2.1. Extraction of phycobiliprotein

2.1. Extraction of phycobiliproteins

Fresh thalli of red seaweed, G. crassa, ( Fig. 1) collected from Pudumadam coast, Rameswaram, Tamilnadu, India, were cleaned thoroughly with distilled water to remove unwanted debris, epiphytes, etc., and stored at 4 °C. Phycobiliproteins were extracted using 0.1 M phosphate buffer (pH 6.8), distilled water (pH 7.0) and seawater (pH 8.13) separately under room temperature in the ratio of 1:13 w/v. Fresh thalli 20 g in 0.1 M phosphate buffer, 15 g in distilled water and 1 g in seawater were ground in mortar and pestle repeatedly to extract crude pigment and centrifuged at 10,000 rpm for 20 min and later filtered through a 0.2 μm syringe filter (Millipore, polyethersulfone membrane) in order to remove insoluble particles present in the crude extract [25]. The filtrate was stored at 4 °C until further studies. Fig. 2 shows a schematic representation of the overall experiment.

2.2. Quantification of phycobiliproteins

Crude and filtered (0.2 μm) phycobiliproteins from different solvent extracts such as 260 mL (buffer), 200 mL (distilled water) and 15 mL (seawater) were analysed by a UV–visible spectrophotometer and are quantified using the following equations of Bennett & Bogorad [26].

2.3. Quality/purity of pigments

The crude pigment was extracted using 260 mL of 0.1 M phosphate buffer (pH 6.8) followed by ammonium sulphate precipitation (65% saturation) and dialysed (molecular weight cut-off: 12–14 kDa, HiMedia, India) overnight at 4 °C against 1 L of 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 6.8). After dialysis, PE was separated and purified through column chromatography by using DEAE (Diethylaminoethyl) cellulose 52 (HiMedia, India). Phycoerythrin was eluted using 50 mL of NaCl gradient from 50 mM NaCl to 300 mM NaCl in 0.1 M potassium phosphate buffer at pH 6.8. The purity of the R-phycoerythrin pigment was analysed by UV–visible spectrophotometer (Varion 300) scan in the range between 450 and 650 nm (see Supplementary material Figs. 1 and 2). The purity index (PI) for each class of phycobiliprotein was calculated by using the formula as given by Senthilkumar et al. [27].

2.4. Phycobiliprotein stability in preservatives

Preservatives such as glucose, sucrose, citric acid, ascorbic acid, sodium chloride, sodium azide and butyl hydroxyl toluene were used to check the stability of the pigments under various temperatures. The percentage losses were calculated for:

1.
Crude phycobiliproteins (0.028 mg/mL) extracted in phosphate buffer (pH 6.8), filtered through a 0.2 μm syringe filter and stored at 0 ± 5 °C in different preservatives such as glucose (20%), sucrose (20%), sodium chloride (20%), ascorbic acid (0.4%), citric acid (0.4%), sodium azide (0.05%) and BHT (0.4%) under dark condition for 65 days.
2.
Crude phycobiliproteins (0.038 mg/mL) extracted in distilled water (pH 7.0) and stored at 0 ± 5 °C in different concentrations of sodium chloride (2%, 5%, 10%, 15%, 20%, and 25%) under dark for 50 days.
3.
Crude phycobiliproteins (0.024 mg/mL) extracted in seawater (pH 8.13) and stored at two different temperatures 30 ± 5 °C and 0 ± 5 °C in dark for 30 days.
4.
Crude phycobiliproteins (0.024 mg/mL) extracted in seawater, filtered through 0.2 μm syringe filter and stored at two different temperatures 30 ± 5 °C and 0 ± 5 °C in dark for 30 days.
The above-mentioned studies were conducted mainly to find the phycoerythrin stability in different concentrations of preservatives. The control pigment is used for comparison without any of the above-mentioned preservatives.

