facilitate the study of the multifa

facilitate the study of the multifaceted physiology of vitamin K,
further advances should be made in the extraction procedures to
determine the vitamin K homologues and their metabolites re-
liably in biological matrices.
To date, several chromatographic methods were reported for
the trace determination of vitamins K in biological samples in-
cluding high performance liquid chromatography (HPLC) with
ultraviolet (UV) [15,16], fluorescence [17–21], electrochemical
[22,23], chemiluminescence (CL) [24,25] and mass spectrometric
detection [26–31]. However, the lower concentrations of vitamin K
homologues could not be detected by many of the reported
methods [15,16] while the reproducibility problems hinder the use
of electrochemical methods [22,23]. In addition, many of the re-
ported methods suffered from complicated and time-consuming
sample preparation procedures.
Sample preparation procedures of vitamin K homologues, in
most cases, included either liquid–liquid extraction (LLE), or solid-
phase extraction (SPE). However, these procedures were time
consuming, generally labor intensive and require large quantities
of expensive, toxic and environmentally hazardous organic sol-
vents. Salting-out is a process of addition of electrolytes to an
aqueous phase in order to increase the distribution ratio of a
particular solute. Salting-out assisted liquid/liquid extraction
(SALLE) with water miscible organic solvent has shown its dis-
tinctive advantages in bioanalytical research [31]. SALLE is super-
ior to LLE for extract cleanness. SALLE uses environmentally safe
reagents compared with common sample preparation techniques
[32].
The aim of the present work was to develop a SALLE method
coupled with HPLC-Fluorescence (FL) for trace determination of
vitamin K homologues in biological samples. The method involved
also a new efficient derivatization method for the target analytes
using ethanolic stannous chloride solution in acidic medium to
generate highly fluorescent naphthohydroquinone derivatives. The
developed extraction and analysis methods were optimized, vali-
dated according to US-FDA guidance [33] for the target purposes
and applied for the trace determination of vitamin K homologues
in real samples.

