2.3. Enzyme activityThe activity of

2.3. Enzyme activity
The activity of PPO was determined according to the method of Guan (1986). 10 mL of 1.0% pyrogallol was added to a soil sample (1 g), and the reaction mixture was incubated at 30 °C for 2 h. 4.0 mL of citric acid-phosphate buffer (pH 4.5) was added to the solution to stop the re- action, followed by the addition of 35 mL ether. The mixture was ex- tracted for 30 min. The colored ether with dissolved purple gallic prime was measured colorimetrically at a wavelength of 430 nm. As- says without soil and without pyrogallol were performed at the same time as the controls.
The activity of DHO was analyzed according to the method of Guan (1986). 0.03 g of CaCO3 and 0.5 mL of 3% TTC were added to a soil sam- ple (3 g) and the mixture was incubated at 37 °C in the dark for 24 h after being mixed in the shaker. The mixture was extracted for 1 min after 5 mL of methanol was added. Next, the solution was filtered into a 50 mL volumetric flask using glass funnels, which were plugged with adsorbent cotton at the bottom of the funnels. The soils in the tubes were washed out into the funnels using methanol until no red color remained on the adsorbent cotton in the funnels. The samples were then measured colorimetrically at 485 nm after being diluted to 50 mL using methanol. Assays without CaCO3 and without TTC were performed at the same time as the controls.
The activity of POD was determined according to the method of Guan (1986). 10 mL of 1.0% pyrogallol and 2.0 mL of 0.5% H2O2 were added to a soil sample (1 g), and the reaction mixture was incubated at 30 °C for 2 h. 4.0 mL of citric acid-phosphate buffer (pH 4.5) was added to the solution to stop the reaction, followed by the addition of 35 mL of ether. The mixture was extracted for 30 min. The colored ether with dissolved purple gallic prime was measured colorimetrically at 430 nm. Assays without soil and without pyrogallol were performed at the same time as the controls.
The activity of CAT was measured according to the method of Guan (1986). 2.5 mL of 0.3% H2O2 and 20 mL phosphate buffer (pH 7.0) were added to a soil sample (5 g), and the reaction mixture was incubated at 25 °C for 20 min. 2.5 mL of 3.0 mol·L− 1 H2SO4 was added to the solution to stop the reaction, followed by filtering of the mixture by passing it through filter paper. 15 mL of the filtrate was titrated by 0.02 mol·L− 1 of KMnO4 solution. Finally, the dissipative volume of the KMnO4 solution was used to denote the CAT activity. All of enzyme activities were mea- sured in duplicates.
2.4. DNA extraction and analysis
Soil samples (0.5 g wet weight) for each site were used for DNA ex- traction performed with the FastDNA® spin kit for soil (Bio 101,Vista, CA) using the FastPrep homogenizer (Qbiogene, Irvine, CA; 2× 20 s at speed setting 4.0).
To amplify bacterium from soils, the bacterium-specific primer pair 341f+GC (Ferris et al., 1996)/907r (Casamayor et al., 2000; Teske et al., 1996) was used to obtain DNA fragments 566 bp in length. All PCR was performed with a PTC-200 thermal cycler (MJ Research, Waltham MA). The PCR protocol initial denaturation was at 94 °C for 5 min; 20 touchdown cycles of denaturation (at 94 °C for 1 min), an- nealing (at 65–55 °C for 1 min, decreasing 0.5 °C each cycle) and exten- sion (at 72 °C for 3 min); 10 standard cycles of denaturation (at 94 °C for 1 min), annealing (at 55 °C for 1 min) and extension (at 72 °C for 3 min), and a final extension at 72 °C for 5 min. The reaction mixtures (50 μL volume) contained 1× PCR reaction buffer (TaKaRa, Japan), 10 ng DNA template, 20 pmol/L of forward and reverse primers, 200 μmol/L dNTP mix, and 2.5 U of Ex Taq DNA Polymerase (TaKaRa, Japan). The PCR products were then verified by running a 1.2% (w/v) agarose gel electrophoresis.
DGGE was performed using a DCode Universal Mutation Detection System (Bio-Rad, Richmond, CA). A 6% acrylamide (37.5:1 acrylamide– bisacrylamide) gel was formed between 30% and 60% denaturant, with 100% denaturant defined as 7 M urea and 40% (v/v) formamide. The gelwasrunat180Vfor6hataconstanttemperatureof60°Cin7L 1× TAE buffer, then stained with Genefinder dye (Bio-V, Xiamen, China) for 30 min. The image was analyzed by the software package Quantity One 2.1 (Bio-Rad). The DGGE bands of interest were cut from the gel, and soaked in 50 μL TE buffer (10 mM Tris–Cl, pH 7.5, 1 mM EDTA) at 4 °C overnight. One microliter was used for reamplification and verification by DGGE three times to ensure a single band at the same location. A total of predominant 5 DGGE bands were sequenced successfully. The PCR–DGGE banding pattern was analyzed by Quantity One image analysis software (Bio-Rad). The Shannon diversity index was calculated to examine the diversity of the bacterium community in different samples, and a cluster dendrogram was constructed using UPGMA. The correlation relationship between the bacterium community of different samples, which is represented by the intensity (peak area) of the bands in each lane in the DGGE profile, and the environmental factors were analyzed by CCA using the CANOCO software. The 16S rDNA gene sequences of excised DGGE bands were used to search the GenBank da- tabase using the program BLAST.
2.5. Statistical methods
Statistical analysis was performed using the Excel XP, SPSS 17.0. Sampling and chemical analyses were examined in triplicate to decrease the experimental errors and to increase the experimental reproducibil- ity. The confidence of the data generated in the present investigations was analyzed by standard statistical methods to determine the mean values and standard deviation (S.D.). The values in the figures were expressed as the mean ± S.D. of the three replicates. The differences among the treatments were analyzed by one way ANOVA (LSD test).
3. Results and discussion
3.1. PAH degradation
