4. DiscussionOur findings of impair

4. Discussion
Our findings of impairment in acetylcholine-induced endothelial-dependent vasorelaxation are similar to previous experimental and clinical studies examining the one-time effect of a single binge episode on endothelial function [5] and [6]. The new finding of our study is that vitamin C prevented the endothelial dysfunction induced by ethanol, further implicating oxidative stress in such response. Our results are relevant since plasma ethanol levels here described are within the range found in the bloodstream of humans after binge drinking[25] and [26], and in rats 30 min after the oral administration of ethanol [5] and [27].
In the rat aorta, the muscarinic cholinergic receptor subtype 3 (M3R) mediates the endothelium-dependent relaxation induced by acetylcholine [28]. Endothelial M3R signals trough eNOS and causes relaxation of the aorta via NO production [29]. Thus, the reduced responsiveness of aortas from ethanol-treated rats to acetylcholine could be due to an impaired production of NO in response to M3R activation. The lack of effect of ethanol on SNP-induced relaxation indicates that the NO pathway, which involves the activation of the enzyme guanylate cyclase and the production of cGMP is therefore unaffected by acute ethanol intake. Our data further shows that in endothelial cells from ethanol-treated rats, vitamin C prevented the decrease in [NO]c in response to acetylcholine, suggesting that vitamin C preserves the endothelial generation of NO in response to M3R activation. This idea is strength by our functional data showing that the inhibition induced by L-NAME on acetylcholine-induced relaxation was more pronounced in aortas from ethanol-treated rats and that this response was not observed after treatment with vitamin C. However, vitamin C was not able to prevent the reduction in the basal production of NOx in aortic homogenates. It is important to note that NOx levels described here represent the basal levels of NO and not the NO generated in response to acetylcholine. This might explain the lack of effect of vitamin C on preventing the reduction in NOx levels because basal NO or the NO released in response to acetylcholine are generated by different sources. Thus, in endothelial cells, vitamin C protects M3R-stimulated production of NO rather than the basal production of NO. Moreover, NOx levels were evaluated in aortic homogenates and for this reason this result will reflect the response of the whole aortic tissue to ethanol without distinction between the endothelium and VSMC.
Endothelial dysfunction is caused by an increase in ROS generation and a subsequent reduction of endothelial NO bioavailability, either by increasing its oxidative inactivation and/or by decreasing its synthesis [30]. Vitamin C induces activation of eNOS and increases NO synthesis in endothelial cells [31] and [32], and these effects could have contributed to the improved endothelium-dependent vasodilatation in our model. In the vascular endothelium NO is synthesized by eNOS [33], and the activity of this NOS isoform is regulated by the calcium-calmodulin complex, which interacts with eNOS, resulting in increased enzymatic activity [29]. Additionally, eNOS activation may also be independent of calcium [34]. The serine/threonine kinase Akt phosphorylates eNOS at Ser1177 residue thereby activating the enzyme [35]. In contrast, eNOS is inhibited by phosphorylation of the Thr495 residue, which interferes with the binding of calmodulin to the eNOS calmodulin-binding domain [36]. In the present study, vitamin C increased the phosphorylation of Akt and eNOS at Ser1177 residue and this response could be involved in the protective effect of vitamin C on [NO]c in endothelial cells. However, studies on eNOS activation on endothelial cells would be of interest to clarify this point.
NO inactivation is usually increased in the presence of excessive levels of O2−, which can lead to a decreased vasorelaxation. The present findings demonstrated that ethanol increased O2− generation in the rat aorta, which is in accordance with previous findings [5]. We also showed increased ROS generation in endothelial cells from ethanol-treated rats. The increased generation of O2− induced by ethanol could reduce NO bioavailability and additionally counteract the relaxation induced by acetylcholine due to its direct contractile actions in VSMC [8]. Vitamin C prevented ethanol-induced ROS generation in endothelial cells but not in aortic homogenates as observed in the lucigenin-derived chemiluminescence assay. This result suggests that vitamin C exerts its antioxidant action in endothelial cells and that this action is probably responsible for the maintenance of [NO]c in those cells. The selective action of vitamin C on endothelial cells is corroborated by our findings in cultured VSMC. We demonstrated that exposure of cultured aortic VSMC to ethanol resulted in an increased generation of O2−. Similar to the findings in the experiments with aortic homogenates, vitamin C failed to prevent ethanol-induced O2− generation in VSMC. Reasons for the lack of effect of vitamin C on O2− generation in VSMC are unclear. A possible explanation for this response is that the dose/concentration as well as the period of treatment with vitamin C varies in different studies [12], [16], [17], [18], [37] and [38]. A second explanation concerns the flux of vitamin C across the plasma membrane. Simple diffusion of vitamin C plays a minor role in this process, which is controlled by specific mechanisms of transport that concentrate vitamin C intracellularly enhancing its function as an antioxidant. The active transport of vitamin C through the sodium-dependent transporters SVCT1 and SVCT2 is a relevant mechanism for the transport of vitamin C. Importantly, this transport pathway is regulated under physiological conditions and varies among different cell types [39]. Thus, different patterns on vitamin C uptake by endothelial cells and VSMC could explain the discrepancy described in our study. The fact that levels of plasma TBARS were increased in ethanol-treated rats suggest that increased ROS generation is probably a global phenomenon. Of note, ethanol did not alter aortic GSH levels indicating that, despite the increase in vascular O2− generation, no reduction in cellular antioxidant capacity was evidenced. All together, our results suggest that ethanol-induced increase in O2− generation in endothelial cells is implicated in diminishing the production/release of NO mediated by M3R.