2.5. Application of R-phycoerythrin in puddings

Dialysed crude pigment was used for application studies. The purity index (PI) of the pigment was found to be 0.91. Since phycobiliproteins is used for food colouring, dialysed crude phycobiliproteins were subjected to filtration (0.2 μm PES syringe filter, Merck) and then used as food colourant. White colour puddings, commercially available, were used for colour testing. About 70 g of white coloured pudding (Manufactured by Jellico Food Co., Ltd, Taiwan) was mixed with 3 mL of dialysed pigment thoroughly under sterile condition, sealed and stored at 0 ± 5 °C for 50 days. The colour of the pudding was visually monitored on a daily basis.

2.6. Spectral properties of R-phycoerythrin

Absorption and emission wavelength of R-phycoerythrin were analysed using UV–visible spectrophotometer and spectrofluorometer, respectively. Fluorescence property (time resolved fluorescence spectrum) of R-PE was measured using a time-correlated single photon counting spectrometer (TCSPC). The light used in TCSPC was nano-LEDs and excitation, emission wavelength was set as 490 nm and 578 nm, respectively (see Supplementary material Fig. 3) [28].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1 การสกัด phycobiliproteinsThalli สดของสาหร่ายสีแดง crassa กรัม, (Fig. 1) รวบรวมจากฝั่ง Pudumadam, Rameswaram, Tamilnadu อินเดีย ทำความสะอาดอย่างทั่วถึง ด้วยน้ำกลั่นให้เอาเศษที่ไม่พึงประสงค์ เลี้ยง ฯลฯ และจัดเก็บที่ 4 องศาเซลเซียส Phycobiliproteins ถูกสกัดโดยใช้ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) กลั่นน้ำ (pH 7.0) และทะเล (pH 8.13) แยกต่างหากภายใต้อุณหภูมิห้องในอัตราส่วน ของ 1:13 w / v. thalli สด 20 กรัมใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 15 กรัมในน้ำกลั่น 1 g ในน้ำทะเลมีพื้นในโกร่งซ้ำ ๆ เพื่อดึงเม็ดสีหยาบ และ centrifuged ที่ 10000 rpm สำหรับ 20 นาที และหลังกรองผ่านตัวกรองเข็ม 0.2 μm (มาก เมมเบรน polyethersulfone) เพื่อเอาไม่ละลาย อนุภาคในดิบจะแยก [25] สารกรองถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C จนกว่าจะศึกษาเพิ่มเติม Fig. 2 แสดงแสดงแผนผังวงจรทดลองโดยรวม2.2 การนับของ phycobiliproteinsน้ำมัน และกรอง phycobiliproteins (0.2 μm) จากสารสกัดจากตัวทำละลายต่าง ๆ เช่น 260 มล. (บัฟเฟอร์), 200 mL (น้ำกลั่น) และ 15 mL (น้ำทะเล) ที่ analysed โดยเครื่องทดสอบกรดด่าง UV – เห็น และ quantified โดยใช้สมการต่อไปนี้ของเบนเนตและ Bogorad [26]2.3 การตรวจสอบคุณภาพ/ความบริสุทธิ์ของสีเม็ดน้ำมันที่สกัดโดยใช้ mL 260 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) ตาม ด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตฝน (ความเข้ม 65%) และ dialysed (ตัดน้ำหนักโมเลกุล: 12 – 14 kDa, HiMedia อินเดีย) ค้างคืนที่ 4 ° C กับ L 1 0.1 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) หลังจากหน่วย PE ถูกแยก และบริสุทธิ์ผ่านคอลัมน์ chromatography โดยเซลลูโลส DEAE (Diethylaminoethyl) 52 (HiMedia อินเดีย) Phycoerythrin ถูก eluted ใช้ 50 mL ของ NaCl ไล่ระดับจาก NaCl 50 มม.ถึง 300 มม. NaCl ใน 0.1 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.8 ความบริสุทธิ์ของผง R-phycoerythrin ถูก analysed โดยการสแกนเครื่องทดสอบกรดด่าง (Varion 300) UV – มองเห็นได้ในช่วงระหว่าง 450 และ 650 nm (ดูเสริมวัสดุ Figs. 1 และ 2) ดัชนีความบริสุทธิ์ (PI) ในแต่ละชั้นของ phycobiliprotein ถูกคำนวณ โดยใช้สูตรที่กำหนดโดย Senthilkumar et al. [27]2.4. Phycobiliprotein ความมั่นคงในสารกันบูดสารกันบูดเช่นกลูโคส ซูโครส กรดซิตริก กรดแอสคอร์บิค โซเดียมคลอไรด์ โซเดียม azide และส้ม butyl ไฮดรอกซิลโทลูอีถูกใช้ในการตรวจสอบความเสถียรของสีภายใต้อุณหภูมิต่าง ๆ สูญเสียเปอร์เซ็นต์ที่คำนวณได้สำหรับ:1น้ำมัน phycobiliproteins (0.028 