Macrophages play critical roles in

Macrophages play critical roles in innate immune defense by sensing microbes using pattern-recognition
receptors. Lipopolysaccharide (LPS) stimulates macrophages via TLR, which leads to activation of downstream
signaling cascades. In this study, we investigated the roles of a conserved signaling pathway, Notch
signaling, in regulating the downstream signaling cascades of the LPS/TLR4 pathways in macrophages.
Using a phospho-proteomic approach and a gamma-secretase inhibitor (GSI) to suppress the processing
and activation of Notch signaling, we identified regulator of G protein signaling 19 (RGS19) as a target
protein whose phosphorylation was affected by GSI treatment. RGS19 is a guanosine triphosphatase
(GTPase)-activating proteinthatfunctions tonegatively regulate G protein-coupled receptors via Gi/Gqlinked
signaling. Stimulation of RAW264.7 cells with LPS increased the level of the phosphorylated form
of RGS19, while LPS stimulation in the presence of GSI decreased its level. GSI treatment did not alter the
mRNA level of rgs19. Treatment with GSI or silencing of rgs19 in macrophages impaired the phosphorylation
of Akt Thr308 upon LPS stimulation. Furthermore, targeted deletion of a DNA-binding protein and
binding partner of the Notch receptor, RBP-J/CSL, in macrophages resulted in delayed and decreased Akt
phosphorylation. Because the PI3K/Akt pathway regulates cell survival in various cell types, the cell cycle
and cell death were assayed upon GSI treatment, phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) inhibitor treatment
or silencing of rgs19. GSI treatment resulted in decreased cell populations in the G1 and S phases,
while it increased the cell population of cell death. Similarly, silencing of rgs19 resulted in a decreased
cell population in the G1 phase and an increased cell population in the subG1 phase. Inhibition of Akt
phosphorylation by PI3K inhibitor in LPS-stimulated macrophages increased cell population in G1 phase,
suggesting a possible cell cycle arrest. Taken together, these results indicate that Notch signaling positively
regulates phosphorylation of Akt, possibly via phosphorylation of RGS19, and inhibition of both
molecules affects the cell survival and cell cycle of macrophages upon LPS stimulation.
©

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บังเอิญเล่นบทบาทสำคัญในการป้องกันภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ โดยจุลินทรีย์ที่ใช้การรู้จำแบบไร้สายreceptors บังเอิญผ่าน TLR ซึ่งนำไปสู่การเปิดใช้งานปลายน้ำช่วยกระตุ้น lipopolysaccharide (LPS)สัญญาณน้ำตก ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบบทบาทของการนำ signaling ทางเดิน รอยตามปกติ ในควบคุมดี ๆ signaling ปลายน้ำของมนต์ LPS/TLR4 ในบังเอิญใช้วิธี phospho-proteomic และผล secretase แกมมา (GSI) เพื่อระงับการประมวลผลและเรียกใช้การบากตามปกติ เราระบุควบคุมโปรตีน G สัญญาณ 19 (RGS19) เป็นเป้าหมายโปรตีน phosphorylation ซึ่งได้รับผลจาก GSI รักษา RGS19 เป็น guanosine triphosphatase(GTPase) -proteinthatfunctions เรียกใช้ tonegatively ควบคุม G ควบคู่โปรตีน receptors ผ่าน จิ/Gqlinkedตามปกติ กระตุ้นเซลล์ RAW264.7 LPS เพิ่มระดับของฟอร์ม phosphorylatedของ RGS19 ขณะกระตุ้น LPS ในต่อหน้าของ GSI ลดระดับ GSI รักษาไม่ได้เปลี่ยนแปลงการระดับ mRNA ของ rgs19 รักษากับ GSI หรือ silencing ของ rgs19 ในบังเอิญความบกพร่องทางด้านการ phosphorylationของ Akt Thr308 เมื่อกระตุ้น LPS นอกจากนี้ เป้าหมายการลบโปรตีนดีเอ็นเอรวม และผูกพันธมิตรของตัวรับบาก RBP-J/CSL ในบังเอิญให้ Akt ล่าช้า และลดลงphosphorylation เนื่องจากทางเดิน PI3K/Akt กำหนดความอยู่รอดของเซลล์ในชนิดเซลล์ต่าง ๆ วงจรเซลล์และเซลล์ตายได้ assayed เมื่อรักษา GSI, phosphatidylinositol kinase 3 (PI3K) สารยับยั้งการบำบัดหรือ silencing ของ rgs19 GSI รักษาส่งผลให้ประชากรลดลงเซลล์ในระยะ G1 และ Sในขณะที่ยังเพิ่มประชากรเซลล์เซลล์ตาย ในทำนองเดียวกัน silencing ของ rgs19 ทำให้เกิดการลดลงประชากรเซลล์ในระยะ G1 และประชากรการเพิ่มเซลล์ในระยะ subG1 ยับยั้งการ Aktphosphorylation โดยผล PI3K ในบังเอิญ LPS ถูกกระตุ้นเพิ่มจำนวนเซลล์ในระยะ G1แนะนำจับได้รอบเซลล์ ปวง ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้สัญญาณที่บากบวกกำหนด phosphorylation ของ Akt อาจผ่าน phosphorylation ของ RGS19 และยับยั้งทั้งโมเลกุลมีผลต่อการอยู่รอดของเซลล์และเซลล์รอบของบังเอิญเมื่อกระตุ้น LPS©

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขนาดใหญ่มีบทบาทสำคัญในการป้องกันภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติโดยจุลินทรีย์ที่ตรวจจับการใช้รูปแบบการรับรู้รับ lipopolysaccharide (LPS) ช่วยกระตุ้น macrophages ผ่าน TLR
ซึ่งนำไปสู่การเปิดใช้งานต่อเนื่องน้ำตกสัญญาณ ในการศึกษานี้เราตรวจสอบบทบาทของเส้นทางการส่งสัญญาณอนุรักษ์ที่ช่องสัญญาณในการควบคุมน้ำตกส่งสัญญาณต่อเนื่องของทางเดิน LPS / TLR4 ในขนาดใหญ่. ใช้วิธี phospho-โปรตีนและยับยั้งแกมมาซี (GSI) ในการปราบปราม การประมวลผลและการทำงานของการส่งสัญญาณNotch เราระบุควบคุมของโปรตีน G 19 การส่งสัญญาณ (RGS19) เป็นเป้าหมายโปรตีนที่มีฟอสโฟรับผลกระทบจากการรักษาGSI RGS19 เป็น triphosphatase guanosine (GTPase) -activating proteinthatfunctions tonegatively ควบคุม G โปรตีนตัวรับคู่ผ่าน Gi / Gqlinked การส่งสัญญาณ การกระตุ้นของเซลล์ RAW264.7 กับ LPS เพิ่มระดับของรูปแบบ phosphorylated ของ RGS19 ในขณะที่การกระตุ้น LPS ในการปรากฏตัวของ GSI ลดลงระดับ การรักษา GSI ไม่เปลี่ยนแปลงระดับ mRNA ของ rgs19 การรักษาด้วย GSI หรือห้ามไม่ให้พูดของ rgs19 ในขนาดใหญ่ที่มีความบกพร่อง phosphorylation ของสิ้นคิด Thr308 เมื่อกระตุ้น LPS นอกจากนี้การลบการกำหนดเป้าหมายของโปรตีนดีเอ็นเอผูกพันและพันธมิตรที่มีผลผูกพันของการรับบากที่ RBP-J / CSL ในขนาดใหญ่ส่งผลให้เกิดความล่าช้าและลดลง Akt phosphorylation เพราะ PI3K / การเดินสิ้นคิดควบคุมการอยู่รอดของเซลล์ในเซลล์ชนิดต่างๆวงจรเซลล์และการตายของเซลล์ถูกassayed เมื่อรักษา GSI, phosphatidylinositol 3 ไคเนส (PI3K) ยับยั้งการรักษาหรือสมรของrgs19 ส่งผลให้การรักษา GSI ในประชากรเซลล์ลดลงใน G1 และขั้นตอน S, ในขณะที่มันเพิ่มขึ้นของประชากรเซลล์ของการตายของเซลล์ ในทำนองเดียวกันสมรของ rgs19 ผลในการลดลงของประชากรของเซลล์ในระยะG1 และประชากรเซลล์ที่เพิ่มขึ้นในระยะ subG1 ยับยั้งการ Akt phosphorylation โดยยับยั้ง PI3K ในขนาดใหญ่ LPS-กระตุ้นเซลล์ที่เพิ่มขึ้นของประชากรในระยะ G1, แนะนำการจับกุมวงจรมือถือที่เป็นไปได้ ที่ร่วมกันผลลัพธ์เหล่านี้บ่งบอกถึงสัญญาณ Notch ที่บวกควบคุมphosphorylation ของสิ้นคิดอาจผ่าน phosphorylation ของ RGS19 และยับยั้งการทั้งโมเลกุลมีผลกระทบต่อความอยู่รอดของเซลล์และวงจรมือถือของขนาดใหญ่เมื่อกระตุ้นLPS. ©

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บทบาทสำคัญในการป้องกัน macrophages ภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดโดยการตรวจจับ จุลินทรีย์ที่ใช้ลวดลาย
receptor สีดำเข้ม ( หล่อลื่น ) กระตุ้น macrophages ผ่าน TLR ซึ่งนำไปสู่การกระตุ้นของปลายน้ำ
ส่งสัญญาณน้ำตก . การศึกษาบทบาทของการส่งสัญญาณทางอนุรักษ์ , บาก
สัญญาณในการกำกับดูแลด้านการลดหลั่นของสเปรย์หล่อลื่น / tlr4 ทางเดินใน macrophages .