Chen et al. [12] showed that treatment with vitamin C increased SOD activity and improved acetylcholine-induced relaxation in mesenteric arteries from hypertensive rats. SOD activity was increased by vitamin C in our study, and this could be the mechanism underlying its protective action on acetylcholine-induced relaxation. Our functional data strength this idea since tempol, a mimetic of SOD, prevented the decrease in acetylcholine-induced relaxation induced by acute ethanol intake. Moreover, the fact that DETCA, a SOD inhibitor, reduced the relaxation induced by acetylcholine in animals from the ethanol group treated with vitamin C, support the notion that SOD plays a role in the protective effect displayed by the vitamin. Mechanisms whereby vitamin C induces SOD activation are ill defined. Vitamin C was described to directly influence the biological activity of SOD trough phosphorylation of p38MAPK [40]. The present findings show that vitamin C increased p38MAPK phosphorylation, which could be related to SOD activation in our model.
In the vascular tissue, ethanol-mediated generation of O2− and H2O2 is associated with elevations in intracellular calcium and vasoconstriction [8] and [11]. O2− is reduced by SOD to H2O2[10]. The latter is regulated by intracellular and extracellular enzymes, including CAT, which converts H2O2 into water and O2. H2O2 is implicated in the regulation of signaling pathways that lead to vascular contraction [41] and [42], and an increase in H2O2 generation by ethanol could counteract acetylcholine-induced relaxation. However, since no differences on H2O2 levels or CAT activity were evidenced after treatment with ethanol, we conclude that H2O2 seems not to contribute to the vascular dysfunction in our model.
O2− and H2O2 act as signaling molecules, influencing intracellular pathways involved in inflammation, cell growth, and contraction, such as MAPKs [10]. Activation of these molecules is important in the regulation of vascular function and tone. The most common MAPKs are the extracellular signal-regulated kinase ERK1/2, p38MAPK and c-Jun.-N-terminal kinase (JNK). In the present study ethanol did not induce MAPKs phosphorylation. On other hand, vitamin C induced phosphorylation of p38MAPK, which is in accordance with previous findings in human urinary bladder cells [37], rabbit myocytes [43], and bovine endothelial cells [38]. The selective activation of p38MAPK by vitamin C may be related to its specific action on MEKs, which are upstream MAPKs activators. While MEK1/2 phosphorylates ERK1/2, MEK4/7 and MEK3/6 phosphorylates JNK and p38MAPK, respectively [44]. In this sense, the selective action of vitamin C on p38MAPK phosphorylation could be the result of the activation of intracellular signaling pathways that regulates MEK3/6 activation.
RhoA, a member of the Rho family of small GTPase-binding proteins, is abundantly expressed in VSMCs and participates in vasoconstriction via phosphorylation of myosin light chain and sensitization of contractile proteins to calcium. Rho shuttles between the active GTP-bound form on the cell membrane and the inactive GDP-bound form in the cytoplasm. RhoA translocation to the membrane is associated with its activation[45] and [46]. Activation of RhoA is recognized as an important intracellular mechanism of vasoconstriction and accordingly has been implicated in the pathophysiology of hypertension and other

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4. สนทนาเราพบผลในเกิด acetylcholine บุผนังหลอดเลือดขึ้นอยู่กับ vasorelaxation จะคล้ายกับก่อนหน้านี้ทดลอง และทางคลินิกศึกษาตรวจสอบผลครั้งเดียวตอนดื่มสุราเดียวฟังก์ชันบุผนังหลอดเลือด [5] และ [6] ค้นหาใหม่ของเราคือ วิตามินซีที่ทำให้ไม่สามารถทำบุผนังหลอดเลือดที่เกิดจากเอทานอล implicating oxidative ความเครียดในการตอบสนองดังกล่าวเพิ่มเติม ผลของเราจะเกี่ยวข้องตั้งแต่ระดับเอทานอลพลาสม่าที่อธิบายไว้ที่นี่ภายในช่วงที่พบ ในกระแสเลือดของมนุษย์หลังจากการดื่มสุราดื่ม [25] และ [26], และ ในหนู 30 นาทีหลังจากดูแลช่องปากของเอทานอล [5] และ [27]In the rat aorta, the muscarinic cholinergic receptor subtype 3 (M3R) mediates the endothelium-dependent relaxation induced by acetylcholine [28]. Endothelial M3R signals trough eNOS and causes relaxation of the aorta via NO production [29]. Thus, the reduced responsiveness of aortas from ethanol-treated rats to acetylcholine