Plants were harvested two days afte

Plants were harvested two days after seedling inoculation
(when it is possible to separate roots and stems) and then at 2–3
days intervals. Roots and stems were then separated. For each tissue
three samples were combined and three replicates of tissue
samples collected (9 plants each time) to determine the average
colonization and fresh weight (fw). To determine endophytic
population, plant tissues were rinsed with sterile distilled water
and disinfected with 2% sodium hypochlorite for three minutes
with constant agitation for roots and 2 min for stems. Samples
were then washed four times with sterilized water and manually
crushed using a mortar and pestle. The homogenates were
resuspended in 1 ml of PBS and vortexed. This suspension was 10-
fold serially diluted and plated on LGI agar plates, containing Nal, Sm and X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-d-glucuronide
cyclohexylammonium salt, 40 g ml−1) for gusA-marked strain or
Nal for strain PAL 5. Colony forming units were counted after incubation
at 28 ◦C for 3 days. As previously described by Luna et al.
(2010) three control procedures were performed to ensure the efficiency
of the surface disinfection method: (1) disinfected plant
tissue samples taken 96 h postinoculation (P.I.) (with the gusAmarked
strain) were observed by optical microscopy after staining,
(2) disinfected tissues were placed for 1 min onto plates containing
LGI, removed and plates were incubated at 28 ◦C, (3) the wash
solution from the last rinse was cultured on LGI plates.
To determine the extent of total colonization (rhizoplane and
endophytic population) of inoculated seedlings, another set of
plantlets were removed from the agar. Roots were rinsed with
sterile distilled water and processed as above, without surface disinfection.
Rhizoplane population was determined by subtracting
the inside population from the total bacterial counts determined
without surface disinfection (Gyaneshwar et al., 2001).
Plants inoculated with strain UAP 5541/pRGS561 were harvested
and separated into roots and stems. GUS activity was tested
daily during the first week after inoculation and at three-day intervals
thereafter. The plants were carefully removed from the growth
medium and roots were gently washed with sterile water in order
to wash the remaining agar away. The staining procedure was carried
out as described by Jefferson et al. (1987). Non-inoculated
plants were analyzed at the same time intervals. Samples were
observed after staining and photographed using a Carl Zeiss Photomicroscope.
Multiple samples were examined either directly or
by using hand-cut sections of plant tissues immersed in agarose
