Cloning of xylanase II (XynII) gene

Cloning of xylanase II (XynII) gene

An expressed sequence tag (EST) was obtained previously through EST sequencing of a V. volvacea cDNA library constructed from mRNA isolated from mycelia of strain V14 grown on rice straw compost. Based on a BLAST search against recent GenBank releases, this EST sequence showed homology to xylanase. The gene-specific primer
50 -GCGCTTGGCGAGGGCAACAATTTCGT-30 based on
the EST sequence was designed to generate the 50 - end DNA fragment coding for XynII by rapid amplification of cDNA ends (RACE)—PCR using the SMART RACE cDNA Amplification Kit (Clontech, Palo Alto, CA, USA). The 50 - cDNA end fragment was subcloned into the pGEM-T vector and sequenced. The full-length cDNA of xynII was then generated by 30 - RACE using the gene- specific primer 50 -GGGAGGCATCACCCAGCTTCTTCG TACC-30 designed from the sequence of the extreme
50 - end of xynII, and sequenced as above.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ของยีนไซลาเนส II (XynII)มีแท็กแสดงลำดับ (EST) ได้รับก่อนหน้านี้ผ่าน EST ลำดับของ V. volvacea cDNA รีสร้างจาก mRNA ที่แยกต่างหากจาก mycelia ต้องใช้ V14 ปลูกในปุ๋ยฟางข้าว ใช้ในการค้นหาระเบิดกับรุ่นล่าสุดของ GenBank, EST ลำดับนี้แสดงให้เห็นว่า homology กับไซลาเนส รองพื้นเฉพาะยีนใช้ 50 - GCGCTTGGCGAGGGCAACAATTTCGT-30ลำดับ EST ถูกออกแบบเพื่อสร้างการ 50 - ดีเอ็นเอส่วนรหัสสำหรับ XynII สิ้นสุด โดยขยายอย่างรวดเร็วของ cDNA สิ้นสุดลง (แข่งขัน) — PCR ใช้ cDNA แข่งขันสมาร์ทชุดขยาย (Clontech ดัลลัส CA, USA) 50 - ส่วนท้าย cDNA ถูก subcloned เป็นเวกเตอร์ pGEM T และเรียงลำดับ CDNA ปราศจากของ xynII ถูก แล้วสร้าง โดย 30 - แข่งขันการใช้รองพื้นเฉพาะยีน 50 - GGGAGGCATCACCCAGCTTCTTCG TACC 30 ออกจากลำดับของสุด50 - จุดสิ้นสุดของ xynII และเรียงลำดับดังกล่าว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โคลนไซลาเนสที่สอง (XynII) ยีนแสดงแท็กลำดับ(EST) ที่ได้รับก่อนหน้านี้ผ่านการเรียงลำดับของโวลต์ห้องสมุด cDNA volvacea EST สร้างจาก mRNA ที่แยกได้จากเส้นใยของ V14 สายพันธุ์ที่ปลูกในปุ๋ยหมักฟางข้าว ขึ้นอยู่กับการค้นหาระเบิดกับรุ่น GenBank ที่ผ่านมานี้แสดงให้เห็นว่าลำดับ EST ที่คล้ายคลึงกันที่จะไซลาเนส ไพรเมอร์ยีนที่เฉพาะเจาะจง50 -GCGCTTGGCGAGGGCAACAATTTCGT-30 ขึ้นอยู่กับลำดับEST ถูกออกแบบมาเพื่อสร้าง 50 - สิ้นสุดการเข้ารหัสส่วนดีเอ็นเอ XynII โดยการขยายตัวอย่างรวดเร็วของยีนปลาย (RACE) -PCR ใช้การแข่งขันสมาร์ท cDNA Amplification Kit (Clontech, พาโลอัล Alto, CA, USA) 50 - ส่วนท้าย cDNA ถูก subcloned ลงในเวกเตอร์ pGEM-T และติดใจ ยีนยาวเต็มรูปแบบของ xynII ถูกสร้างขึ้นแล้วโดยวันที่ 30 - การแข่งขันโดยใช้ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจง gene- 50 -GGGAGGCATCACCCAGCTTCTTCG TACC-30 ได้รับการออกแบบจากลำดับของที่มากที่สุด50 - ท้ายของ xynII และลำดับขั้นตอนดังกล่าวข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโคลนยีนไซแลเนส II ( xynii )

ที่แสดงลำดับแท็ก ( EST ) ได้เคยผ่านการเป็นห้องสมุด cDNA โวลต์ EST volvacea สร้างจากยีนที่แยกได้จากเส้นใยของ v14 สายพันธุ์ที่ปลูกในปุ๋ยหมักฟางข้าว ขึ้นอยู่กับการต่อต้านล่าสุดพบระเบิดออก ลำดับ EST พบตัวเนส . ยีนที่เฉพาะเจาะจงเช่น
50 - gcgcttggcgagggcaacaatttcgt-30 ตาม
ลำดับ EST ถูกออกแบบมาเพื่อสร้าง 50 - ปลายดีเอ็นเอรหัสสำหรับ xynii โดยการขยายอย่างรวดเร็วของ cDNA Ends ( แข่ง ) - PCR โดยใช้ cDNA amplification สมาร์ทแข่งชุด ( clontech , พาโลอัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) 50 - จบส่วนของยีนอยู่ใน pgem-t เวกเตอร์นี้วิธี xynii เต็มตัวของก็สร้างขึ้นโดย 30 -- การแข่งขันโดยใช้ยีน - เฉพาะรองพื้น 50 - gggaggcatcacccagcttcttcg tacc-30 ออกแบบมาจากลำดับมาก
50 - จบ xynii และลำดับข้างต้น