could be due to an impaired production of NO in response to M3R activation. The lack of effect of ethanol on SNP-induced relaxation indicates that the NO pathway, which involves the activation of the enzyme guanylate cyclase and the production of cGMP is therefore unaffected by acute ethanol intake. Our data further shows that in endothelial cells from ethanol-treated rats, vitamin C prevented the decrease in [NO]c in response to acetylcholine, suggesting that vitamin C preserves the endothelial generation of NO in response to M3R activation. This idea is strength by our functional data showing that the inhibition induced by L-NAME on acetylcholine-induced relaxation was more pronounced in aortas from ethanol-treated rats and that this response was not observed after treatment with vitamin C. However, vitamin C was not able to prevent the reduction in the basal production of NOx in aortic homogenates. It is important to note that NOx levels described here represent the basal levels of NO and not the NO generated in response to acetylcholine. This might explain the lack of effect of vitamin C on preventing the reduction in NOx levels because basal NO or the NO released in response to acetylcholine are generated by different sources. Thus, in endothelial cells, vitamin C protects M3R-stimulated production of NO rather than the basal production of NO. Moreover, NOx levels were evaluated in aortic homogenates and for this reason this result will reflect the response of the whole aortic tissue to ethanol without distinction between the endothelium and VSMC.ทำบุผนังหลอดเลือดเกิดจาก ROS สร้างการเพิ่มและลดตามมาของบุผนังหลอดเลือดไม่มีชีวปริมาณออกฤทธิ์ โดยการเพิ่มการยกเลิกการเรียก oxidative หรือ โดยการลดการสังเคราะห์ [30] วิตามินซีแท้จริงเปิดใช้งานของ eNOS และเพิ่มไม่สังเคราะห์ในเซลล์บุผนังหลอดเลือด [31] และ [32], และผลกระทบเหล่านี้อาจมีส่วน vasodilatation endothelium-ขึ้นอยู่กับการปรับปรุงในรุ่นของเรา ใน endothelium ของหลอดเลือดไม่สังเคราะห์ โดย eNOS [33], และกิจกรรมของ isoform ชุดหมายเลขนี้จะถูกกำหนด โดยซับซ้อน calmodulin แคลเซียม การโต้ตอบกับ eNOS ในกิจกรรมเอนไซม์ในระบบเพิ่มขึ้น [29] นอกจากนี้ การเปิดใช้งานของ eNOS ยังได้อิสระของแคลเซียม [34] Kinase แถ/ทรีโอนีน Akt phosphorylates eNOS ที่ตกค้าง Ser1177 จึงเรียกใช้เอนไซม์ [35] ในทางตรงกันข้าม eNOS ถูกห้าม โดย phosphorylation ของตกค้าง Thr495 ซึ่งรบกวนการผูกพันของ calmodulin โดเมน calmodulin ผูก eNOS [36] ในการศึกษาปัจจุบัน วิตามินซีเพิ่มขึ้น phosphorylation Akt และ eNOS ใน Ser1177 สารตกค้าง และผลตอบรับนี้อาจเกี่ยวข้องในการป้องกันผลของวิตามินซี c [ไม่] ในเซลล์บุผนังหลอดเลือด อย่างไรก็ตาม การศึกษาการเปิดใช้งานของ eNOS ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดจะน่าสนใจเพื่อชี้แจงจุดนี้NO inactivation is usually increased in the presence of excessive levels of O2−, which can lead to a decreased vasorelaxation. The present findings demonstrated that ethanol increased O2− generation in the rat aorta, which is in accordance with previous findings [5]. We also showed increased ROS generation in endothelial cells from ethanol-treated rats. The increased generation of O2− induced by ethanol could reduce NO bioavailability and additionally counteract the relaxation induced by acetylcholine due to its direct contractile actions in VSMC [8]. Vitamin C prevented ethanol-induced ROS generation in endothelial cells but not in aortic homogenates as observed in the lucigenin-derived chemiluminescence assay. This result suggests that vitamin C exerts its antioxidant action in endothelial cells and that this action is probably responsible for the maintenance of [NO]c in those cells. The selective action of vitamin C on endothelial cells is corroborated by our findings in cultured VSMC. We demonstrated that exposure of cultured aortic VSMC to ethanol resulted in an increased generation of O2−. Similar to the findings in the experiments with aortic homogenates, vitamin C failed to prevent ethanol-induced O2− generation in VSMC. Reasons for the lack of effect of vitamin C on O2− generation in VSMC are unclear. A possible explanation for this response is that the dose/concentration as well as the period of treatment with vitamin C varies in different studies [12], [16], [17], [18], [37] and [38]. A second explanation concerns the flux of vitamin C across the plasma membrane. Simple diffusion of vitamin C plays a minor role in this