mg/mL) สกัดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8), กรองผ่านตัวกรองเข็ม μm 0.2 และเก็บไว้ที่ 0 ± 5 ° C ในสารกันบูดต่าง ๆ เช่นกลูโคส (20%), ซูโครส (20%), โซเดียมคลอไรด์ (20%), กรดแอสคอร์บิค (0.4%), กรดซิตริก (0.4%), โซเดียม azide (0.05%) และบาท (0.4%) ภายใต้เงื่อนไขเข้ม 65 วัน2น้ำมัน phycobiliproteins (0.038 mg/mL) สกัดในกลั่นน้ำ (pH 7.0) และเก็บไว้ที่ 0 ± 5 ° C ในความเข้มข้นแตกต่างกันของโซเดียมคลอไรด์ (2%, 5%, 10%, 15%, 20% และ 25%) ภายใต้ความมืด 50 วัน3Phycobiliproteins ดิบ (0.024 mg/mL) สกัดในทะเล (pH 8.13) และเก็บไว้ที่อุณหภูมิแตกต่างกันสอง 30 ± 5 ° C และ 0 ± 5 ° C ในที่มืด 30 วัน4Phycobiliproteins ดิบ (0.024 mg/mL) สกัดในน้ำทะเลกรองผ่านตัวกรอง 0.2 μm เข็ม และเก็บที่อุณหภูมิแตกต่างกันสอง 30 ± 5 ° C และ 0 ± 5 ° C ในที่มืด 30 วันการศึกษาดังกล่าวได้ดำเนินการส่วนใหญ่หาเสถียรภาพ phycoerythrin ในความเข้มข้นต่าง ๆ ของสารกันบูด ผงควบคุมใช้สำหรับการเปรียบเทียบโดยไม่ต้องมีสารกันบูดดังกล่าว2.5 การใช้ R-phycoerythrin ในเลี่ยงดอกไม้ผงน้ำมัน dialysed ใช้ศึกษาประยุกต์ ดัชนีความบริสุทธิ์ (PI) ของรงควัตถุที่พบจะเป็น 0.91 เนื่องจากใช้อาหารให้สี phycobiliproteins, phycobiliproteins dialysed ดิบมีการกรอง (0.2 μm PES เข็มกรอง เมอร์ค) แล้ว ใช้ colourant อาหาร สีขาวเลี่ยงดอกไม้ ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ ถูกใช้สำหรับการทดสอบสี พุดดิ้งสีขาว (Manufactured โดย Jellico อาหาร Co., Ltd ไต้หวัน) ประมาณ 70 g ถูกผสมกับ 3 mL ของรงควัตถุ dialysed อย่างละเอียดภายใต้เงื่อนไขกอซ ปิดสนิท และเก็บไว้ที่ 0 ± 5 ° C 50 วัน มีการตรวจสอบสีของพุดดิ้งได้เห็นในชีวิตประจำ2.6 การสเปกตรัมคุณสมบัติของ R-phycoerythrinความยาวคลื่นที่ดูดซึมและการปล่อยก๊าซของ R-phycoerythrin ถูก analysed โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง UV – มองเห็นได้และ spectrofluorometer ตามลำดับ คุณสมบัติ fluorescence (เวลาแก้ไข fluorescence สเปกตรัม) ของ R -PE ถูกวัดโดยใช้โฟตอนเดี่ยวเวลา correlated นับสเปกโตรมิเตอร์ (TCSPC) แสงที่ใช้ใน TCSPC มีไฟ Led นาโนและในการกระตุ้น ตั้งค่าความยาวคลื่นปล่อยก๊าซเป็น 490 nm และ 578 nm ตามลำดับ (ดูเสริมวัสดุ Fig. 3) [28]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 สกัด phycobiliproteins thalli สดของสาหร่ายทะเลสีแดงกรัม crassa (รูปที่ 1). การเก็บรวบรวมจากชายฝั่ง Pudumadam, Rameswaram, ทมิฬนาฑูอินเดียได้รับการทำความสะอาดอย่างละเอียดด้วยน้ำกลั่นเพื่อเอาเศษที่ไม่พึงประสงค์ epiphytes ฯลฯ และเก็บไว้ที่ 4 องศา ซี Phycobiliproteins ถูกสกัดโดยใช้ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) น้ำกลั่น (pH 7.0) และน้ำทะเล (pH 8.13) แยกกันภายใต้อุณหภูมิห้องในอัตราส่วน 01:13 w / v thalli สด 20 กรัมใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์, 15 กรัมในน้ำกลั่นและ 1 กรัมในน้ำทะเลมาบดในครกและสากซ้ำ ๆ เพื่อดึงเม็ดสีดิบและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 นาทีต่อมาและกรองผ่าน 0.2 ไมครอนเข็มฉีดยากรอง (ค , polyethersulfone เมมเบรน) เพื่อที่จะเอาอนุภาคที่ไม่ละลายน้ำอยู่ในสารสกัดหยาบ [25] กรองถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนการศึกษาต่อไป มะเดื่อ 2 แสดงแผนผังแสดงการทดลองโดยรวม. 2.2 ปริมาณ phycobiliproteins น้ำมันดิบและกรอง (0.2 ไมครอน) phycobiliproteins จากสารสกัดด้วยตัวทำละลายที่แตกต่างกันเช่น 260 มิลลิลิตร (กันชน) 200 มิลลิลิตร (น้ำกลั่น) และ 15 มิลลิลิตร (น้ำทะเล) ได้รับการวิเคราะห์โดย spectrophotometer ยูวีที่มองเห็นและมีการวัดโดยใช้สมการดังต่อไปนี้ ของเบนเน็ตต์และ Bogorad [26]. 