blocks.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พืชเก็บเกี่ยวสองวันหลังจากแหล่ง inoculation(เมื่อจำเป็นต้องแยกราก และลำต้น) และ ใน 2-3 แล้วช่วงเวลาของวัน รากและลำต้นก็แยกออกแล้ว ในแต่ละเนื้อเยื่อมีรวมตัวอย่างสาม และสามเหมือนกับของเนื้อเยื่อตัวอย่างการรวบรวม (9 พืชแต่ละครั้ง) เพื่อกำหนดค่าเฉลี่ยสนามและน้ำหนักสด (fw) กำหนด endophyticประชากร พืชเนื้อเยื่อถูก rinsed ด้วยกอซกลั่นน้ำและฆ่าเชื้อ ด้วย 2% ฟอกเวลาสามนาทีด้วยคงอาการกังวลต่อราก และใกลสำหรับลำต้น ตัวอย่างแล้วถูกล้าง 4 ครั้งน้ำ sterilized และด้วยตนเองบดใช้เป็นโกร่ง ได้ homogenatesresuspended ใน 1 ml ของ PBS และ vortexed ระบบกันสะเทือนนี้ถูก 10-พับ serially diluted และเคลือบบนแผ่น agar LGI, Nal, Sm และ X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-d-glucuronidecyclohexylammonium เกลือ 40 g ml−1) สำหรับเครื่อง gusA ต้องใช้ หรือNal สำหรับต้องใช้ PAL 5 หน่วยโคโลนีขึ้นรูปนับได้หลังจากบ่มที่ ◦C 28 วัน 3 ก่อนหน้านี้ที่ อธิบายไว้โดย Luna et al(2010) ขั้นตอนการควบคุมสามได้ดำเนินการให้มีประสิทธิภาพวิธีฆ่าเชื้อพื้นผิว: โรงงานฆ่าเชื้อ (1)ตัวอย่างเนื้อเยื่อนำ 96 h postinoculation (P.I.) (ด้วยการ gusAmarkedต้องใช้) ถูกตรวจสอบ โดยแสง microscopy หลังย้อมสี(2) เนื้อเยื่อฆ่าเชื้อที่ถูกวางใน 1 นาทีลงบนแผ่นที่ประกอบด้วยLGI ลบและแผ่นก็ incubated ที่ 28 ◦C, (3) ล้างโซลูชั่นจากล้างสุดท้ายถูกอ่างบนแผ่น LGIการกำหนดขอบเขตของสนามทั้งหมด (rhizoplane และประชากร endophytic) ของกล้าไม้ inoculated อีกชุดplantlets ถูกเอาออกจาก agar รากมี rinsed ด้วยใส่น้ำกลั่น และประมวลผลดังกล่าว โดยไม่ต้องฆ่าเชื้อพื้นผิวRhizoplane ประชากรถูกตามลบภายในประชากรจากรวมแบคทีเรียนับกำหนดโดยผิวฆ่าเชื้อ (Gyaneshwar et al., 2001)มีการเก็บเกี่ยวพืช inoculated ด้วยต้องใช้สตริคแอ 5541/pRGS561และแยกเป็นรากและลำต้น ทดสอบกิจกรรม GUSทุกวันในช่วงสัปดาห์แรกหลัง จาก inoculation และ ในช่วงเวลาสามวันหลังจากนั้น พืชถูกเอาออกอย่างระมัดระวังจากการเจริญเติบโตปานกลางและรากถูกเบา ๆ ล้าง ด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อตามลำดับล้าง agar ที่เหลือเก็บ ทำขั้นตอน stainingออกตามที่อธิบายไว้โดย Jefferson et al. (1987) Inoculated ไม่ใช่มีวิเคราะห์พืชในช่วงเวลาเดียวกัน ตัวอย่างดีสังเกตหลังจากการย้อมสี และการถ่ายภาพใช้เป็น Carl Zeiss Photomicroscopeหลายตัวอย่างตรวจสอบทั้งโดยตรง หรือโดยใช้มือตัดส่วนของเนื้อเยื่อพืชที่แช่อยู่ใน agaroseบล็อก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พืชเก็บเกี่ยวสองวันหลังจากการฉีดวัคซีนของต้นกล้า
( - 3
ช่วงเวลาวันที่ รากและลำต้นถูกแยกออกแล้ว สำหรับแต่ละเนื้อเยื่อ
สามตัวอย่างที่ถูกรวมกันและสามซ้ำของเนื้อเยื่อ
ตัวอย่างที่เก็บรวบรวม
การล่าอาณานิคมและน้ำหนักสด การตรวจสอบเอนโดไฟท์
ประชากรเนื้อเยื่อพืชได้รับการล้างด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ
และฆ่าเชื้อด้วยโซเดียมไฮโปคลอไรต์
กับการกวนคงที่สำหรับรากและ ตัวอย่าง
ถูกล้างแล้วสี่ครั้งด้วยน้ำและฆ่าเชื้อด้วยตนเอง
บดโดยใช้ครกและสาก homogenates
resuspended นี้ถูกระงับ
เท่าปรับลดลำดับและชุบบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อ
เกลือ - 1 ) - ทำเครื่องหมายความเครียดหรือ
เอ็นสำหรับสายพันธุ์
ที่ ◦ C .
(2010)
ของวิธีการฆ่าเชื้อพื้นผิว
ตัวอย่างเนื้อเยื่อนำ
สายพันธุ์
(
LGI ◦ C (3)
ล้างการแก้ปัญหาจากที่ผ่านมาเป็นที่เพาะเลี้ยงบนจาน
เพื่อกำหนดขอบเขตของ การล่าอาณานิคมทั้งหมด
ประชากรเอนโดไฟต์
ต้นถูกถอดออกจากวุ้น รากถูกล้างด้วย
