Rapid analysis of GABA and glutamat

Rapid analysis of GABA and glutamate in microdialysis samples using high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry

A liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) method has been established for the rapid and reliable determination of γ-aminobutyric acid (GABA) and glutamate in brain microdialysates. The microdialysis samples were analysed using a HILIC (hydrophilic interaction liquid chromatography) column, which is able to retain the polar amino acid neurotransmitters. The mobile phase consisted of a binary gradient elution profile comprising 0.1% formic acid in water and acetonitrile. GABA, glutamate as well as the respective internal standards [D6]-GABA and [D5]-glutamate were detected by a triple quadrupole mass spectrometer in the positive electrospray ionisation mode within a running time of 3 min. The linearity ranged from 1 nM to 10 μM for GABA and 10 nM to 10 μM for glutamate. The limit of quantitation was found to be 1 nM for GABA and 10 nM for glutamate (injection volume 10 μl). The present LC–MS/MS method was compared to the classical method for analysis of GABA and glutamate using high performance liquid chromatography (HPLC) and fluorescence detection (FD). Eventually, the feasibility of the LC–MS/MS method was demonstrated using in vivo microdialysis in rats by monitoring changes of the extracellular concentrations of GABA and glutamate in the globus pallidus following stimulation with potassium.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์อย่างรวดเร็วของกาบาและกลูตาเมตในตัวอย่าง microdialysis ใช้ของเหลว chromatography ประสิทธิภาพสูงและตีคู่มวลสารของเหลวchromatography / ตีคู่มวลสาร (LC-MS / MS) วิธีการได้รับการจัดตั้งขึ้นสำหรับการวัดที่รวดเร็วและเชื่อถือได้ของกรดγ-aminobutyric (GABA) และกลูตาเมตใน microdialysates สมอง กลุ่มตัวอย่าง microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ HILIC (ปฏิสัมพันธ์ของเหลว chromatography hydrophilic) คอลัมน์ซึ่งจะทำให้สามารถที่จะเก็บสารสื่อประสาทกรดอะมิโนขั้วโลก เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยรายละเอียดชะลาดไบนารีประกอบด้วย 0.1% กรดในน้ำและ acetonitrile GABA, กลูตาเมตเช่นเดียวกับมาตรฐานภายในที่เกี่ยวข้อง [D6] -GABA และ [D5] -glutamate ถูกตรวจพบโดยสเปกโตรมิเตอร์มวลสาม quadrupole ในโหมด Ionisation electrospray บวกภายในระยะเวลาการทำงานของ 3 นาที เชิงเส้นตั้งแต่ 1 นาโนเมตรถึง 10 ไมครอนสำหรับกาบาและ 10 นาโนเมตรถึง 10 ไมครอนสำหรับกลูตาเมต ขีด จำกัด ของปริมาณพบว่า 1 นาโนเมตรสำหรับกาบาและ 10 นาโนเมตรสำหรับกลูตาเมต (ปริมาณการฉีด 10 ไมโครลิตร) ปัจจุบัน LC-MS / MS วิธีการได้รับการเปรียบเทียบกับวิธีคลาสสิกสำหรับการวิเคราะห์ของกาบาและกลูตาเมตที่ใช้ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) และการตรวจสอบการเรืองแสง (FD) ในที่สุดความเป็นไปได้ของวิธี LC-MS / MS ถูกแสดงให้เห็นถึงการใช้ใน microdialysis ร่างกายในหนูโดยการตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของความเข้มข้นของสารกาบาและกลูตาเมตในลูกโลก pallidus ต่อไปนี้การกระตุ้นด้วยโพแทสเซียม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์อย่างรวดเร็วของ GABA และผงชูรสใน microdialysis ตัวอย่าง โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงและตีคู่มวลสาร

ของเหลวโครมาโทกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี ( LC ) จาก MS / MS ) ได้รับการจัดตั้งขึ้นสำหรับรวดเร็วและเชื่อถือได้กำหนดγอะมิโนบูทิริกแอซิด ( GABA ) และกลูตาเมตในสมอง microdialysates .การ microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ hilic ( น้ำ ( liquid chromatography ) คอลัมน์ ซึ่งสามารถรักษาขั้ว อะมิโน แอซิด สารสื่อนำประสาท . เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเลขฐานสองลาด ( โปรไฟล์ประกอบด้วย 0.1% กรดในน้ำและไน . GABA ,กลูตาเมตเป็นมาตรฐาน [ ภายในแต่ละ d6 ] - [ D5 ] - GABA และผงชูรสที่ถูกตรวจพบโดยสามสี่ขั้วแมสสเปกโทรมิเตอร์ในบวก วิธีพ่นละอองไฟฟ้า ionisation โหมดภายในเวลา 3 นาที มีค่าตั้งแต่ 1 ถึง 10 μนาโนเมตรสำหรับ GABA และ 10 nm ถึง 10 μ M สำหรับ ผงชูรสขีดจำกัดของปริมาณที่พบจะเป็น 1 nm สำหรับ GABA และ 10 nm สำหรับกลูตาเมต ( ปริมาณ 10 μผมฉีด ) LC MS / MS ปัจจุบัน–วิธีการ เมื่อเทียบกับวิธีดั้งเดิมในการวิเคราะห์ของ GABA และผงชูรสโดยใช้วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) และตรวจจับการเรืองแสง ( FD ) ในที่สุดความเป็นไปได้ของ LC MS / MS และวิธีการแสดงให้เห็นถึงการใช้ฤทธิ์ใน microdialysis หนูโดยการตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของ extracellular ปริมาณ GABA และผงชูรสในเมืองเหนือ Globus ต่อไปนี้
การกระตุ้นด้วยโพแทสเซียม