The degradation rates of PAHs in planted and unplanted soils are depicted in Figs. 1–3. A good growth condition of the plant was deter- mined under the PAH pollution stress (70.80–79.81 mg·kg− 1), and no significant toxic effect was observed. After a 60-day culture of Fire Phoe- nix, the degradation rate of Σ8PAHs was up to 71.37%, in particular, the degradation rate of benzo(k)fluoranthene reached 100% (Fig. 1). More- over, the degradation rate of Σ8PAHs increased (N 83.08%) significantly,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. เอนไซม์กิจกรรมของ PPO ได้กำหนดตามวิธีการกวน (1986) 10 mL ของ pyrogallol 1.0% ได้เพิ่มตัวอย่างดิน (1 g), และส่วนผสมปฏิกิริยาถูก incubated ที่ 30 ° C สำหรับเพิ่มโซลูชันหยุดใหม่การดำเนินการ ตามด้านนอกของอีเทอร์ 35 มิลลิลิตร mL 4.0 h. 2 กรดซิตริกฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 4.5) ส่วนผสมถูกแฟนเก่า-tracted สำหรับ 30 นาที อีเทอร์สีกับนายก gallic สีม่วงละลายถูกวัด colorimetrically ที่ความยาวคลื่นของ 430 nm เป็น- กล่าวว่า ไม่ มีดิน และ โดย pyrogallol ดำเนินในเวลาเดียวกันเป็นตัวควบคุมกิจกรรมของ DHO ถูกวิเคราะห์ตามวิธีการกวน (1986) 0.03 g CaCO3 และ 0.5 mL ของทีทีซีจำกัดได้เพิ่มการดินสามเปิ้ล (3 กรัม) และส่วนผสม 3% ถูก incubated ที่ 37 ° C ในมืดใน 24 ชมหลังจากกำลังผสมในการเชคเกอร์ ส่วนผสมที่สกัดใน 1 นาทีหลังจากเพิ่ม 5 mL ของเมทานอล ถัดไป การแก้ปัญหาถูกถูกกรองไปยังหนาว volumetric 50 mL ใช้แก้ว funnels ซึ่งถูกเสียบกับฝ้าย adsorbent ที่ด้านล่างของ funnels ในหลอดถูกล้างออกเป็น funnels ที่ใช้เมทานอลจนกระทั่งไม่มีสีสีแดงยังคงอยู่บนฝ้าย adsorbent ใน funnels ตัวอย่างได้แล้วที่วัด colorimetrically 485 nm หลังการผสมจะใช้เมทานอล 50 มล Assays CaCO3 และ โดยทีทีซีจำกัดได้ดำเนินการในเวลาเดียวกันเป็นตัวควบคุมกิจกรรมของ POD ได้กำหนดตามวิธีการกวน (1986) 10 mL ของ pyrogallol 1.0% และ 2.0 mL 0.5% H2O2 ได้เพิ่มตัวอย่างดิน (1 g), และส่วนผสมปฏิกิริยาถูก incubated ที่ 30 ° C สำหรับมล 4.0 h. 2 กรดซิตริกฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 4.5) เพิ่มเพื่อแก้ปัญหาการหยุดปฏิกิริยา ตาม ด้วยการเพิ่ม 35 มิลลิลิตรของอีเทอร์ ส่วนผสมที่สกัดสำหรับ 30 นาที อีเทอร์สีกับนายก gallic สีม่วงละลายถูกวัด colorimetrically ที่ 430 nm Assays ดิน และ pyrogallol ไม่ได้ทำในเวลาเดียวกันเป็นตัวควบคุมกิจกรรมของแมวที่วัดตามวิธีการกวน (1986) 2.5 mL 0.3% H2O2 และ 20 มิลลิลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) ได้เพิ่มตัวอย่างดิน (5 กรัม), และส่วนผสมปฏิกิริยาถูก incubated ที่ 25 ° C สำหรับ 20 นาทีมล. 2.5 ของ 3.0 mol· กำมะถัน 1 L− ถูกเพิ่มไปยังโซลูชันการหยุดปฏิกิริยา ตาม ด้วยการกรองของผสมโดยจะผ่านกระดาษกรอง 15 mL ของสารกรองมี titrated โดย 0.02 mol· แก้ปัญหา L− 1 KMnO4 ในที่สุด ปริมาณ dissipative โซลูชัน KMnO4 ใช้แสดงกิจกรรม CAT กิจกรรมของเอนไซม์ทั้งหมด mea-หลากหลายในซ้ำได้2.4. DNA สกัดและวิเคราะห์ตัวอย่างดิน (0.5 