2.2. Scoring of microsatelliteSix m

2.2. Scoring of microsatellite
Six microsatellite loci, Cga01, Cga02, Cga03, Cga06, Cga09 and Cga10 were amplified from the individual DNA samples using the primers developed by Galbusera et al. (1996). Each 10 μl total reaction contained 5–10 ng of DNA templates, 0.25 pmol each of the forward
and reverse primers, 1X PCR buffer, 1.5 mM MgCl2, 100 μM dNTP, and 0.2 unit of Taq DNA Polymerase (Fermentas). The PCR reactions were performed in a PTC-100TM Programmable Thermal Controller (MJ Research, Inc.) employing PCR profiles as follows: predenaturation at 95 °C for 5 min; followed by 35 cycles of: 30 s denaturation at 95 °C, 30 s of annealing at 52–56 °C and 1 min extension at 72 °C; followed by 72 °C final extension for 5 min prior to storage at 4 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. การให้คะแนนของชนิด microsatelliteหกชนิด microsatellite ตำแหน่งอ่อนแอ Cga01, Cga02, Cga03, Cga06, Cga09 และ Cga10 ถูกขยายจากตัวอย่างดีเอ็นเอแต่ละโดยใช้ไพรเมอร์ที่พัฒนาโดย Galbusera et al. (1996) แต่ละปฏิกิริยาทั้งหมดของ 10 μl อยู่ 5-10 ฉบับของดีเอ็นเอแม่แบบ ราคาชิ้นละ 0.25 pmol ของไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ บัฟเฟอร์ X PCR 1, 1.5 มม. MgCl2, 100 μ m dNTP และ 0.2 หน่วยของ Taq DNA พอลิเมอเรส (Fermentas) ดำเนินการในตัว PTC 100TM โปรแกรมความร้อนควบคุม (MJ วิจัย Inc.) ใช้โพรไฟล์ PCR ดังปฏิกิริยา PCR: predenaturation 95 ° c 5 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 ของ: 30 s แปรสภาพที่ 95 ° C, 30 ของการหลอมที่ 52 – 56 ° C และนามสกุล 1 นาทีที่อุณหภูมิ 72 ° C ตาม ด้วยนามสกุลสุดท้าย 72 ° C 5 นาทีก่อนเก็บที่ 4 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . ใช้เกณฑ์การให้คะแนนของหกชนิดของ cga01 cga02 cga03 , , , , cga09 cga06 cga10 , และถูกขยายจากแต่ละตัวอย่างดีเอ็นเอ โดยใช้ไพรเมอร์ที่พัฒนาโดย galbusera et al . ( 1996 ) แต่ละชั้นรวม 10 μปฏิกิริยามีอยู่ 5 – 10 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ , 0.25 pmol แต่ละด้านหน้าและกลับใช้ PCR ไพรเมอร์ , บัฟเฟอร์ , 1.5 mm ชุด 100 μ M dntp และ 0.2 หน่วยดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( fermentas ) การตรวจปฏิกิริยาแสดงโปรแกรมควบคุมความร้อนใน ptc-100tm ( วิจัย , MJ Inc . ) ซึ่งใช้โพรไฟล์ดังนี้ predenaturation ที่ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 35 รอบ 30 s ( ที่ 95 องศา C 30 วินาที annealing ที่ 52 และ 56 ° C และ 1 นาทีที่ 72 ° C ) ; ตามด้วย 72 ° C สุดท้ายส่วนขยายสำหรับ 5 นาทีก่อนที่จะเก็บที่อุณหภูมิ 4 องศา