น้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและประมวลผลดังกล่าวข้างต้นโดยไม่ต้องฆ่าเชื้อพื้นผิว
ประชากร
ประชากรภายในจากแบคทีเรียรวมกำหนด
โดยไม่ต้องฆ่าเชื้อพื้นผิว
พืชเชื้อด้วยความเครียด
และแยกออกเป็นรากและลำต้น กิจกรรม
ในชีวิตประจำวันในช่วงสัปดาห์แรกหลังการฉีดวัคซีนและในช่วงเวลาสามวัน
หลังจากนั้น พืชที่ถูกถอดออกอย่างระมัดระวังจากการเจริญเติบโตของ
กลางและรากถูกล้างเบา ๆ ด้วยน้ำหมันในการสั่งซื้อ
เพื่อล้างวุ้นที่เหลือออกไป ขั้นตอนการย้อมสีที่ได้รับการดำเนิน
การตามที่อธิบายไว้โดยเจฟเฟอร์สันและคณะ (1987) ไม่เชื้อ
พืชที่ได้มาวิเคราะห์ในช่วงเวลาเดียวกัน ตัวอย่างที่ถูก
ตั้งข้อสังเกตหลังจากการย้อมสีและถ่ายภาพโดยใช้เลนส์
ตัวอย่างหลายมีการตรวจสอบไม่ว่าจะโดยตรงหรือ
โดยใช้ส่วนมือตัดของเนื้อเยื่อพืชแช่อยู่ใน
บล็อก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พืชที่ถูกเก็บเกี่ยวหลังจากการปลูกกล้าไม้ 2 วัน
( เมื่อมันเป็นไปได้ที่จะแยกรากและลำต้น ) แล้วที่ 2 – 3
วันๆ รากและลำต้น จึงแยกออกจากกัน สำหรับแต่ละเนื้อเยื่อ
3 จำนวนรวมและ 3 ซ้ำตัวอย่างเนื้อเยื่อ
เก็บ ( 9 พืชแต่ละครั้ง ) เพื่อตรวจสอบการเฉลี่ย
และน้ำหนักสด ( FW ) การกำหนดประชากรรา
,เนื้อเยื่อพืชถูกล้างด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อและฆ่าเชื้อ
2 % โซเดียมไฮโปคลอไรต์ 3 นาที
ด้วยการกวนคงที่สำหรับ 2 นาที สำหรับรากและลำต้น ตัวอย่าง
แล้วล้าง 4 ครั้งกับฆ่าเชื้อน้ำและตนเอง
บดใช้ครกและสาก การ homogenates ถูก
resuspended ใน 1 มิลลิลิตร และภาพ vortexed . ช่วงล่างนี้ 10 -
พับเป็นเจือจาง และชุบบน lgi วุ้นแผ่น ที่มีจำหน่ายและ SM x-gluc ( 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-d-glucuronide
cyclohexylammonium เกลือ 40 กรัมต่อ  − 1 ) gusa เครื่องหมายพัลความเครียดความเครียดหรือ
ร 5 . หน่วยสร้างอาณานิคมถูกนับหลังจากบ่ม
ที่ 28 ◦ C เป็นเวลา 3 วัน ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้าโดยลูน่า et al .
( 2010 ) สามขั้นตอนการควบคุมการเพื่อให้แน่ใจว่าประสิทธิภาพ
ของพื้นผิวฆ่าเชื้อโรควิธี : ( 1 ) ฆ่าเชื้อเนื้อเยื่อพืช
ตัวอย่าง 96 H เริ่ม ( PI ) ( กับ gusamarked
เมื่อย ) สังเกตได้จากกล้องจุลทรรศน์แสงหลังจากการย้อมสี
( 2 ) ฆ่าเชื้อเนื้อเยื่ออยู่ 1 นาทีที่มี
ใส่จาน lgi , ลบออกและแผ่นอุณหภูมิ 28 ◦ C ( 3 ) ล้าง
โซลูชั่นจากน้ำล้างสุดท้ายถูกเพาะเลี้ยงในจาน lgi .
เพื่อกำหนดขอบเขตของการรวม ( ประชากรไรโซแพลนและ
รา ) ของต้นพืชอีกชุด
ต้นเป็นลบออกจากวุ้น รากถูกล้างด้วยน้ำกลั่น
ปลอดเชื้อและประมวลผลตามข้างต้น โดยไม่มีการฆ่าเชื้อที่พื้นผิว ประชากรไรโซแพลนถูกกำหนดโดยลบ

ภายในประชากรจากจุลินทรีย์ทั้งหมดมุ่งมั่น
โดยไม่ต้องฆ่าเชื้อพื้นผิว ( gyaneshwar et al . , 2001 ) .
พืชใส่สายพันธุ์ uap เอเซีย / prgs561 เก็บ
แยกออกเป็นรากและลำต้น กิจกรรมกัสถูกทดสอบ
ทุกวันในช่วงสัปดาห์แรกหลังจากการฉีดวัคซีน และในช่วงเวลาสามวัน
หลังจากนั้น พืชที่ถูกลบออกอย่างระมัดระวังจากการเจริญเติบโต
รากปานกลางและค่อยๆ ล้างด้วยน้ำปลอดเชื้อเพื่อ
ล้างวุ้นที่เหลือออกไป ขั้นตอนการย้อม
ออกไปตามที่อธิบายไว้โดย Jefferson et al . ( 1987 ) ไม่ปลูกพืช
วิเคราะห์เป็นระยะเวลาเดียวกัน จำนวน
สังเกตหลังจากการย้อมสีและถ่ายภาพโดยใช้ Carl Zeiss photomicroscope .
หลายตัวอย่างทั้งโดยตรง หรือ
3 ?โดยใช้มือตัดเนื้อเยื่อพืชแช่ในส่วนของโรส
บล็อก