โดยใช้วิธีการและแกมมาซีครีเทสส์ phospho inhibitor ( GSI ) เพื่อระงับการส่งสัญญาณและการประมวลผล
บาก เราระบุการควบคุมของสัญญาณโปรตีนจี 19 ( rgs19 ) เป็นเป้าหมาย
โปรตีนที่มีฟอสโฟริเลชันได้รับผลกระทบโดยมีค่ารักษา rgs19 เป็น triphosphatase
กัวโนซีน( จีทีพีเปส ) - การเปิดใช้งาน proteinthatfunctions tonegatively ควบคุมโปรตีนคู่ผู้รับผ่านทางกี / gqlinked
ส่งสัญญาณ กระตุ้นเซลล์ raw264.7 ด้วยสเปรย์เพิ่มระดับของฟอสฟอรีเลเตตแบบฟอร์ม
ของ rgs19 ในขณะที่หล่อลื่นกระตุ้นในการปรากฏตัวของ GSI ลดลง ระดับของ GSI รักษาไม่ได้ปรับเปลี่ยน
ระดับ mRNA ของ rgs19 .การรักษาด้วย GSI หรือการปกปิด rgs19 ในแมคโครฟาจในกรุงเทพมหานคร
ของ thr308 เมื่อหล่อลื่นกระตุ้น akt บกพร่อง นอกจากนี้ เป้าหมายลบ DNA โปรตีนและ
คู่ผลผูกพันของรอยตัวรับ rbp-j / CSL ในแมคโครฟาจส่งผลให้ล่าช้า และลดลง akt
ฟอสโฟริเลชัน . เพราะทางเดิน pi3k / akt ควบคุมการอยู่รอด เซลล์ในเซลล์ชนิดต่าง ๆ รอบเซลล์
และเซลล์ตายถูก assayed เมื่อมีค่ารักษา ฟอสฟาทิดิลอิโนซิทอล 3 ไคเนส ( pi3k ) ยับยั้งการรักษา
หรือการปกปิด rgs19 . GSI รักษามีผลทำให้เซลล์ประชากรใน G1 และ S 1
ในขณะที่มันเพิ่มเซลล์จำนวนเซลล์ตายได้ ในทำนองเดียวกัน การปกปิด rgs19 ส่งผลให้เกิดการลดลงของจำนวนประชากรในเฟส G1
เซลล์และเซลล์ที่เพิ่มขึ้นของประชากรใน subg1 เฟสการยับยั้ง akt
ฟอสโฟริเลชันโดยยับยั้ง LPS กระตุ้น macrophages เซลล์ pi3k ในประชากรเพิ่มขึ้นในเฟส G1
, แนะนำจับวงจรที่สุด ถ่ายด้วยกัน ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า บากส่งสัญญาณบวก
ควบคุมปฏิกิริยาฟอสโฟรีเลชันของ akt อาจผ่านฟอสโฟริเลชันของ rgs19 และการยับยั้งทั้ง
โมเลกุลที่มีผลต่อการอยู่รอดและวงจรของเซลล์เซลล์ macrophages เมื่อหล่อลื่นกระตุ้น
สงวนลิขสิทธิ์