กรัมน้ำหนักเปียก) สำหรับแต่ละไซต์มีใช้ในอดีตดีเอ็นเอดำเนินการกับชุดหมุน FastDNA ®สำหรับดิน (ไบโอ 101, Vista, CA) ใช้ homogenizer FastPrep (Qbiogene เออร์วิน CA, s × 20 2 ที่ความเร็ว 4.0 การตั้งค่า) ลากขยายแบคทีเรียจากดินเนื้อปูน พื้นแบคทีเรียเฉพาะคู่ 341f + GC (Ferris et al., 1996) / 907r (Casamayor et al., 2000 Teske et al., 1996) ถูกใช้เพื่อรับ bp 566 ชิ้นส่วนดีเอ็นเอยาว ทำ PCR ทั้งหมด มีเป็น PTC 200 ร้อน cycler (วิจัย MJ, Waltham MA) Denaturation เริ่มต้นโพรโทคอลการ PCR ได้ที่ 94 ° C สำหรับ 5 นาที 20 เหรียญวงจรการ denaturation (ที่ 94 ° C สำหรับ 1 นาที), เป็น nealing (ที่ 65-55 ° C สำหรับ 1 นาที ลด 0.5 ° C แต่ละรอบ) และ exten-น (ที่ 72 ° C สำหรับ 3 นาที); วงจรมาตรฐาน 10 denaturation (ที่ 94 ° C สำหรับ 1 นาที), การอบเหนียว (ที่ 55 ° C สำหรับ 1 นาที) และนามสกุล (ที่ 72 ° C สำหรับ 3 นาที), และส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ 5 นาที น้ำยาผสมปฏิกิริยา (50 μL ปริมาตร) อยู่ 1 × PCR ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ (TaKaRa ญี่ปุ่น), 10 ng ดีเอ็นเอแม่แบบ 20 pmol/L ของไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับ 200 μmol L dNTP ผสม และ 2.5 U ของอดีต Taq DNA พอลิเมอเรส (TaKaRa ญี่ปุ่น) มีการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ PCR ได้แล้ว โดยใช้ electrophoresis เป็นเจล agarose 1.2% (w/v)DGGE ที่ดำเนินการโดยใช้ DCode สากลกลายพันธุ์ตรวจสอบระบบ (Bio Rad ริชมอนด์ CA) เจล 6% อะคริลาไมด์ (37.5:1 อะคริลาไมด์ – bisacrylamide) ก่อตั้งขึ้นระหว่าง 30% และ 60% denaturant, 100% denaturant กำหนดเป็น 7 M ยูเรียและ formamide 40% (v/v) Gelwasrunat180Vfor6hataconstanttemperatureof60 ° Cin7L 1 ×เต้บัฟเฟอร์ แล้วสีย้อม Genefinder (ไบโอ-V มิน จีน) สีสำหรับ 30 นาที รูปถูกวิเคราะห์ โดยแพคเกจซอฟต์แวร์ปริมาณหนึ่ง 2.1 (ไบ-Rad) วง DGGE น่าสนใจถูกตัดจากเจ และนำไปแช่ใน 50 μL ติบัฟเฟอร์ (10 mM ตรี – Cl, pH 7.5, 1 mM EDTA) ที่ 4 ° C ค้างคืน ไมโครลิตรหนึ่งใช้สำหรับ reamplification และการตรวจสอบ โดย DGGE สามครั้งให้วงเดียวที่ตำแหน่งเดียวกัน รวมกัน 5 DGGE วงถูกเรียงลำดับเรียบร้อยแล้ว รูปแบบ banding PCR – DGGE ได้วิเคราะห์ปริมาณหนึ่งรูปวิเคราะห์ซอฟต์แวร์ (ไบ-Rad) มีคำนวณดัชนีความหลากหลายแชนนอนเพื่อตรวจสอบความหลากหลายของแบคทีเรียในตัวอย่างที่แตกต่างกัน และ dendrogram คลัสเตอร์ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ UPGMA มีวิเคราะห์ความสัมพันธ์ของความสัมพันธ์ระหว่างชุมชนแบคทีเรียอย่างอื่น ซึ่งจะถูกแสดง ด้วยความรุนแรง (พื้นที่สูงสุด) ของวงในแต่ละเลนในโพ DGGE ปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อม