2.3 คุณภาพ / ความบริสุทธิ์ของสีเม็ดสีน้ำมันดิบถูกสกัดโดยใช้ 260 มิลลิลิตร 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) ตามด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตตกตะกอน (อิ่มตัว 65%) และไต (น้ำหนักโมเลกุลตัด: 12-14 กิโลดาลตัน, HIMEDIA, อินเดีย) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียสกับ 1 ลิตร 0.1 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) หลังจากที่ล้างไต, PE ถูกแยกออกและบริสุทธิ์ผ่านคอลัมน์โดยใช้ DEAE (Diethylaminoethyl) เซลลูโลส 52 (HIMEDIA, อินเดีย) Phycoerythrin ถูกชะใช้ 50 มลลาดโซเดียมคลอไรด์จาก 50 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ถึง 300 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ใน 0.1 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.8 ความบริสุทธิ์ของสี R-phycoerythrin วิเคราะห์ spectrophotometer ยูวีที่มองเห็น (Varion 300) สแกนในช่วงระหว่าง 450 และ 650 นาโนเมตร (ดูมะเดื่อวัสดุเสริม. 1 และ 2) ดัชนีความบริสุทธิ์ (PI) สำหรับการเรียนของแต่ละ phycobiliprotein ที่คำนวณโดยใช้สูตรที่กำหนดโดย Senthilkumar et al, [27]. 2.4 ความมั่นคงใน Phycobiliprotein สารกันบูดสารกันบูดเช่นกลูโคสซูโครสกรดซิตริก, วิตามินซี, โซเดียมคลอไรด์, โซเดียมเอไซด์และโทลูอีนไฮดรอกซิบิวทิลถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบความมั่นคงของเม็ดสีที่อยู่ภายใต้อุณหภูมิต่างๆ การสูญเสียร้อยละคำนวณสำหรับ: 1. น้ำมันดิบ phycobiliproteins (0.028 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) สกัดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) กรองผ่านตัวกรอง 0.2 ไมครอนเข็มฉีดยาและเก็บไว้ที่ 0 ± 5 ° C ในสารกันบูดที่แตกต่างกันเช่นกลูโคส (20% ), น้ำตาลซูโครส (20%), โซเดียมคลอไรด์ (20%) วิตามินซี (0.4%) กรดซิตริก (0.4%) โซเดียมเอไซด์ (0.05%) และบาท (0.4%) ในสภาพมืด 65 วัน. 2 phycobiliproteins ดิบ (0.038 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) สกัดในน้ำกลั่น (pH 7.0) และเก็บไว้ที่ 0 ± 5 องศาเซลเซียสในระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันของโซเดียมคลอไรด์ (2%, 5%, 10%, 15%, 20% และ 25%) ภายใต้มืด 50 วัน. 3. phycobiliproteins น้ำมันดิบ (0.024 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) สกัดในน้ำทะเล (pH 8.13) และเก็บไว้ที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันสอง 30 ± 5 องศาเซลเซียสและ 0 ± 5 องศาเซลเซียสในที่มืดเป็นเวลา 30 วัน. 4. น้ำมันดิบ phycobiliproteins (0.024 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) สกัดในน้ำทะเลกรองผ่านการกรอง 0.2 ไมครอนเข็มฉีดยาและเก็บไว้ที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันสอง 30 ± 5 องศาเซลเซียสและ 0 ± 5 องศาเซลเซียสในที่มืดเป็นเวลา 30 วัน. การศึกษาดังกล่าวข้างต้นได้ดำเนินการส่วนใหญ่จะพบว่า phycoerythrin ความมั่นคงในระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันของสารกันบูด เม็ดสีที่จะใช้ในการควบคุมสำหรับการเปรียบเทียบโดยไม่ต้องมีสารกันบูดดังกล่าวข้างต้น. 2.5 การประยุกต์ใช้ R-phycoerythrin ในพุดดิ้งไตสีน้ำมันดิบถูกนำมาใช้สำหรับการศึกษาการประยุกต์ใช้ ดัชนีความบริสุทธิ์ (PI) ของเม็ดสีถูกพบว่าเป็น 0.91 ตั้งแต่ phycobiliproteins ใช้สำหรับสีผสมอาหาร, phycobiliproteins น้ำมันดิบไตถูกยัดเยียดให้การกรอง (0.2 ไมโครเมตร PES เข็มฉีดยากรองเมอร์ค) และนำไปใช้เป็นอาหาร colourant พุดดิ้งสีขาวใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบสี ประมาณ 70 กรัมของพุดดิ้งสีขาว (ผลิตโดยเจลลิโคอาหาร จำกัด ไต้หวัน) ผสมกับ 3 มิลลิลิตรของเม็ดสีไตอย่างทั่วถึงภายใต้เงื่อนไขหมันปิดผนึกและเก็บไว้ที่ 0 ± 5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 50 วัน สีของพุดดิ้งที่ได้รับการตรวจสอบทางสายตาในชีวิตประจำวัน. 2.6 คุณสมบัติสเปกตรัมของ R-phycoerythrin การดูดซึมและการปล่อยคลื่น R-phycoerythrin ถูกวิเคราะห์โดยใช้ spectrophotometer ยูวีที่มองเห็นและ spectrofluorometer ตามลำดับ คุณสมบัติเรืองแสง (เวลาแก้ไขสเปกตรัมเรืองแสง) ของ R-PE ถูกวัดโดยใช้เวลาที่มีลักษณะร่วมสเปกโตรมิเตอร์นับโฟตอนเดียว (TCSPC) แสงที่ใช้ในการ TCSPC เป็นนาโนไฟ LED และกระตุ้นการปล่อยความยาวคลื่นถูกตั้งเป็น 490 นาโนเมตรและ 578 นาโนเมตรตามลำดับ (ดูรูปที่วัสดุเสริม. 3) [28]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . การสกัด phycobiliproteins