process, which is controlled by specific mechanisms of transport that concentrate vitamin C intracellularly enhancing its function as an antioxidant. The active transport of vitamin C through the sodium-dependent transporters SVCT1 and SVCT2 is a relevant mechanism for the transport of vitamin C. Importantly, this transport pathway is regulated under physiological conditions and varies among different cell types [39]. Thus, different patterns on vitamin C uptake by endothelial cells and VSMC could explain the discrepancy described in our study. The fact that levels of plasma TBARS were increased in ethanol-treated rats suggest that increased ROS generation is probably a global phenomenon. Of note, ethanol did not alter aortic GSH levels indicating that, despite the increase in vascular O2− generation, no reduction in cellular antioxidant capacity was evidenced. All together, our results suggest that ethanol-induced increase in O2− generation in endothelial cells is implicated in diminishing the production/release of NO mediated by M3R.เฉิน al. ร้อยเอ็ด [12] พบว่า การรักษา ด้วยวิตามินซีเพิ่มกิจกรรมสดและปรับปรุง acetylcholine ทำให้เกิดความผ่อนคลายในหลอดเลือดแดง mesenteric จากหนู hypertensive กิจกรรมสดเพิ่มขึ้น โดยวิตามินซีในการศึกษาของเรา และอาจมีกลไกต้นแบบของการดำเนินการป้องกันบน acetylcholine ทำให้เกิดการผ่อนคลาย เรากำลังทำงานข้อมูลความคิดนี้ตั้งแต่ tempol, mimetic ของสด ป้องกัน acetylcholine ทำให้เกิดเป็นเกิดจากปริมาณเอทานอลเฉียบพลันลดลง ยิ่งไปกว่านั้น ความจริงที่ว่า DETCA ผลที่สด ลดราคาผ่อนที่เหนี่ยวนำ โดย acetylcholine ในสัตว์จากกลุ่มเอทานอลที่รับการรักษา ด้วยวิตามินซี สนับสนุนความสดมีบทบาทในผลป้องกันโดยวิตามิน โดยวิตามินซีแท้จริงสดเปิดกลไกกำหนดร้ายได้ วิตามินซีถูกอธิบายโดยตรงมีผลต่อกิจกรรมทางชีวภาพของสดราง phosphorylation ของ p38MAPK [40] นำเสนอผลการวิจัยแสดงว่า phosphorylation วิตามิน C เพิ่มขึ้น p38MAPK ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับสดการเปิดใช้งานรุ่นของเราIn the vascular tissue, ethanol-mediated generation of O2− and H2O2 is associated with elevations in intracellular calcium and vasoconstriction [8] and [11]. O2− is reduced by SOD to H2O2[10]. The latter is regulated by intracellular and extracellular enzymes, including CAT, which converts H2O2 into water and O2. H2O2 is implicated in the regulation of signaling pathways that lead to vascular contraction [41] and [42], and an increase in H2O2 generation by ethanol could counteract acetylcholine-induced relaxation. However, since no differences on H2O2 levels or CAT activity were evidenced after treatment with ethanol, we conclude that H2O2 seems not to contribute to the vascular dysfunction in our model.O2− and H2O2 act as signaling molecules, influencing intracellular pathways involved in inflammation, cell growth, and contraction, such as MAPKs [10]. Activation of these molecules is important in the regulation of vascular function and tone. The most common MAPKs are the extracellular signal-regulated kinase ERK1/2, p38MAPK and c-Jun.-N-terminal kinase (JNK). In the present study ethanol did not induce MAPKs phosphorylation. On other hand, vitamin C induced phosphorylation of p38MAPK, which is in accordance with previous findings in human urinary bladder cells [37], rabbit myocytes [43], and bovine endothelial cells [38]. The selective activation of p38MAPK by vitamin C may be related to its specific action on MEKs, which are upstream MAPKs activators. While MEK1/2 phosphorylates ERK1/2, MEK4/7 and MEK3/6 phosphorylates JNK and p38MAPK, respectively [44]. In this sense, the selective action of vitamin C on p38MAPK phosphorylation could be the result of the activation of intracellular signaling pathways that regulates MEK3/6 activation.RhoA, a member of the Rho family of small GTPase-binding proteins, is abundantly expressed in VSMCs and participates in vasoconstriction via phosphorylation of myosin light chain and sensitization of contractile proteins to calcium. Rho shuttles between the active GTP-bound form on the cell membrane and the inactive GDP-bound form in the cytoplasm. RhoA translocation to the membrane is associated with its activation[45] and [46]. Activation of RhoA is recognized as an important intracellular mechanism of vasoconstriction and accordingly has been implicated in the pathophysiology of hypertension and other

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.