2. Experimental

2.1. Materials and reagents

PK and MK-4 were purchased from Sigma Aldrich (Seelze,
Germany). MK-7 was from Santa Cruz Biotechnology (Texas, USA).
Vitamin K3 (2-methyl-1,4-naphthoquinone), Silver nitrate,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อำนวยความสะดวกในการศึกษาสรีรวิทยาของแผนของวิตามิน Kความก้าวหน้าต่อไปควรทำการแยกขั้นตอนการกำหนด homologues วิตามิน K และ re metabolites ของ-ในเมทริกซ์ชีวภาพ liablyวันที่ chromatographic หลายวิธีมีรายงานการกำหนดการติดตาม K วิตามินในตัวอย่างชีวภาพในcluding ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) [15,16], fluorescence [17-21], ไฟฟ้า[22,23], chemiluminescence (CL) [24,25] และมวล spectrometricตรวจ [26-31] อย่างไรก็ตาม ความเข้มข้นต่ำของวิตามิน Kไม่พบ homologues หลายรายงานวิธีการ [15,16] ในขณะที่ปัญหา reproducibility ขัดขวางการใช้ไฟฟ้าวิธี [22,23] นอกจากนี้ หลายเรื่อง-วิธีการพอร์ตก่อนรับความเดือดร้อนจากความซับซ้อน และใช้เวลานานขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างตัวอย่างขั้นตอนการเตรียมของวิตามิน K homologues ในใหญ่ รวมสกัดของเหลว – ของเหลว (LLE), หรือของแข็ง-ขั้นตอนการสกัด (SPE) อย่างไรก็ตาม ขั้นตอนเหล่านี้ถูกเวลาบริโภค โดยทั่วไปแรงงานเร่งรัด และต้องการปริมาณมากแพง เป็นพิษ และเป็นอันตรายต่อสิ่งแวดล้อมเกษตรอินทรีย์โซล-ช่องลม ออกมารีซอลทิงเป็นกระบวนการแห่งไลต์เพื่อการระยะอควีเพื่อเพิ่มสัดส่วนการกระจายตัวเฉพาะตัว ออกมารีซอลทิงช่วยสกัดของเหลว/ของเหลว(SALLE) น้ำ ตัวทำละลายอินทรีย์ miscible ได้แสดงหรือไม่??ความ -ข้อดี tinctive bioanalytical วิจัย [31] SALLE เป็นซูเปอร์-ior ให้ LLE สำหรับสารสกัดสะอาด SALLE ใช้สิ่งแวดล้อมreagents เมื่อเทียบกับเทคนิคการเตรียมตัวอย่างทั่วไป[32]จุดมุ่งหมายของการทำงานปัจจุบันคือการ พัฒนาวิธี SALLEควบคู่กับ HPLC Fluorescence (FL) สำหรับการกำหนดติดตามhomologues วิตามิน K ในตัวอย่างชีวภาพ วิธีการเกี่ยวข้องยัง efficient derivatization วิธีใหม่สำหรับ analytes เป้าหมายใช้โซลูชัน ethanolic stannous คลอไรด์กรดปานกลางถึงสร้างตราสารอนุพันธ์ naphthohydroquinone fluorescent สูง ที่พัฒนาสกัด และวิเคราะห์วิธีได้เหมาะ vali-ลงตามคำแนะนำขององค์การอาหารและยาสหรัฐอเมริกา [33] ประสงค์เป้าหมายและใช้สำหรับการกำหนดติดตามของวิตามิน K homologuesในตัวอย่างจริง2. ทดลอง2.1. วัสดุและ reagentsซื้อจาก Aldrich ซิก (Seelze พีเคและเอ็ม 4เยอรมนี) MK-7 ได้จากเทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ (เท็กซัส สหรัฐอเมริกา)วิตามิน K3 (2-methyl-1,4-naphthoquinone), ซิลเวอร์ไนเตรต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อำนวยความสะดวกในการศึกษาสรีรวิทยาหลายแง่มุมของวิตามิน K
ที่ก้าวหน้าต่อไปควรจะทำในขั้นตอนการสกัดเพื่อตรวจสอบ
homologues วิตามินเคและสารของพวกเขาอีกครั้ง
liably ในการฝึกอบรมทางชีวภาพ. ในวันที่วิธีโครมาหลายคนรายงานการกำหนดร่องรอยของวิตามินK ในตัวอย่างทางชีวภาพ In-cluding ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) กับรังสีอัลตราไวโอเลต(UV) [15,16] ชั้น uorescence [17-21], ไฟฟ้า[22,23] chemiluminescence (CL) [24,25] และมวล spectrometric การตรวจสอบ [26-31] แต่ความเข้มข้นที่ต่ำกว่าของวิตามินเคhomologues ไม่สามารถตรวจพบโดยหลายรายงานวิธี[15,16] ในขณะที่ปัญหาการทำสำเนาเป็นอุปสรรคต่อการใช้วิธีการทางเคมีไฟฟ้า[22,23] นอกจากนี้อีกหลายวิธีรังเพลิงรับความเดือดร้อนจากความซับซ้อนและใช้เวลานานขั้นตอนการเตรียมตัวอย่าง. ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างของ homologues วิตามินเคในกรณีส่วนใหญ่รวมทั้งการสกัดของเหลวของเหลว(LLE) หรือ solid- สกัดสารในเฟส (SPE ) แต่วิธีการเหล่านี้เป็นเวลานานแรงงานทั่วไปและต้องใช้ปริมาณมากของราคาแพงที่เป็นพิษและเป็นอันตรายต่อสิ่งแวดล้อมสารละลายอินทรีย์ช่องระบายอากาศ เกลือออกเป็นกระบวนการของการเพิ่มของอิเล็กโทรไปยังเฟสน้ำเพื่อเพิ่มอัตราส่วนการกระจายตัวของที่ถูกละลายโดยเฉพาะอย่างยิ่ง เกลือออกช่วยสกัดของเหลว / ของเหลว(SALLE) ที่มีน้ำเป็นตัวทำละลายอินทรีย์ละลายได้แสดงให้เห็นที่ปรากฏข้อได้เปรียบในการวิจัยtinctive Bioanalytical [31] SALLE เป็นซุปเปอร์IOR เพื่อ LLE สำหรับสารสกัดสะอาด SALLE ใช้ปลอดภัยต่อสิ่งแวดล้อมสารเคมีเมื่อเทียบกับเทคนิคการเตรียมสารตัวอย่างที่พบบ่อย[32]. จุดมุ่งหมายของการทำงานในปัจจุบันคือการพัฒนาวิธีการ SALLE ควบคู่กับ HPLC-เรืองแสง (FL) สำหรับการกำหนดร่องรอยของวิตามินเคhomologues ในตัวอย่างทางชีวภาพ วิธีการมีส่วนร่วมนอกจากนี้ยังมีสาย EF ใหม่เพียงพอวิธีการวิเคราะห์อนุพันธ์สำหรับเป้าหมายโดยใช้วิธีการแก้ปัญหาเอทานอลคลอไรด์Stannous ในสื่อที่เป็นกรดจะสร้างชั้นสูงuorescent อนุพันธ์ naphthohydroquinone พัฒนาวิธีการสกัดและการวิเคราะห์ที่ถูกที่ดีที่สุด vali- วันตามคำแนะนำขององค์การอาหารและยาสหรัฐ [33] เพื่อวัตถุประสงค์เป้าหมายและนำไปใช้สำหรับการวัดร่องรอยของวิตามินเคhomologues ในตัวอย่างจริง. 2 การทดลอง2.1 วัสดุและสารเคมีPK และ MK-4 ที่ซื้อมาจากซิกม่าดิช (Seelze, เยอรมนี) MK-7 จากซานตาครูซชีวภาพ (เท็กซัสสหรัฐอเมริกา). วิตามิน K3 (2-methyl-1,4-naphthoquinone) ไนเตรตสีเงิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อำนวยความสะดวกในการศึกษาสรีรวิทยา multifaceted ของวิตามิน K ,
ความก้าวหน้าต่อไป ควรทำในขั้นตอนการสกัด