โดยใช้ซอฟต์แวร์ CANOCO CCA ลำดับยีน rDNA 16S ของวง DGGE excised ถูกใช้เพื่อค้นหาดา-tabase GenBank ที่ใช้โปรแกรมระเบิด2.5. สถิติวิธีวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการโดยใช้ Excel XP โปรแกรม 17.0 Sampling และเคมีวิเคราะห์ได้ตรวจสอบใน triplicate เพื่อลดข้อผิดพลาดในการทดลอง และเพิ่ม reproducibil-ity ทดลอง ความเชื่อมั่นของข้อมูลที่สร้างขึ้นในการตรวจสอบปัจจุบันถูกวิเคราะห์ โดยวิธีการทางสถิติมาตรฐานกำหนดค่าเฉลี่ยและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (S.D.) ค่าตัวเลขที่แสดงเป็นเหมือนกับเฉลี่ย± S.D. ของทั้งสาม ความแตกต่างระหว่างการรักษาได้รับการวิเคราะห์ โดยวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (การทดสอบ LSD)3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1. ป้า สลายตัวอัตราการสลายตัวของ PAHs ในดินเนื้อปูนปลูก และ unplanted จะแสดงใน Figs. 1 – 3 เงื่อนไขดีเจริญเติบโตของพืชถูกขัดขวาง- ขุดภายใต้ความเครียดมลพิษละ (70.80 – 79.81 mg·kg− 1), และไม่มีผลเป็นพิษที่สำคัญที่สังเกต หลังจาก 60 วันวัฒนธรรมของไฟ Phoe nix อัตราการสลายตัวของ Σ8PAHs ได้ถึง 71.37% โดยเฉพาะ อัตราการสลายตัวของ fluoranthene benzo (k) ถึง 100% (Fig. 1) เพิ่มเติม - มาก อัตราการสลายตัวของ Σ8PAHs ที่เพิ่มขึ้น (N 83.08%) อย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 กิจกรรมของเอนไซม์ PPO
ถูกกำหนดตามวิธีการของกวนอู ( 1986 ) 10 ml 1.0% ซึ่งถูกเพิ่มลงในดินตัวอย่าง ( 1 กรัม ) และปฏิกิริยาผสมบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C 2 H . 4.0 มิลลิลิตรของกรดซิตริกฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 4.5 ) คือการเพิ่มโซลูชั่นเพื่อหยุดการ re - กระทำตาม โดยนอกเหนือจาก 35 ml อีเทอร์ ส่วนผสมคือ อดีต tracted เป็นเวลา 30 นาทีอีเทอร์ละลายสีด้วยสีม่วงฝรั่งเศสนายกรัฐมนตรีถูกวัด colorimetrically ที่ความยาวคลื่น 430 nm . - บอกว่าไม่มีดิน ไม่มีซึ่งมีการปฏิบัติในเวลาเดียวกับการควบคุม .
กิจกรรมของโธ วิเคราะห์ข้อมูลตามวิธีการของกวนอู ( 1986 ) 0.03 กรัม CaCO3 และ 0 .5 ml 3 % บริษัท ทีทีซี ถูกเพิ่มไปยังดินแซม - เปิ้ล ( 3 กรัม ) และส่วนผสมที่ถูกบ่มที่ 37 °องศาเซลเซียสในที่มืดเป็นเวลา 24 ชั่วโมงหลังจากการผสมในเครื่องปั่น . ส่วนผสมที่ 1 นาทีหลังจาก 5 ml ของเมทานอลคือเพิ่ม ต่อไป สารละลายที่กรองลงในขวดปริมาตร 50 มิลลิลิตร โดยใช้กรวยแก้วที่เสียบกับตัวดูดซับฝ้ายที่ด้านล่างของกรวย .ดินในท่อ คือล้างออกในช่องทางที่ใช้เมทานอลจนไม่มีสีแดงยังคงอยู่บนตัวดูดซับฝ้ายในกรวย . ตัวอย่างการวัดแล้ว colorimetrically ที่ 485 nm หลังจากถูกเจือจาง 50 ml ใช้เมทานอล วิธี ใช้ และไม่มีการไม่มี TTC ในเวลาเดียวกันเช่นการควบคุม .