การอภิปรายผลการวิจัยของเราการด้อยค่าในacetylcholine ที่เกิด vasorelaxation endothelial ขึ้นอยู่กับการมีความคล้ายคลึงกับการศึกษาและการทดลองทางคลินิกก่อนหน้าการตรวจสอบผลกระทบเพียงครั้งเดียวของการดื่มสุราตอนเดียวในฟังก์ชั่น endothelial [5] และ [6] การค้นพบใหม่ของการศึกษาของเราก็คือวิตามินซีป้องกันไม่ให้เกิดความผิดปกติของหลอดเลือดที่เกิดจากเอทานอลต่อไปรู้เห็นความเครียดออกซิเดชันในการตอบสนองดังกล่าว ผลของเรามีความเกี่ยวข้องตั้งแต่ระดับเอทานอลพลาสม่าที่นี่อธิบายอยู่ในช่วงที่พบในกระแสเลือดของมนุษย์หลังจากดื่มดื่มสุรา [25] และ [26] และในหนู 30 นาทีหลังจากที่การบริหารช่องปากของเอทานอล [5] และ [27]
หลอดเลือดแดงใหญ่ในหนูที่รับ cholinergic muscarinic ย่อย 3 (M3R) ไกล่เกลี่ยผ่อนคลาย endothelium ขึ้นอยู่กับที่เกิดจาก acetylcholine [28] endothelial M3R สัญญาณราง eNOS และทำให้เกิดการผ่อนคลายของหลอดเลือดแดงใหญ่ผ่านการผลิตไม่ [29] ดังนั้นการตอบสนองที่ลดลงของ aortas จากหนูเอทานอลที่ได้รับการ acetylcholine อาจเป็นเพราะการผลิตที่บกพร่องของการไม่ตอบสนองต่อการกระตุ้น M3R ไม่มีผลกระทบของเอทานอลในการผ่อนคลาย SNP ที่เกิดขึ้นแสดงให้เห็นว่าไม่มีทางเดินที่เกี่ยวข้องกับการกระตุ้นการทำงานของเอนไซม์ guanylate cyclase และการผลิตของ cGMP จึงเป็นผลกระทบจากปริมาณเอทานอลเฉียบพลัน ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่าต่อไปในเซลล์บุผนังหลอดเลือดจากหนูเอทานอลที่ได้รับวิตามินซีป้องกันไม่ให้เกิดการลดลงของ [ไม่] คในการตอบสนอง acetylcholine บอกว่าวิตามินซีรักษารุ่น endothelial ของ NO ในการตอบสนองต่อการกระตุ้น M3R ความคิดนี้เป็นความแรงโดยข้อมูลการทำงานของเราแสดงให้เห็นว่าการยับยั้งเกิดจาก L-ชื่อผ่อนคลาย acetylcholine ที่เกิดขึ้นได้เด่นชัดมากขึ้นในการ aortas จากหนูเอทานอลได้รับการรักษาและการตอบสนองนี้ก็ไม่เห็นหลังการรักษาด้วยวิตามินซี แต่เป็นวิตามินซี ไม่สามารถที่จะป้องกันไม่ให้เกิดการลดลงของการผลิตฐาน NOx ใน homogenates หลอดเลือด มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องทราบว่าระดับ NOx อธิบายไว้ที่นี่เป็นตัวแทนของระดับฐานของไม่มีและไม่สร้างไม่ตอบสนองต่อการ acetylcholine นี้อาจอธิบายได้ว่าการขาดการมีผลของวิตามินซีในการป้องกันการลดลงของระดับ NOx เพราะไม่มีฐานหรือไม่ปล่อยออกมาในการตอบสนองต่อ acetylcholine จะถูกสร้างโดยแหล่งที่มาที่แตกต่างกัน ดังนั้นในเซลล์บุผนังหลอดเลือดวิตามินซีช่วยปกป้องการผลิต M3R กระตุ้นของ NO มากกว่าการผลิตฐาน NO นอกจากนี้ระดับ NOx ได้รับการประเมินใน homogenates หลอดเลือดและด้วยเหตุนี้ผลนี้จะสะท้อนให้เห็นถึงการตอบสนองของเนื้อเยื่อหลอดเลือดทั้งเอทานอลไม่มีความแตกต่างระหว่าง endothelium และ VSMC ได้.
