง หลังจากบ่ม
วัฒนธรรมถูกล้างและนำไปใช้เป็น Effector
เซลล์สำหรับการทดสอบของการทำงานของเซลล์ NK.
K 562 เซลล์ถูกนำมาใช้เป็นเซลล์เป้าหมายและ
ได้รับการปลูกในที่สมบูรณ์ RPMI 1640 ที่มี
10% FBS เซลล์เป้าหมาย (2x106 เซลล์) ได้รับการ
ติดป้ายที่มี 100 Ciของ Na2
51CrO4 (กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง
37.0 MBq / g: Amersham, Buckinghamshire สหราชอาณาจักร)
ที่ 37oC 5% CO2 60 นาทีและล้าง 3
ครั้งกับความหนาวเย็น RPMI 1640 ที่มี 10 % FBS.
การทดสอบความเป็นพิษได้ดำเนินการตาม
ที่อธิบายไว้ (Sriwanthana และ Chavalittumrong,
2001) ในช่วงสั้น ๆ 2x103 เซลล์เป้าหมาย / ดีและ PBMC
Effector เพื่อเป้าหมายอัตราส่วนเซลล์ (E: T) 90: 1, 30: 1,
10: 1 และ 3: 1 ได้รับการจัดตั้งขึ้นในเพิ่มขึ้นสามเท่าใน 96 หลุม
รอบ แผ่นไมโครวางด้านล่าง (Corning Incorporated,
Corning, NY, USA) แผ่นถูก
บ่มเป็นเวลาสี่ชั่วโมงที่ 37oC กับ CO2 5%.
หลังจากบ่ม supernatants จากกันได้ดี (100
l) ถูกย้ายเข้าไปในท่อและนับ
เคาน์เตอร์แกมมา (Gamma งูเห่าชุดเคาน์เตอร์
ระบบ Packard เครื่องมือ Co. , CT, ประเทศสหรัฐอเมริกา)
ร้อยละของ cytolysis ที่คำนวณตาม
สูตรการคำนวณดังนี้:% cytolysis = (จากการทดลอง
ปล่อย - ปล่อยธรรมชาติ) / (สูงสุด
ปล่อย - ปล่อยที่เกิดขึ้นเอง) ปล่อยธรรมชาติ
โดยวัดจากการบ่มเพาะของเซลล์เป้าหมายที่มี
ขนาดกลางเพียงอย่างเดียวในขณะที่การเปิดตัวสูงสุดคือการ
วัดโดยสลายของเซลล์เป้าหมาย 5% Triton
X-100 การทำงานของเซลล์ NK ถูกแสดงเป็น lytic
หน่วย (LU) / 107 PBMCs ตามที่กำหนดโดยอย่างน้อย
การวิเคราะห์สี่เหลี่ยมมาจากร้อยละของการ
สลายเฉพาะของทั้งหมด E อัตราส่วน T หนึ่ง LU ถูกกำหนด
เป็นจำนวนของเซลล์ Effector ที่จำเป็นสำหรับ 20%
สลายเฉพาะของเซลล์เป้าหมาย 1x104

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นักฆ่าตามธรรมชาติ ( NK ) เซลล์ต่อเซลล์เม็ดเลือดขาวปกติกิจกรรม
2 )
ถูกล้าง resuspended และปรับให้ 2x106
เซลล์ / มล. ใน RPMI 1640 ที่สมบูรณ์ประกอบด้วย 10 %
FBS ( 2 ) การขาดหรือการปรากฏตัวของสารสกัดที่

สุดท้ายความเข้มข้น 10 ng / ml , 100 ng / ml 1 กรัม / มิลลิลิตร , 10  g / ml และ 100
 g / ml ที่ 37oc 18 ชั่วโมง หลังจากบ่ม ,
วัฒนธรรมที่ถูกล้างแล้วใช้เป็นโต้ง
เซลล์แบคทีเรียของกิจกรรมเซลล์ NK .
K แต่เซลล์ พบว่าเซลล์เป้าหมายและเติบโตใน RPMI 1640 ที่สมบูรณ์

ผสม 10% FBS เซลล์เป้าหมาย ( 2x106 เซลล์ )
ป้าย 100  CI ของ N
51cro4 ( เฉพาะกิจกรรม
/ G :  mbq ในสัดส่วนที่บัคคิงแฮมเชอร์ , UK )
ที่ 37oc 5% CO2 เป็นเวลา 60 นาที และล้าง 3
ด้วย RPMI 1640 ครั้งเย็นผสม 10% FBS
3
ต่อการอธิบาย ( และเป็น sriwanthana chavalittumrong
, 2001 ) ในช่วงสั้น ๆ , 2x103 เซลล์เป้าหมาย / ดีและ 2
( เป้าหมายอัตราส่วนเซลล์ ( E : t ) ของ 90:1 30 : 1
, , 10 และ 3 : 1 ตั้งทั้งสามใบใน 96 ดี
ก้นกลม แผ่นไมโคร ( Corning Incorporated ,
Corning , NY , USA ) จานถูก
บ่มเป็นเวลาสี่ชั่วโมงใน 37oc กับคาร์บอนไดออกไซด์ 5%
หลังจากระยะเวลา supernatants จากแต่ละดี ( 100
 L ) ถูกย้ายเข้าไปในท่อและนับใน
แกมมาเคาน์เตอร์ ( งูเห่าชุดแกมมาเคาน์เตอร์
ระบบ Packard เครื่องมือ Co . , CT , สหรัฐอเมริกา )
เปอร์เซ็นต์ของชีวิตประจำวันได้คำนวณตามสูตรต่อไปนี้ : %
กับชีวิตประจำวัน = ( ทดลองปล่อยเอง
-
( ปล่อย ) / สูงสุดปล่อย - ปล่อยเอง )
ปล่อยธรรมชาติวัดโดยบ่มเซลล์เป้าหมายกับ
สื่อเพียงอย่างเดียว ในขณะที่รุ่นสูงสุด
วัดโดยการสลายของเซลล์เป้าหมาย 5% Triton X-100
. กิจกรรมเซลล์ NK จะแสดงเป็นหน่วยของเอนไซม์
( ลู่ ) / 107 PBMCs โดยกำหนดเป็นอย่างน้อย
สี่เหลี่ยมการวิเคราะห์ได้มาจากค่าร้อยละของการสลาย
เฉพาะของ E : T อัตราส่วน หนึ่งเป็นกำหนด
ลู่เป็นหมายเลขของ ( จำเป็นสำหรับการสลายเซลล์ที่เฉพาะเจาะจงของ 1x104 20%

เซลล์เป้าหมาย