สดธาลลิสาหร่าย สีแดง . crassa ( รูปที่ 1 ) รวบรวมจากชายฝั่ง pudumadam ราเมสวาราม , Tamilnadu , อินเดีย , ซักให้สะอาดด้วยน้ำที่จะลบที่ไม่พึงประสงค์ debris , พืชอาศัย , ฯลฯ และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา phycobiliproteins สกัดใช้ 0.1 M phosphate buffer pH 6.8 ) , กลั่น น้ำ ( pH 7.0 ) และน้ำ ( pH 813 ) แยกต่างหากภายใต้อุณหภูมิห้อง ในอัตราส่วน 1 : 13 W / V สดธาลลิ 20 กรัมใน 0.1 M phosphate buffer , 15 กรัมในน้ำกลั่นและ 1 กรัมในน้ำทะเลและดินในครกและสาก ๆเพื่อแยกเม็ดหยาบ และระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 นาทีและต่อมากรองผ่านตัวกรอง ( 0.2 μเมตร เข็มฉีดยา มิลลิ ,โพลีเ เทอร์ซัลโฟนเมมเบรน ) เพื่อเอาอนุภาคในปัจจุบันสารสกัดหยาบ 25 [ ] ลง หนักที่ถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C ถึงการศึกษา รูปที่ 2 แสดงการแสดงแผนผังของการทดลองโดยรวม .