ความผิดปกติของ Endothelial มีสาเหตุมาจากการเพิ่มขึ้นในการผลิตอนุมูลอิสระและลดตามมาของการบุผนังหลอดเลือด การดูดซึมไม่ว่าจะโดยการใช้งานที่เพิ่มขึ้นออกซิเดชันและ / หรือโดยการลดการสังเคราะห์ [30] วิตามินซีก่อให้เกิดการกระตุ้นการทำงานของ eNOS และเพิ่มการสังเคราะห์ NO ในเซลล์บุผนังหลอดเลือด [31] และ [32] และผลกระทบเหล่านี้อาจมีส่วนร่วมใน vasodilatation ขึ้น-endothelium ที่ดีขึ้นในรูปแบบของเรา ใน endothelium ของหลอดเลือดไม่ถูกสังเคราะห์โดย eNOS [33] และการทำงานของไอโซฟอร์มนี้ NOS จะถูกควบคุมโดยแคลเซียม calmodulin ที่ซับซ้อนซึ่งมีปฏิสัมพันธ์กับ eNOS ส่งผลให้เอนไซม์เพิ่มขึ้น [29] นอกจากนี้การเปิดใช้งาน eNOS ก็อาจจะเป็นอิสระจากแคลเซียม [34] ซีรีน / ธ รีโอนีไคเนสสิ้นคิด phosphorylates eNOS ที่ตกค้าง Ser1177 จึงเปิดใช้เอนไซม์ [35] ในทางตรงกันข้าม eNOS ถูกยับยั้งโดย phosphorylation ของสารตกค้าง Thr495 ซึ่งรบกวนการผูกพันของ calmodulin กับ eNOS โดเมน calmodulin ผูกพัน [36] ในการศึกษาปัจจุบันวิตามินซีเพิ่มขึ้น phosphorylation ของสิ้นคิดและ eNOS ที่ตกค้าง Ser1177 และการตอบสนองนี้อาจจะมีส่วนร่วมในการป้องกันผลกระทบของวิตามินซีใน [ไม่] คในเซลล์บุผนังหลอดเลือด อย่างไรก็ตามการศึกษาเกี่ยวกับการเปิดใช้งาน eNOS ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดจะเป็นที่สนใจเพื่อชี้แจงจุดนี้.
ใช้งานไม่เพิ่มขึ้นมักจะอยู่ในการปรากฏตัวของระดับที่มากเกินไปของ O2- ซึ่งสามารถนำไปสู่การลดลง vasorelaxation ผลการวิจัยในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าเอทานอลที่เพิ่มขึ้นรุ่น O2- ในหลอดเลือดแดงใหญ่หนูซึ่งเป็นไปตามผลการวิจัยก่อนหน้านี้ด้วย [5] นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นเพิ่มขึ้นรุ่น ROS ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดจากหนูเอทานอลได้รับการรักษา รุ่นที่เพิ่มขึ้นของ O2- ที่เกิดจากเอทานอลจะช่วยลดการดูดซึมและยังไม่ต่อสู้กับการพักผ่อนที่เกิดจาก acetylcholine เพราะการกระทำหดโดยตรงใน VSMC [8] วิตามินซีป้องกันไม่ให้เกิดการผลิตเอทานอล ROS ที่เกิดขึ้นในเซลล์บุผนังหลอดเลือด แต่ไม่ได้อยู่ใน homogenates หลอดเลือดเป็นข้อสังเกตในการทดสอบ chemiluminescence lucigenin มา ผลที่ได้นี้แสดงให้เห็นว่าวิตามินซีออกแรงกระทำสารต้านอนุมูลอิสระในเซลล์บุผนังหลอดเลือดและว่าการกระทำนี้น่าจะเป็นผู้รับผิดชอบในการบำรุงรักษาของ [ไม่] คในเซลล์เหล่านั้น การดำเนินการเลือกของวิตามินซีในเซลล์บุผนังหลอดเลือดมีการยืนยันจากผลการวิจัยของเราใน VSMC เลี้ยง เราแสดงให้เห็นว่าการได้รับของ VSMC หลอดเลือดเลี้ยงเอทานอลมีผลในรุ่นที่เพิ่มขึ้นของ O2- คล้ายกับการค้นพบในการทดลองกับ homogenates หลอดเลือดวิตามิน C ล้มเหลวที่จะป้องกันไม่ให้เกิดการผลิตเอทานอล O2- ที่เกิดขึ้นใน VSMC เหตุผลในการขาดผลของวิตามินซีในรุ่น O2- ใน VSMC มีความชัดเจน คำอธิบายที่เป็นไปได้สำหรับการตอบสนองนี้คือการที่ยา / ความเข้มข้นเช่นเดียวกับระยะเวลาของการรักษาด้วยวิตามินซีแตกต่างกันในการศึกษาที่แตกต่างกัน [12] [16] [17] [18] [37] และ [38] คำอธิบายที่สองเกี่ยวข้องกับการไหลของวิตามินซีผ่านเยื่อหุ้มเซลล์พลาสม่า การแพร่กระจายง่ายของวิตามินซีมีบทบาทรองในกระบวนการนี้ซึ่งถูกควบคุมโดยกลไกที่เฉพาะเจาะจงของการขนส่งที่มีสมาธิภายในเซลล์วิตามินซีเสริมสร้างฟังก์ชั่นที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระ การขนส่งที่ใช้งานของวิตามินซีผ่านการขนส่งขึ้นอยู่กับโซเดียม SVCT1 SVCT2 และเป็นกลไกที่เกี่ยวข้องกับการขนส่งของวิตามินซีที่สำคัญการขนส่งทางเดินนี้จะถูกควบคุมภายใต้เงื่อนไขทางสรีรวิทยาและแตกต่างกันระหว่างเซลล์ชนิดที่แตกต่างกัน [39] ดังนั้นรูปแบบที่แตกต่างกันในการดูดซึมวิตามินซีจากเซลล์บุผนังหลอดเลือดและ VSMC สามารถอธิบายความแตกต่างที่อธิบายไว้ในการศึกษาของเรา ความจริงที่ว่าระดับของ TBARS พลาสม่าเพิ่มขึ้นในหนูเอทานอลได้รับการรักษาที่เพิ่มขึ้นแสดงให้เห็นว่าการสร้าง ROS อาจเป็นปรากฏการณ์ระดับโลก โน้ตเอทานอลไม่ได้ปรับเปลี่ยนระดับหลอดเลือด GSH แสดงให้เห็นว่าแม้จะมีการเพิ่มขึ้นในการผลิต O2- หลอดเลือดลดลงในสารต้านอนุมูลอิสระโทรศัพท์มือถือเป็นหลักฐาน ทั้งหมดเข้าด้วยกันผลของเราแสดงให้เห็นว่าการเพิ่มขึ้นของเอทานอลที่เกิดขึ้นในการผลิต O2- ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดเป็นที่เกี่ยวข้องในการผลิตลดลง / การเปิดตัวของผู้ไกล่เกลี่ยโดยไม่ M3R.