หาวิตามิน K ในและสาร Re -
liably ในเมทริกซ์ชีวภาพ
วันที่หลายวิธีทางโครมาโตกราฟีโดยรายงานติดตามปริมาณของวิตามิน K
-
ในตัวอย่างทางชีวภาพในรวมวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC )
รังสีอัลตราไวโอเลต ( UV ) [ 15,16 ] , fl uorescence [ 17 ] – 21 , 22,23 ไฟฟ้าเคมี
[ ] , เคมีลูมิเนสเซนต์ ( CL ) [ 24,25 ] และมวลความ
ตรวจจับ [ 26 31 ] อย่างไรก็ตาม การลดความเข้มข้นของวิตามิน K
ในไม่สามารถตรวจพบโดยมากของวิธีการรายงาน
[ 15,16 ] ในขณะที่ปัญหายาต้านใช้
ของเคมีไฟฟ้าวิธี [ 22,23 ] นอกจากนี้ในหลายของ re -
ให้วิธีการได้รับความเดือดร้อนจากที่ซับซ้อนและใช้เวลานาน

ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่าง ในขั้นตอนการเตรียมตัวของวิตามิน K ,
กรณีส่วนใหญ่ รวมทั้ง–ของเหลวการสกัด ( ที่ไหน ) หรือของแข็ง -
ขั้นตอนการสกัด ( SPE ) อย่างไรก็ตามขั้นตอนเหล่านี้ถูกเวลา
การบริโภคโดยทั่วไปแรงงานเข้มข้น และต้องใช้ปริมาณมาก
ราคาแพงและอันตรายที่เป็นพิษต่อสิ่งแวดล้อม เกษตรอินทรีย์ โซล -
ระบาย เกลือออกคือ กระบวนการของการเพิ่มของไลท์
เฟสน้ำเพื่อเพิ่มการกระจายสัดส่วนของ
( โดยเฉพาะ เกลือออกช่วยในการสกัดของเหลวด้วยของเหลว
( ซาล ) กับน้ำได้เป็นตัวทำละลายอินทรีย์ของ dis -
tinctive ข้อดีใน bioanalytical วิจัย [ 31 ] ซาลเป็นซูเปอร์ -
Wenzhou อาวุโส glycine สำหรับสารสกัดจากความสะอาด ซาล ใช้สารเคมีปลอดภัย
ต่อสิ่งแวดล้อมเมื่อเทียบกับทั่วไปเทคนิคการเตรียมตัวอย่าง
[ 32 ] .
วัตถุประสงค์ของงานวิจัย เพื่อพัฒนาวิธี HPLC ซาล
ควบคู่กับการเรืองแสง ( FL ) เพื่อติดตามหา
วิตามิน K ในตัวอย่างทางชีวภาพ วิธีการมีส่วนร่วม
ยังใหม่กับ EF จึง cient วิธีการเป้าหมาย ( สแตนนัสคลอไรด์โดยใช้สาร


สร้างโซลูชั่นในตัวกลางที่เป็นกรดสูงfl uorescent naphthohydroquinone สัญญาซื้อขายล่วงหน้า
การพัฒนาการสกัดและการวิเคราะห์วิธีการเพิ่มประสิทธิภาพวลี -
ลงวันที่ตามสหรัฐ - FDA แนะแนว [ 33 ] สำหรับเป้าหมายวัตถุประสงค์และใช้สำหรับการติดตาม

ในการหาวิตามิน เคในตัวอย่างจริง

2 ทดลอง

2.1 . วัสดุและสารเคมี และ mk-4

) ซื้อมาจากซิกม่า Aldrich ( ซีเ ลเซ่
, เยอรมนี ) mk-7 จาก Santa Cruz เทคโนโลยีชีวภาพ ( เท็กซัส , สหรัฐอเมริกา ) .
วิตามิน K3 ( 2-methyl-1,4-naphthoquinone ไนเตรตเงิน ,
)