กิจกรรมของฝักถูกกำหนดตามวิธีการของกวนอู ( 1986 ) 10 มิลลิลิตร ซึ่ง 1.0% และ 2.0 มิลลิลิตร 0.5% H2O2 ถูกเพิ่มไปยังดินตัวอย่าง ( 1 กรัม ) และปฏิกิริยาผสมบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C 2 H . 4.0 มิลลิลิตรของกรดซิตริกฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 4.5 ) คือการเพิ่มโซลูชั่นเพื่อหยุดปฏิกิริยา ตามด้วยนอกเหนือจาก 35 มิลลิลิตรของอีเทอร์ ส่วนผสมสกัดเป็นเวลา 30 นาทีอีเทอร์ละลายสีด้วยสีม่วงฝรั่งเศสนายกรัฐมนตรีถูกวัด colorimetrically ที่ 430 nm . โดยที่ดินและไร้ซึ่งพบได้ในเวลาเดียวกัน เช่น การควบคุม
กิจกรรมแมววัด ตามวิธีการของกวนอู ( 1986 ) 2.5 ml ของ H2O2 0.3% 20 ml ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) ถูกเพิ่มไปยังดินตัวอย่าง ( 5 กรัม )และปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 25 ° C ผสม 20 นาที 2.5 มิลลิลิตร 3.0 โมล ด้วย L − 1 กรดซัลฟิวริกได้เพิ่มโซลูชั่นเพื่อหยุดปฏิกิริยา ตามด้วยกรองส่วนผสมโดยผ่านมันผ่านกระดาษกรอง 15 ml ของกรองอยู่ตลอดเวลาโดย 0.02 โมลด้วย L − 1 ของ KMnO4 โซลูชั่น ในที่สุด ปริมาตรของสารละลายที่ใช้ dissipative KMnO4 ไปจนถึงแมวกิจกรรมทั้งหมดของกิจกรรมจาก กฟน. - แน่นอนว่าในรายการที่ซ้ำกัน .
2.4 . การสกัดดีเอ็นเอและการวิเคราะห์
ตัวอย่างดิน ( 0.5 กรัม น้ำหนักเปียก ) สำหรับแต่ละเว็บไซต์ที่ใช้เป็นดีเอ็นเอ Ex - traction ) กับ fastdna ®ปั่นชุดดิน ( ไบโอ 101 , Vista , CA ) ใช้ fastprep โฮโมจิไนซ์ ( qbiogene Irvine , CA , 2 × 20 S ที่ความเร็วการขยาย
4.0 ) แบคทีเรียจากดินแบคทีเรียรองพื้นเฉพาะคู่ 341f GC ( Ferris et al . , 1996 ) / 907r ( casamayor et al . , 2000 ; เทสก์ et al . , 1996 ) ถูกใช้เพื่อให้ได้ชิ้นส่วนดีเอ็นเอ 566 BP ในความยาว ทั้งหมดสามารถแสดงด้วย ptc-200 Thermal cycler ( การวิจัย แบบเพิ่งมา ) โปรโตคอล PCR ( เริ่มต้นที่ 94 ° C เป็นเวลา 5 นาที ; 20 ทัชดาวน์รอบ ( ( ที่ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที )- nealing ( ที่ 65 และ 55 องศา C เป็นเวลา 1 นาที ลดลง 0.5 ° C ในแต่ละรอบ ) และ EXTEN - ฌัน ( 72 ° C เป็นเวลา 3 นาที ) ; 10 รอบมาตรฐาน ( ( ที่ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที ) อบที่ 55 องศา C เป็นเวลา 1 นาที ) และนามสกุล ( ที่ 72 ° C เป็นเวลา 3 นาที ) , และส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที ปฏิกิริยาผสม ( หมวด L 50 μ ) ที่มีอยู่ 1 × PCR ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ ( Takara , ญี่ปุ่น ) , 10 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ20 pmol / ฉันไปข้างหน้าและย้อนกลับ ไพรเมอร์μ mol / L dntp ผสม 200 และ 2.5 U ของแฟนเก่าแทค DNA polymerase ( Takara , ญี่ปุ่น ) ผลิตภัณฑ์ PCR แล้วตรวจสอบโดยการใช้ 1.2 % ( w / v )