เฉินและอัล [12] แสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วยวิตามินซีเพิ่มขึ้นกิจกรรม SOD และปรับปรุงผ่อนคลาย acetylcholine ที่เกิดขึ้นในหลอดเลือดแดง mesenteric จากหนูความดันโลหิตสูง กิจกรรม SOD เพิ่มขึ้นวิตามินซีในการศึกษาของเราและนี่อาจจะเป็นกลไกพื้นฐานการดำเนินการป้องกันการผ่อนคลาย acetylcholine ที่เกิด ความแรงของข้อมูลของเราทำงานได้ความคิดนี้มาตั้งแต่ tempol, ลอกเลียนแบบของ SOD การป้องกันไม่ให้เกิดการลดลงของการผ่อนคลาย acetylcholine ที่เกิดขึ้นเกิดจากปริมาณเอทานอลเฉียบพลัน นอกจากนี้ยังมีความจริงที่ว่า DETCA ที่ยับยั้ง SOD การลดการผ่อนคลายที่เกิดจาก acetylcholine ในสัตว์จากกลุ่มเอทานอลที่ได้รับวิตามินซีสนับสนุนความคิดที่ว่า SOD มีบทบาทในการป้องกันผลกระทบที่แสดงโดยวิตามิน กลไกโดยวิตามินซีก่อให้เกิดการยืนยันการใช้งานจะมีการกำหนด SOD ป่วย วิตามินซีได้รับการอธิบายที่จะมีอิทธิพลโดยตรงต่อกิจกรรมทางชีวภาพของฟอสโฟราง SOD ของ p38MAPK [40] ผลการวิจัยในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าวิตามินซีเพิ่มขึ้น phosphorylation p38MAPK ซึ่งอาจจะเกี่ยวข้องกับการเปิดใช้งาน SOD ในรูปแบบของเรา.
ในเนื้อเยื่อหลอดเลือด, การผลิตเอทานอลของผู้ไกล่เกลี่ยและ O2- H2O2 มีความสัมพันธ์กับระดับแคลเซียมในเซลล์และ vasoconstriction [8] และ [ 11] O2- จะลดลงตามไป SOD H2O2 [10] หลังถูกควบคุมโดยเอนไซม์ในเซลล์และนอกรวมทั้งกสท. ซึ่งจะแปลง H2O2 ลงไปในน้ำและ O2 H2O2 เป็นที่เกี่ยวข้องในการควบคุมการส่งสัญญาณทางเดินที่นำไปสู่การหดตัวของหลอดเลือด [41] และ [42] และการเพิ่มขึ้นในการผลิตเอทานอลโดย H2O2 สามารถรับมือกับการพักผ่อน acetylcholine ที่เกิด แต่เนื่องจากไม่มีความแตกต่างในระดับ H2O2 หรือกิจกรรมที่กสท. ได้รับหลักฐานหลังการรักษาด้วยเอทานอลที่เราสรุปได้ว่า H2O2 ดูเหมือนจะไม่นำไปสู่ความผิดปกติของหลอดเลือดในรูปแบบของเรา.
