Samples harvested at different time

Samples harvested at different time points were centrifuged first at 5000 × g for 5 min. The supernatant was filtered through 0.2 m nylon filter for HPLC determination of sugar concentrations. The pellets were then washed with DDW twice and freeze-dried overnight to obtain biomass DW. The dried biomass was also used for lipid content analysis. Sugar concentrations were determined by HPLC (Shimadzu Scientific Instrument, Inc., Columbia, MD, USA) with a refractive index detector. A Supelcosil LC-NH2 column (5 m, 25 cm × 4.6 mm) was used with 75% acetonitrile in DDW as the mobile phase. The flow rate was 1 mL/min. The injection volume was 20 L. Concentrations of glucose, fructose, and sucrose were calculated based on calibration curves built for these three sugars using standard chemicals. Cellular lipid content was determined following a procedure developed in our laboratory [26]. In short, 0.5 g dried cell pellet was transferred to a 7-mL chamber of a bead-beater (Bio-Spec Products, Bartlesville, OK, USA). This chamber was filled with 0.5 mm zirconium beads to approximately 5 mL. Methanol was then added to fill the rest of the chamber. After cells were disrupted by bead-beating for 2 min,the entire content was transferred to a 50-mL plastic centrifuge tube. The chamber was washed twice using methanol (total 10 mL) to collect the yeast residue. Chloroform was then added to the tube to make the chloroform/methanol ratio of 2:1 (v/v). The tube was vortexed for 5 min and was allowed to stand for 24 h. After that, the liquid layer was transferred to another tube and centrifuged at 5000 × g for 5 min to remove the zirconium beads and yeast residuals. The collected supernatant was then transferred to a Rotovap where solvent was evaporated. Oil left in the roundbottom flask without solvent was weighed to calculate oil content.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างที่เก็บเกี่ยว ณจุดเวลาต่าง ๆ ได้จากครั้งแรกที่ 5000 × g 5 นาที Supernatant ที่ถูกกรองผ่านกรองไนล่อน 0.2 m สำหรับ HPLC การกำหนดความเข้มข้นของน้ำตาล เม็ดล้าง ด้วย DDW สองครั้งแล้ว และชนิดแห้งข้ามคืนจะได้รับ DW ชีวมวล ชีวมวลแห้งการวิเคราะห์เนื้อหาของไขมัน ความเข้มข้นของน้ำตาลถูกกำหนด โดย HPLC (เครื่องมือวิทยาศาสตร์ Shimadzu, Inc. โคลัมเบีย MD สหรัฐอเมริกา) กับเครื่องตรวจจับดัชนีหักเห คอลัมน์ Supelcosil LC-NH2 (5 m, 25 ซม. × 4.6 mm) ใช้กับ acetonitrile 75% ใน DDW เป็นขั้นตอนมือถือ อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาทีได้ ปริมาณฉีดถูก 20 ลิตรความเข้มข้นกลูโคส ฟรักโทส และซูโครสสำหรับน้ำตาลเหล่านี้สามใช้สารเคมีมาตรฐานกราฟสอบเทียบตามที่คำนวณได้ เซลล์ไขมันที่ถูกกำหนดตามกระบวนการพัฒนาในห้องปฏิบัติการ [26] ในระยะสั้น เม็ดเซลล์แห้ง 0.5 กรัมถูกย้ายไปห้อง 7 มิลลิลิตรของตัวลูกปัดตี (ผลิตภัณฑ์ชีวภาพสเป็ค Bartlesville ตกลง สหรัฐอเมริกา) หอนี้ก็เต็มไป ด้วยลูกปัดเซอร์โคเนียม 0.5 มม.ไปประมาณ 5 มล. เมทานอลแล้วถูกเติมส่วนเหลือของห้อง หลังจากที่เซลล์ถูกแทรกแซง ด้วยลูกปัดตี 2 นาที เนื้อหาทั้งหมดถูกถ่ายโอนไปหลอดหมุนเหวี่ยงพลาสติก 50 มล. ห้องถูกล้างสองครั้งโดยใช้เมทานอล (รวม 10 mL) การรวบรวมกากยีสต์ คลอโรฟอร์มแล้วถูกหลอดจะทำให้คลอโรฟอร์ม/เมทานอลอัตราส่วน 2:1 (v/v) หลอดเป็น vortexed 5 นาที และได้รับอนุญาตให้ยืนใน 24 ชม หลังจากนั้น ชั้นของเหลวที่ถูกโอนย้ายไปหลอด และจากที่ 5000 × g สำหรับการเอาลูกปัดเซอร์โคเนียมและยีสต์เหลือ 5 นาที Supernatant รวบรวมแล้วโอนย้ายไป Rotovap ซึ่งมีระเหยตัวทำละลาย น้ำมันที่เหลือในขวด roundbottom