7. Genotypic identification of fung

7. Genotypic identification of fungi isolates
Nucleotide sequencing of rRNA genes of some Penicillium species
was done with the help of SolGent Company, Daejeon,
South Korea. Primers used for gene amplification have the following
composition: ITS1 (50-TCC GTA GGT GAA CCT
GCG G-30), and ITS4 (50-TCC TCC GCT TAT TGA TAT
GC-30). Then the amplification was carried out in a thermal
cycler under the following conditions: one round of denaturation
at 95 C for 15 s followed by 30 cycles of denaturation
at 95 C for 20 s, annealing at 50 C for 40 s and extension
at 72 C for 1 min, with a final extension step at 72 C for
5 min. The PCR products were then purified with the SolGent
PCR Purification Kit-Ultra (SolGent, Daejeon, South Korea)
prior to sequencing. Purified PCR products were reconfirmed
(using size marker) by electrophoreses on 1% agarose gel.
Then these bands were eluted and sequenced with the incorporation
of dideoxynucleotides (dd NTPs) in the reaction mixture.
Each sample was sequenced in the sense and antisense
directions using ITS1 and ITS4 primers (White et al., 1990).
Sequences were further analyzed using BLAST from the
National Center of Biotechnology Information (NCBI)
website. Phylogenetic analysis of sequences was done with
the help of MegAlign (DNA Star) software version 5.05.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

7. รหัสจีโนไทป์ของเชื้อราที่แยกได้ลำดับของนิวคลีโอไทด์ของยีนใน rRNA บางพันธุ์ Penicilliumกระทำการ ด้วยความช่วยเหลือของ บริษัท SolGent แทจอนประเทศเกาหลีใต้ ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับการขยายยีนมีดังนี้องค์ประกอบ: ITS1 (50-TCC GTA GGT เฒ่า CCTGCG G-30), และ ITS4 (50-TCC TCC GCT ททท. TGA TATGC-30) แล้ว ทำการขยายออกในความร้อนcycler ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้: denaturation หนึ่งรอบที่ 95 C 15 s ตามวงจร 30 การ denaturationที่ 95 C สำหรับ 20 s การอบเหนียวที่ 50 C 40 s และส่วนขยายที่ 72 C ใน 1 นาที ขยายสุดท้ายขั้นตอนที่ 72 C สำหรับ5 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR ที่บริสุทธิ์ที่ มี SolGent แล้วPCR ฟอกชุด-Ultra (SolGent แทจอน เกาหลีใต้)ก่อนที่จะจัดลำดับ ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ถูก reconfirmed(โดยใช้เครื่องหมายขนาด) โดย electrophoreses 1% agarose เจแล้ว วงนี้ eluted และเรียงลำดับพร้อมจดทะเบียนของ dideoxynucleotides (dd NTPs) ส่วนผสมของปฏิกิริยาแต่ละอย่างถูกเรียงลำดับในความรู้สึกและ antisenseคำแนะนำในการใช้ไพรเมอร์ ITS1 และ ITS4 (สีขาวและ al., 1990)ลำดับต่อไปได้วิเคราะห์โดยใช้ระเบิดจากการข้อมูลแห่งชาติศูนย์เทคโนโลยีชีวภาพ (NCBI)เว็บไซต์ ทำการวิเคราะห์ลำดับ phylogenetic ด้วยความช่วยเหลือของ MegAlign (DNA ดาว) ซอฟต์แวร์เวอร์ชัน 5.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

7.
การระบุพันธุกรรมของเชื้อราที่แยกลำดับเบสของยีนrRNA บางชนิด Penicillium
ได้ทำด้วยความช่วยเหลือของ SolGent บริษัท ใน Daejeon,
เกาหลีใต้ ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับการขยายยีนได้ดังต่อไปนี้องค์ประกอบ: ITS1 (50 TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-30) และ ITS4 (50 ทีซีซีทีซีซีจีซีทีการท่องเที่ยวแห่งประเทศไทยททท TGA GC-30) จากนั้นขยายได้ดำเนินการในการระบายความร้อนCycler ภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้: หนึ่งรอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ? ที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 วินาทีตามด้วย 30 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ? ที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 วินาที, การอบที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 และขยาย? ที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีโดยมีขั้นตอนการขยายสุดท้ายที่ 72? C เป็นเวลา5 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกทำให้บริสุทธิ์แล้วด้วย SolGent PCR บริสุทธิ์ Ultra-Kit (SolGent, แทจอน, เกาหลีใต้) ก่อนที่จะมีการเรียงลำดับ ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ได้รับการยืนยันอีกครั้ง(โดยใช้เครื่องหมายขนาด) โดย electrophoreses ในเจล agarose 1%. จากนั้นวงดนตรีเหล่านี้ถูกชะและติดใจกับการรวมตัวกันของ dideoxynucleotides (วว NTPs) ในส่วนผสมปฏิกิริยา. ตัวอย่างแต่ละคนติดใจในความรู้สึกและ antisense เส้นทางโดยใช้ ITS1 และไพรเมอร์ ITS4 (สีขาว et al., 1990). ลำดับการวิเคราะห์เพิ่มเติมได้โดยใช้ระเบิดจากศูนย์แห่งชาติของข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ (NCBI) เว็บไซต์ การวิเคราะห์วิวัฒนาการของลำดับทำด้วยความช่วยเหลือของ MegAlign นี้ (ดีเอ็นเอดาว) ซอฟต์แวร์รุ่น 5.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

7 . รหัสทางพันธุกรรมของเชื้อราไอโซเลทของ rRNA ยีน
ลำดับของ Penicillium สายพันธุ์
เบสได้ด้วยความช่วยเหลือของ บริษัท solgent
, Daejeon , เกาหลีใต้ ไพรเมอร์ใช้ยีน ( มี
องค์ประกอบต่อไปนี้ : its1 ( 50-tcc GTA GGT GAA CCT
gcg g-30 ) และ its4 ( 50-tcc TCC GCT ททท. ททท. ด้วย
gc-30 ) แล้วขยายได้ดำเนินการในร้อน
วงจรภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้ : หนึ่งรอบของการหยุดชั่วคราว
95  C เป็นเวลา 15 วินาที ตามด้วย 30 รอบ (
95  C เป็นเวลา 20 วินาที annealing ที่ 50  C 40 s และส่งเสริม 
72 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที ด้วยขั้นตอนการสุดท้ายที่ 72  C
5 นาที ที่เพิ่มปริมาณแล้วให้บริสุทธิ์ด้วย solgent
PCR ฟอกชุด Ultra ( solgent , Daejeon , เกาหลีใต้ )
ก่อนของบริสุทธิ์ผลิตภัณฑ์ PCR ยืนยัน
( ใช้ขนาดเครื่องหมาย ) โดย electrophoreses บน 1% เจล .
แล้ววงนี้และตัวอย่างนี้กับการรวมตัวของ dideoxynucleotides
( DD ntps ) ในการผสมแต่ละตัวอย่างเป็นลำดับ
ในความรู้สึกและทิศทางการใช้ its1 its4 antisense
และไพรเมอร์ ( สีขาว et al . 1990 ) .
ลำดับได้ โดยใช้ระเบิดจาก
ศูนย์สารสนเทศเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ ( ncbi )
เว็บไซต์ การวิเคราะห์ชนิดของลำดับเสร็จแล้ว
ช่วย megalign ( ดาวดีเอ็นเอซอฟต์แวร์รุ่น 5.05 .