O2- และทำหน้าที่ส่งสัญญาณ H2O2 เป็นโมเลกุลที่มีอิทธิพลต่อทางเดินภายในเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบ เจริญเติบโตของเซลล์และการหดตัวเช่น MAPKs [10] การเปิดใช้งานของโมเลกุลเหล่านี้เป็นสิ่งสำคัญในการควบคุมการทำงานของหลอดเลือดและเสียง MAPKs ที่พบมากที่สุดคือไคเนสสัญญาณควบคุมสาร ERK1 / 2, p38MAPK และ C-มิถุนายน-N-มินัลไคเนส (JNK) เอทานอลในการศึกษาครั้งนี้ไม่ได้ทำให้เกิด phosphorylation MAPKs บนมืออื่น ๆ , วิตามินซีเหนี่ยวนำให้เกิด phosphorylation ของ p38MAPK ซึ่งเป็นไปตามกับผลการวิจัยก่อนหน้านี้ในมนุษย์เซลล์กระเพาะปัสสาวะ [37], myocytes กระต่าย [43] และเซลล์บุผนังหลอดเลือดวัว [38] การเปิดใช้งานเลือก p38MAPK โดยวิตามินซีอาจจะเกี่ยวข้องกับการดำเนินการเฉพาะในวันที่ MEKs ซึ่งเป็น activators ต้นน้ำ MAPKs ในขณะที่ MEK1 / 2 phosphorylates ERK1 / 2, MEK4 / 7 และ MEK3 / 6 phosphorylates JNK และ p38MAPK ตามลำดับ [44] ในแง่นี้การดำเนินการเลือกของวิตามินซีใน phosphorylation p38MAPK อาจเป็นผลจากการกระตุ้นของเส้นทางการส่งสัญญาณภายในเซลล์ที่ควบคุมการ MEK3 / 6 ยืนยันการใช้งาน.
RhoA เป็นสมาชิกของครอบครัวโรของโปรตีนขนาดเล็กที่มีผลผูกพัน GTPase จะแสดงมากใน VSMCs และมีส่วนร่วมใน vasoconstriction ผ่าน phosphorylation ของห่วงโซ่แสง myosin และอาการแพ้โปรตีนแคลเซียมหดตัว รถรับส่งระหว่างโรรูปแบบฉี่ที่ถูกผูกไว้ใช้งานบนเยื่อหุ้มเซลล์และรูปแบบของจีดีพีที่ถูกผูกไว้ไม่ได้ใช้งานในพลาสซึม โยกย้าย RhoA เมมเบรนจะมีความเกี่ยวข้องกับการเปิดใช้งาน [45] และ [46] เปิดใช้งานของ RhoA ได้รับการยอมรับในฐานะที่เป็นกลไกที่สำคัญของเซลล์ vasoconstriction และตามที่ได้รับการที่เกี่ยวข้องในพยาธิสรีรวิทยาของความดันโลหิตสูงและอื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 อภิปรายผลการวิจัยของเรา
บกพร่องใน acetylcholine และขึ้นอยู่กับบุ vasorelaxation จะคล้ายกับก่อนหน้าการทดลองและการศึกษาทางคลินิกการตรวจสอบผลกระทบของการดื่มสุราเพียงตอนเดียวฟังก์ชัน [ บุ 5 ] และ [ 6 ] การค้นพบใหม่ของการศึกษาของเราคือว่า วิตามินซี ป้องกันความผิดปกติของ endothelial ที่ชักนำด้วยเอทานอลยังพาดพิงไปถึง ภาวะเครียดออกซิเดชันในการตอบสนองดังกล่าว ผลลัพธ์ของเราที่เกี่ยวข้องตั้งแต่ระดับพลาสมาเอทานอลที่อธิบายไว้ที่นี่ในช่วงที่พบในกระแสเลือดของมนุษย์หลังจากดื่ม ) [ 25 ] และ [ 26 ] และในหนู 30 นาทีหลังการบริหารช่องปากของเอทานอล [ 5 ] และ [ 27 ] .
ในหนูขาวหลอดเลือดแดงใหญ่ทาง muscarinic ชนะขาดลอยตัวรับทั้ง 3 ( m3r ) mediates endothelium-dependent ผ่อนคลายกระตุ้นด้วย acetylcholine [ 28 ] บุสัญญาณ m3r รางนอสและสาเหตุของหลอดเลือดผ่อนคลายผ่านไม่มีการผลิต [ 29 ] ดังนั้น การลดการตอบสนองของ aortas จากเอทานอลถือว่าหนูอะเซทิลโคลีน อาจเกิดจากการบกพร่องของการผลิตในการตอบสนองต่อ m3r ไม่เปิดใช้งานขาดของผลกระทบของเอทานอลใน SNP เกิดการผ่อนคลายที่บ่งชี้ว่าไม่มีเส้นทางที่เกี่ยวข้องกับการกระตุ้นเอนไซม์กัวไนเลตไซเคลสและการผลิต cGMP จึงได้รับผลกระทบจากการบริโภคแอลกอฮอล์เฉียบพลัน ข้อมูลเพิ่มเติม พบว่าในเซลล์เยื่อบุจากเอทานอลทำกับหนู วิตามินซีช่วยลด [ ไม่ ] C ในการตอบสนองต่อสารอะเซติลโคลีน ,แนะนำว่า วิตามินซีรักษารุ่นบุไม่ตอบสนองต่อการกระตุ้น m3r . ความคิดนี้มีความแข็งแกร่ง โดยการทํางานของเราแสดงให้เห็นว่าข้อมูลที่ชักนำด้วยสารยับยั้งอะเซติลโคลีนกระตุ้นการผ่อนคลายที่