. . ปริมาณของ phycobiliproteins

หยาบและกรอง ( 0.2 μ M ) phycobiliproteins จากสารสกัดตัวทำละลายที่แตกต่างกันเช่น 260 ml ( บัฟเฟอร์ )200 ml ( น้ำกลั่น ) และ 15 ml ( น้ำทะเล ) วิเคราะห์โดย– UV Spectrophotometer และวัดได้ใช้สมการของเบนเน็ตต์& bogorad [ 26 ] ต่อไปนี้

2.3 คุณภาพความบริสุทธิ์ของสี

เม็ดสกัดใช้ 260 ml 0.1 M phosphate buffer pH 6.8 ) ตามด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตตกตะกอน ( 65 % อิ่มตัว ) และ dialysed ( น้ำหนักโมเลกุลตัดออก : 12 – 14 kDahimedia อินเดีย ) ค้างคืนที่ 4 ° C ต่อ 1 ลิตร 0.1 โมลาร์โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.8 ) หลังจากฟอกไต , PE แยกและทำให้บริสุทธิ์โดยผ่านคอลัมน์โครมาโตกราฟฟีโดยใช้ DEAE เซลลูโลส ( diethylaminoethyl ) 52 ( himedia , อินเดีย ) ไฟโคอิริทริทคือตัวอย่างการใช้เกลือโซเดียมคลอไรด์ที่ระดับ 50 มิลลิลิตร จาก 50 มม. ถึง 300 มม. ในขนาด 0.1 โมลาร์โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 .ความบริสุทธิ์ของ r-phycoerythrin สี ? โดย UV Spectrophotometer ( –มองเห็น varion 300 ) สแกนในช่วงระหว่าง 450 650 nm ( เห็นมะเดื่อวัสดุเสริม 1 และ 2 ) ดัชนีความบริสุทธิ์ ( PI ) สำหรับแต่ละชั้นของ phycobiliprotein คำนวณโดยใช้สูตรที่กำหนดโดย senthilkumar et al . [ 27 ] .