โดยตัวทำละลายถูกชั่งน้ำหนักเพื่อคำนวณปริมาณน้ำมัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างการเก็บเกี่ยวที่จุดเวลาที่แตกต่างกันปั่นครั้งแรกที่ 5000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาที ใสถูกกรองผ่าน 0.2 เมตรกรองไนล่อนสำหรับ HPLC กำหนดความเข้มข้นของน้ำตาล เม็ดถูกล้างแล้วกับ DDW สองครั้งและแห้งค้างคืนที่จะได้รับใบสำคัญแสดงสิทธิอนุพันธ์ชีวมวล ชีวมวลแห้งยังใช้สำหรับการวิเคราะห์ไขมัน ความเข้มข้นของน้ำตาลที่ถูกกำหนดโดยวิธี HPLC (Shimadzu วิทยาศาสตร์ Instrument, Inc, โคลัมเบีย, MD, USA) ด้วยเครื่องตรวจจับดัชนีหักเห Supelcosil LC-NH2 คอลัมน์ (5 เมตร 25 ซม. × 4.6 มิลลิเมตร) ถูกนำมาใช้กับ 75% ใน acetonitrile DDW เป็นเฟสเคลื่อนที่ อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาที ปริมาณการฉีดเป็น 20 ลิตรความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคสฟรุกโตสและซูโครสคำนวณขึ้นจากเส้นโค้งการสอบเทียบที่สร้างขึ้นสำหรับทั้งสามน้ำตาลใช้สารเคมีมาตรฐาน ไขมันเซลลูลาร์ก็ตัดสินใจทำตามขั้นตอนที่พัฒนาขึ้นในห้องปฏิบัติการของเรา [26] ในระยะสั้น 0.5 กรัมตะกอนเซลล์แห้งถูกย้ายไปอยู่ห้อง 7 มลลูกปัดชนะเลิศ (ผลิตภัณฑ์ Bio-Spec, บาร์เทิล, OK, USA) ห้องนี้ก็เต็มไปด้วยลูกปัดเซอร์โคเนียม 0.5 มมประมาณ 5 มิลลิลิตร เมทานอลถูกเพิ่มเข้ามาแล้วเพื่อเติมเต็มส่วนที่เหลือของห้องที่ หลังจากที่เซลล์ถูกรบกวนด้วยลูกปัดเต้นเป็นเวลา 2 นาที, เนื้อหาทั้งหมดถูกย้ายไปยังหลอด centrifuge พลาสติก 50 มิลลิลิตร ห้องถูกล้างครั้งที่สองโดยใช้เมทานอล (ทั้งหมด 10 มิลลิลิตร) ในการเก็บรวบรวมกากยีสต์ คลอโรฟอร์มถูกเพิ่มเข้ามาแล้วหลอดจะทำให้อัตราส่วนคลอโรฟอร์ม / เมทานอล 2: 1 (v / v) หลอดถูกหมุนวนเป็นเวลา 5 นาทีและได้รับอนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนั้นชั้นของเหลวถูกย้ายไปที่อื่นและหลอดหมุนเหวี่ยงที่ 5000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อขจัดเม็ดเซอร์โคเนียมและเหลือยีสต์ ใสที่เก็บรวบรวมจากนั้นก็ย้ายไป Rotovap ที่ตัวทำละลายระเหย น้ำมันที่เหลืออยู่ในขวด roundbottom โดยไม่ต้องทำละลายจะถูกชั่งน้ำหนักในการคำนวณปริมาณน้ำมัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างการเก็บเกี่ยวที่จุดเวลาต่างกัน ระดับแรกที่ 5000 × g 5 นาทีนำถูกกรองผ่านผ้าไนล่อนกรองสูง 0.2 เมตรปริมาณน้ำตาลเข้มข้น ขี้แล้วล้างด้วย ddw สองครั้งและแห้งข้ามคืนเพื่อให้ได้ชีวมวลแห้ง . มวลชีวภาพแห้ง ก็ใช้สำหรับการวิเคราะห์ปริมาณไขมัน น้ำตาลความเข้มข้นที่กำหนดโดย HPLC ( Shimadzu เครื่องมือวิทยาศาสตร์ , Inc , โคลัมเบีย , แมรี่แลนด์สหรัฐอเมริกา ) ด้วยเครื่องตรวจวัดดรรชนีหักเห . เป็น supelcosil lc-nh2 คอลัมน์ ( 5 เมตร 25 cm × 4.6 มม. ) ใช้กับไน 75% ใน ddw เป็นเฟสเคลื่อนที่ อัตราการไหลเท่ากับ 1 มิลลิลิตร / นาที ฉีดปริมาณ 20 ลิตร ความเข้มข้นของกลูโคส ฟรุคโตสและซูโครส ) คำนวณตามเส้นโค้งสอบเทียบสร้างเหล่านี้น้ำตาลสามใช้สารเคมีมาตรฐาน ปริมาณเซลล์ไขมัน พิจารณาต่อไปนี้เป็นขั้นตอนในการพัฒนาห้องปฏิบัติการของเรา [ 26 ] ในระยะสั้น , 0.5 กรัมเซลล์เม็ดแห้งถูกย้ายไปห้อง 7-ml ลูกปัดตี ( ไบโอ สเป็คสินค้า , bartlesville , โอเค , USA ) ห้องนี้เต็มไปด้วย 0.5 มม. เซอร์โคเนียมลูกปัดประมาณ 5 มิลลิลิตร ต่อจากนั้นเพิ่มเติมส่วนที่เหลือของห้อง เมื่อเซลล์ถูกรบกวนจากลูกแก้วเต้น 2 นาที เนื้อหาทั้งหมดถูกโอนไปยัง centrifuge หลอดพลาสติก 50 ml . ห้องล้างสองครั้งโดยใช้เมทานอล ( รวม 10 มล. ) เพื่อรวบรวมยีสต์กาก คลอโรฟอร์ม แล้วเพิ่มหลอดให้คลอโรฟอร์ม / เมทานอลอัตราส่วน 2 : 1 ( v / v ) หลอดมัน vortexed เป็นเวลา 5 นาที และได้รับอนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนั้นชั้นของเหลวไปเป็นหลอดอื่น และระดับที่ 5 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีลบเซอร์โคเนียมลูกปัดและความคลาดเคลื่อนของยีสต์ รวบรวมนำถูกโอนให้กับ rotovap ตัวทําละลายที่ระเหย น้ำมันที่เหลือในขวดโดยไม่ลองบอตทอลตัวทําละลายหนัก คำนวณปริมาณน้ำมัน .