( gel electrophoresis การทดลองการใช้ระบบตรวจจับการ dcode สากล ( ไบโอ ราด ริชมอนด์ แคลิฟอร์เนีย ) 6 % อะคริลาไมด์ ( 37.5:1 อะคริลาไมด์เจล– bisacrylamide ) ก่อตั้งขึ้นระหว่างร้อยละ 30 และ 60 % ทำให้ผิดธรรมชาติ ,100% ทำให้ผิดธรรมชาติ เช่น 7 M ยูเรียและ 40 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Formamide . การ gelwasrunat180vfor6hataconstanttemperatureof60 ° cin7l 1 ×แท บัฟเฟอร์ แล้วย้อมด้วยสีย้อม genefinder ( bio-v , เซียะเหมิน , จีน ) เป็นเวลา 30 นาที ภาพ โดยใช้แพคเกจซอฟต์แวร์ปริมาณหนึ่ง 2.1 ( ไบโอ ราด ) ในการทดลองกลุ่มที่น่าสนใจที่ถูกตัดจากเจลและแช่ 50 μ L TE บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ – Cl pH 7.5 ,1 mM EDTA ) ที่ 4 ° C ในชั่วข้ามคืน หนึ่งคือการใช้เพื่อ reamplification ไมโครลิตร และตรวจสอบโดยการทดลองสามครั้งเพื่อให้แน่ใจว่า มีวงเดียว ณสถานที่เดียวกัน รวมโดดรัด 5 การทดลองนี้เรียบร้อยแล้ว สำหรับประเทศไทย ร่วมการทดลองโดยใช้ปริมาณหนึ่งภาพซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ ( ไบโอ ราด )ดัชนีแชนนอนความหลากหลายคำนวณเพื่อตรวจสอบความหลากหลายของแบคทีเรียในชุมชนตัวอย่างที่แตกต่างกันและกลุ่มพันธุกรรมที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ UPGMA . ความสัมพันธ์ระหว่างความสัมพันธ์ในชุมชนของกลุ่มตัวอย่างที่แตกต่างกันซึ่งแสดงโดยความเข้ม ( พื้นที่พีค ) จากวงในแต่ละช่องทางในการทดลองโปรไฟล์และปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อม วิเคราะห์โดย CCA ใช้ canoco ซอฟต์แวร์ ช่วง 16S rDNA ยีน ลำดับของการทดลองใช้ตัดแถบค้นหาขนาดดา - tabase โดยใช้โปรแกรมระเบิด
2.5 วิธีการทางสถิติวิเคราะห์
โดยใช้ Excel XP , SPSS 17.0 .การสุ่มตัวอย่างและการวิเคราะห์ทางเคมีทดสอบทั้งสามใบเพื่อลดข้อผิดพลาด และเพิ่ม reproducibil ทดลองเรียนร . ความมั่นใจของข้อมูลที่สร้างขึ้นในการตรวจสอบปัจจุบันที่ได้มาวิเคราะห์โดยใช้วิธีการทางสถิติมาตรฐาน เพื่อหาค่าเฉลี่ยและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( S.D . ) ค่าในตัวเลขที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ย± S.D .ของทั้งสาม ได้แก่ ความแตกต่างระหว่างการรักษา วิเคราะห์ข้อมูลโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ( ทดสอบ LSD )
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ป่าเสื่อมโทรม
การย่อยสลายสารอัตราปลูกและดิน unplanted เป็นที่ปรากฎในมะเดื่อ . 1 – 3 เงื่อนไขการเติบโตที่ดีของพืชถูกยับยั้ง - ขุดใต้ผ้า มลภาวะความเครียด ( 70.80 – 79.81 มก. ด้วย− 1 กิโลกรัม ) และพิษที่ไม่แตกต่างกันมากนักหลังจาก 60 วันวัฒนธรรมสำเ - ไฟหยุด , อัตราการย่อยสลายของΣ 8pahs ขึ้น 71.37 % , โดยเฉพาะอย่างยิ่ง , อัตราการย่อยสลายของเบนโซอะโครโพลิส ( K ) ถึง 100% ( รูปที่ 1 ) เพิ่มเติมกว่า , อัตราการย่อยสลายของΣ 8pahs เพิ่มขึ้น ( ขึ้น ) อย่างมาก