2.4 . phycobiliprotein เสถียรภาพในสารกันบูด

สารกันบูด เช่น กลูโคสซูโครส , กรดซิตริก , กรดแอสคอร์บิก โซเดียม คลอไรด์ โซเดียมไฮดรอกไซด์และโทลูอีน บิวทิล ถูกใช้เพื่อตรวจสอบเสถียรภาพของเม็ดสีภายใต้อุณหภูมิต่างๆ ค่าความสูญเสียได้ :

1
ดิบ phycobiliproteins ( 0.028 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ) ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.8 ) กรองผ่าน 02 μมเข็มตัวกรอง และเก็บไว้ที่ 0 ± 5 ° C ในสารกันบูดต่างๆ เช่น กลูโคส ซูโครส ( 20% ) ( 20% ) , โซเดียม คลอไรด์ ( 20% ) , กรดแอสคอร์บิค ( 0.4% ) , กรดซิตริก ( 0.4% ) , โซเดียม ไซด์ ( 0.05% ) และ BHT ( 0.4% ) ภายใต้ ภาพมืด 65 วัน .
2
ดิบ phycobiliproteins ( 0.038 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ) ในน้ำ ( pH 7.0 ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 0 ± 5 ° C ในระดับความเข้มข้นของเกลือโซเดียมคลอไรด์ ( 2 %5% , 10% , 15% , 20% , 25% ) ภายใต้ความมืดเป็นเวลา 50 วัน
3
ดิบ phycobiliproteins ( 0.024 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ) ในน้ำทะเล ( pH 8.13 ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 5 องศาที่แตกต่างกันสอง 30 ± 0 ± 5 ° C และ C ในที่มืดเป็นเวลา 30 วัน
4
ดิบ phycobiliproteins ( 0.024 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ) ในน้ำทะเล กรองผ่านμ 0.2 M เข็มตัวกรอง และเก็บไว้ที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันสอง 30 ± 5 ° C และ 0 ± 5 ° C มืดเป็นเวลา 30 วัน
การศึกษาดังกล่าวข้างต้นจำนวนส่วนใหญ่หาไฟโคอิริทริทเสถียรภาพในระดับความเข้มข้นของสารกันบูด เม็ดควบคุมที่ใช้สำหรับการเปรียบเทียบโดยไม่ต้องใด ๆของสารกันบูดดังกล่าว .

2.5 การประยุกต์ใช้ r-phycoerythrin ในพุดดิ้ง

dialysed ดิบเม็ดสีถูกใช้สำหรับการศึกษาโปรแกรม ดัชนีความบริสุทธิ์ ( PI ) ของเม็ดสีได้ 3 .ตั้งแต่ phycobiliproteins ใช้สีอาหาร dialysed ดิบ phycobiliproteins ถูกกรอง ( 0.2 μ M PES เข็มตัวกรอง , Merck ) แล้วใช้เป็น คัลเลอร์แรนท์ อาหาร สีขาวสีพุดดิ้งอาด ถูกใช้สำหรับการทดสอบสี ประมาณ 70 กรัม พุดดิ้งสีขาว ( ผลิตโดยที่ตั้งอาหาร จํากัดไต้หวัน ) ผสมกับ 3 ml สี dialysed อย่างละเอียด ภายใต้สภาพปลอดเชื้อ , ปิดผนึกและเก็บไว้ที่ 0 ± 5 ° C เป็นเวลา 50 วัน สี ของพุดดิ้งเป็นสายตาตรวจสอบในแต่ละวัน

2.6 สเปกตรัมคุณสมบัติของ r-phycoerythrin

การดูดซึมและการปล่อยความยาวคลื่นของ r-phycoerythrin วิเคราะห์การใช้ UV Spectrophotometer และ spectrofluorometer ( มองเห็นได้ )เรืองทรัพย์ ( เวลาแก้ไขสเปกตรัมฟลูออเรสเซนซ์ของ r-pe การวัดเวลาความสัมพันธ์เดียวนับโฟตอน Spectrometer ( tcspc ) แสงที่ใช้ใน tcspc คือไฟ LED นาโนและความตื่นเต้น ที่ปล่อย ความยาวคลื่น 578 nm และถูกตั้งค่าเป็น 490 นาโนเมตร ( ดูวัสดุเสริมรูปที่ 3 ) [ 28 ]