Xylem sap samples were collected from several
Ni-D and Ni-S trees at bud break in late March.
Sap was collected via vacuum extracted from stemssevered about 2 cm above the root collar and again
just below the apical tip. Phloem and bark were
removed for the distance of 1 cm from the base,
and the base of severed stems placed in a vacuum
chamber, the exuding xylem sap collected into 2 ml
vials, and the sap samples immediately frozen.
Xylem sap samples from twelve representative
trees of each of the two Ni treatments were
randomly selected and then processed in triplicate
for reduced-N and urease analysis. Equivalent
volumes of xylem sap for each sample were thawed
and twice centrifuged (20,000g) for 30 min. The
supernatant was further purified by removing
molecules ≥10-kD by twice fi ltering through a
Centricon-10 fi lter (Millipore fi lter units, Millipore,
Bedford, MA) after centrifugation (5,000g) for
75 min. The partially purifi ed samples were then
analyzed for ureides using UV spectroscopy and
HPLC. For identifi cation purposes, samples were
processed on the two above described HPLC
columns with different eluants.
ตัวอย่าง SAP xylem ถูกเก็บรวบรวมจากหลาย
NI-d และต้นไม้ NI-s ที่แตกหน่อในช่วงปลายเดือนมีนาคม.
SAP ถูกรวบรวมผ่านทางระบบสูญญากาศที่สกัดจาก stemssevered ประมาณ 2 เซนติเมตรเหนือคอรากและอีกครั้ง
อยู่ด้านล่างของปลายยอด ใยเปลือกไม้และเปลือกไม้เป็น
ลบออกเป็นระยะทาง 1 ซม. จากฐาน
และฐานของลำต้นที่ถูกตัดวางอยู่ในสูญญากาศในห้อง
, SAP xylem ลำต้นเก็บเป็น 2 มล. ขวด
,และตัวอย่างน้ำนมแช่แข็งทันที. xylem
ตัวอย่างน้ำนมจากสิบสองตัวแทนของต้นไม้
ของแต่ละของทั้งสองทรีทเม้นพรรณีเป็น
สุ่มเลือกและประมวลผลแล้วใน
เพิ่มขึ้นสามเท่าการลด n และการวิเคราะห์ยูรีเอส ปริมาณ
เทียบเท่าของ SAP xylem แต่ละตัวอย่างถูกละลาย
และครั้งที่สองขี้แป้ง (20,000 g) เป็นเวลา 30 นาที สารละลาย
ให้บริสุทธิ์โดยการลบ
โมเลกุล≥ 10-KD โดย ltering สายสองผ่าน
centricon-10 สาย lter (Millipore หน่วยสาย lter, Millipore
Bedford, MA) หลังจากหมุนเหวี่ยง (5,000 กรัม) สำหรับ 75 นาที
บางส่วน purifi ตัวอย่างเอ็ดถูกแล้ว
วิเคราะห์ ureides ใช้สเปกโทรสโกและ UV
HPLC สำหรับ identifi วัตถุประสงค์ไอออนบวกตัวอย่างเป็น
การประมวลผลในทั้งสองข้างต้นอธิบายคอลัมน์
hplc กับ eluants ที่แตกต่างกัน
การแปล กรุณารอสักครู่..
xylem SAP ได้จากการเก็บข้อมูลตัวอย่างจากหลาย
Ni - D และ Ni - S ต้นที่งอกหยุดพักในช่วงปลายเดือนมีนาคม.
SAP ถูกเก็บรวบรวมผ่านทางเครื่องดูดฝุ่นมาจาก stemssevered ประมาณ 2 ซม.ขึ้นไปที่รากคอเสื้อและอีกครั้ง
อยู่ที่ด้านล่างที่ apical ปลายแผ่นความร้อน Steam Tip . เห่าและ phloem มี
ออกสำหรับระยะทางที่ 1 ซม.จากฐาน
และฐานของก้านตัดออกวางไว้ในเครื่องดูดฝุ่น
ช่องเก็บเศษหนวดที่ xylem สะวดสกบายไม่รวมถึงที่ SAP เก็บรวบรวมไว้ใน 2 มล.
vialsSAP และตัวอย่างที่แช่แข็งในทันที.
xylem SAP ตัวอย่างจากสิบสองตัวแทน
ซึ่งจะช่วยต้นของสองการบำบัด NI ที่แต่ละคน
ซึ่งจะช่วยแบบสุ่มที่เลือกแล้วดำเนินการในเป็นสาม
ซึ่งจะช่วยในการวิเคราะห์ลดลง - N และ urease มีปริมาณเท่ากับของ xylem
ซึ่งจะช่วยซับสำหรับตัวอย่างแต่ละครั้งก็ละลาย
และ centrifuged สองครั้ง( 20 , 000 กรัม)สำหรับ 30 นาที
supernatant นั้นบริสุทธิ์โดยการถอด
เพิ่มเติมโมเลกุล≥ 10 , kd โดยสองครั้งไฟร์ ltering ผ่าน
centricon 10 แผ่นกรองเมื่อครบกำหนด( millipore แผ่นกรองเมื่อครบกำหนดหน่วย, millipore ,
Bedford , MA )หลังจากผลิต( 5 , 000 กรัม)สำหรับ
75 นาทีที่บางส่วน purifi Ed ตัวอย่างมีแล้ว
ซึ่งจะช่วยวิเคราะห์ ureides โดยใช้รังสี UV Emission Spectroscopy และ
hplc. สำหรับวัตถุประสงค์ละออง identifi ตัวอย่างมี
ซึ่งจะช่วยดำเนินการในสองคอลัมน์ hplc
เหนือที่แตกต่างกันไปพร้อมด้วย eluants
การแปล กรุณารอสักครู่..