2.3. Isolation of leucocytesGranulo

2.3. Isolation of leucocytes
Granulocytes and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)
were purified from venous whole blood in 10 ml Monoject tubes
containing 170 IU of lithium heparin (Belliver Industrial Estate,
Plymouth PL6 7BP, UK) as described previously. 6 Briefly, the blood,1:1 diluted with phosphate buffered saline (PBS, B. Braun Mel-sungen AG, Melsungen, Germany), was placed on Percoll ( r 1.076 g/ml, GE Healthcare Biosciences AB, Uppsala, Sweden) and centri-fuged (700?g, 20 min, RT). The lymphocyte-containing interphase (PBMC) was washed twice with cold PBS and suspended in Hank’s
Buffered Salt Solution (HBSS) tothe desired final concentration. The
granulocyte-containing pellet was suspended in 50 ml ice-cold
isotonic lysis solution for 10e15 min. After centrifugation (400?g,
5 min) the remaining erythrocytes were lysed in fresh lysis solution
for another 5 min. The granulocytes were washed twice with cold
PBS and suspended in HBSS (with 0.5% bovine serum albumin
(BSA)) to the desired final concentration.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การแยกศึกษาลักษณะชนิดอุปกรณ์ต่อพ่วงและ granulocytes เลือดเซลล์ mononuclear (PBMCs)ได้บริสุทธิ์จากเลือดดำทั้งหมดในหลอด 10 ml Monojectประกอบด้วย 170 IU ของลิเธียมเฮพาริน (นิคมอุตสาหกรรม Belliverพลีมัธ PL6 7BP, UK) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 6 สั้น ๆ เลือด 1:1 ผสมกับน้ำเกลือฟอสเฟต buffered (PBS, B. Braun AG ที่เมล sungen, Melsungen เยอรมนี) ถูกวางบน Percoll (อาร์ 1.076 g/ml, GE สุขภาพเวลาออก AB, Uppsala สวีเดน) และ centri fuged (700 ? g, 20 นาที RT) ล้าง ด้วย PBS เย็นสองครั้ง และหยุดในแฮงก์ของ lymphocyte ประกอบด้วย interphase (PBMC)ถูกบัฟเฟอร์เกลือโซลูชั่น (HBSS) กับความเข้มข้นสุดท้ายที่ต้องการ ที่เม็ดประกอบด้วยแกรนูโลไซต์ถูกระงับในฉ่ำ 50 mlโซลูชั่น isotonic lysis สำหรับ 10e15 นาที หลังจาก centrifugation (400 ? g5 นาที) erythrocytes เหลือได้ lysed ในโซลูชัน lysis สดสำหรับอีก 5 นาที Granulocytes ถูกล้าง ด้วยน้ำเย็นสองครั้งPBS และ HBSS ระงับใน (ด้วย 0.5% วัว serum albumin(บีเอสเอ)) เพื่อสมาธิสุดท้ายต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การแยกเม็ดเลือดขาว
granulocytes และอุปกรณ์ต่อพ่วงโมโนนิวเคลียร์เซลล์ในเลือด (PBMCs)
ถูกทำให้บริสุทธิ์จากเลือดดำทั้ง 10 มิลลิลิตรหลอด Monoject
มี 170 IU ของเฮลิเธียม (Belliver นิคมอุตสาหกรรม
พลีมั ธ PL6 7BP สหราชอาณาจักร) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 6 สั้น ๆ , เลือด, 1: 1 เจือจางด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส, B. Braun เมล Sungen แบงก์ Melsungen, เยอรมนี), ถูกวางลงบน Percoll (R 1.076 g / ml, GE Healthcare ชีววิทยาศาสตร์ AB, สวีเดน) และ Centri-fuged (700 กรัม, 20 นาที, RT) ระหว่างเฟสเม็ดเลือดขาวที่มี (PBMC) ถูกล้างครั้งที่สองกับพีบีเอสที่หนาวเย็นและลอยอยู่ในแฮงค์
Buffered โซลูชั่นเกลือ (HBSS) tothe เข้มข้นสุดท้ายที่ต้องการ
granulocyte ที่มีเม็ดถูกระงับใน 50 มลเย็น
แก้ปัญหาสลาย isotonic สำหรับ 10e15 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยง (400 กรัม,
5 นาที) เม็ดเลือดแดงที่เหลืออยู่ในการแก้ปัญหา lysed สลายสด
อีก 5 นาที granulocytes ถูกล้างครั้งที่สองกับความหนาวเย็น
พีบีเอสและแขวนลอยใน HBSS (กับ 0.5% ในซีรั่มอัลบูมิวัว
(BSA)) เพื่อความเข้มข้นสุดท้ายที่ต้องการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การแยก leucocytes
แกรนูโลไซต์และเซลล์ปกติเม็ดเลือดขาว ( PBMCs )
) บริสุทธิ์จากเลือดในหลอดเลือดดำทั้ง 10 ml monoject หลอด
ที่มี 170 IU ของลิเธียม heparin ( belliver นิคมอุตสาหกรรม ,
pl6 7bp พลีมัธ , สหราชอาณาจักร ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 6 สั้น เลือด น้ำเกลือเจือจางด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 1 : 1 ( PBS , บี บราวน์ เมล sungen AG , เมลล์ซุนเก่น , เยอรมัน ) ,อยู่ใน percoll ( R 1.076 g / ml , GE Healthcare ชีววิทยาศาสตร์ AB , Uppsala , สวีเดน ) และ centri fuged ( 700 ? กรัม , 20 นาที , RT ) โดยประกอบด้วยระยะอินเตอร์เฟส ( 2 ) ล้างสองครั้งกับ PBS เย็นและแขวนลอยในสารละลายเกลือ ( แฮงค์
2 hbss ) เพื่อต้องการความเข้มข้นสุดท้าย
กรานูโลไซต์ที่มีเม็ดถูกระงับใน 50 ml เย็น
ไอโซโทนิคเสื่อมโซลูชั่นสำหรับ 10e15 min .