In the present study, to explore th

In the present study, to explore the antidiabetic potential of
concomitant inhibition of SGLT2 and DPP4, the combined effect of
teneligliptin and canagliflozin on glucose intolerance in an oral
glucose tolerance test (OGTT) was investigated in 13-week-old
Zucker diabetic fatty (ZDF) rats.
2. Materials and methods
2.1. Reagents and chemicals
Teneligliptin (98.8% purity) and canagliflozin (>99.95% purity)
were synthesized at Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation (Todashi,
Saitama, Japan).
2.2. Cell-based assays
2.2.1. SGLTs inhibition assay
Expression plasmids containing human SGLT1 (hSGLT1), human
SGLT2 (hSGLT2), rat SGLT1 (rSGLT1), and rat SGLT2 (rSGLT2) were
stably transfected into Chinese hamster ovary (CHO)eK1 cells. Cells
were seeded into 24-well plates at a density of 4
105 cells/well in
Ham's F-12 medium containing 10% fetal bovine serum and were
incubated at 37 C in an assay buffer containing 50 mM HEPES,
20 mM Tris Base, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, and 137 mM
NaCl at pH 7.4. SGLT1 and SGLT2 transporter activities were assayed
after 2 h of reaction time with 0.3 or 0.5 mM a-methyl-D-glucopyranoside
(AMG; SigmaeAldrich, St. Louis, MO) in the presence of
[
14C]AMG (PerkinElmer, Waltham, MA). Radioactive counts in the
cells were determined using a liquid scintillation counter (PerkinElmer).
Protein concentration was measured using the CoomassiePlus
Protein Assay Kit (Pierce, Rockford, IL).
2.2.2. DPP4 inhibition assay
Inhibitory activities against human DPP4 were measured using a
fluorogenic DPP4 Assay Kit (BPS Bioscience, San Diego, CA). Test
compound solution, DPP substrate, and human recombinant DPP4
were mixed to initiate the enzyme reaction. After a 10 min reaction
at room temperature, the fluorescence intensity was measured
using a microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA).
Inhibitory activities against rat DPP4 were measured using
serum collected from 7-week-old male SpragueeDawley (SD) rats
(Charles River Japan, Yokohama, Japan). Rat serum and Glycyl-Lproline
4-methylcoumaryl-7-amide (MCA) were mixed with PBS
containing 0.003% Brij-35 to initiate the enzyme reaction, as previously
described (18). The fluorescence intensity of MCA was
measured using a microplate reader after a 1-h incubation at 37 C.
2.3. In vivo studies
2.3.1. Animals and test compound administration
All animal experimental procedures were approved by the
Institutional Animal Care and Use Committee of Mitsubishi Tanabe
Pharma Corporation or LSI Medience Corporation (Tokyo, Japan)
and met the Japanese Experimental Animal Research Association
standards, as defined in the Guidelines for Animal Experiments
(1987). Male ZDF-Leprfa/CrlCrlj rats were purchased from Charles
River Japan. During an acclimatization period of 6 weeks, the animals
were housed with a 12-h light/dark cycle and controlled
temperature and humidity. Rats were provided water ad libitum
and a standard commercial diet. Test compounds for oral gavage
were prepared in 0.5% hydroxypropyl methylcellulose.
2.3.2. OGTT in ZDF rats
Because female ZDF rats rarely exhibit hyperglycemia, despite
obesity and insulin resistance comparable to males (20,23), we

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการศึกษาปัจจุบัน การสำรวจศักยภาพของ antidiabeticมั่นใจยับยั้ง SGLT2 และ DPP4 ผลรวมของteneligliptin และ canagliflozin ในกลูโคส intolerance ในช่องปากทดสอบการยอมรับกลูโคส (OGTT) ถูกสอบสวนในอายุ 13 สัปดาห์Zucker ไขมันโรคเบาหวาน (ZDF) หนู2. วัสดุและวิธีการ2.1. reagents และเคมีภัณฑ์Teneligliptin (ความบริสุทธิ์ 98.8%) และ canagliflozin (> บริสุทธิ์ 99.95%)ถูกสังเคราะห์ที่มิตซูบิชิ Tanabe Pharma บริษัท (Todashiไซตะมะ ญี่ปุ่น)2.2. เซลล์ตาม assays2.2.1. SGLTs ยับยั้งการทดสอบPlasmids นิพจน์ประกอบด้วยมนุษย์ SGLT1 (hSGLT1), มนุษย์SGLT2 (hSGLT2), ราษฎร์ SGLT1 (rSGLT1), และราษฎร์ SGLT2 (rSGLT2) ได้stably transfected เป็นหนูแฮมสเตอร์จีนรังไข่ (ช่อ) eK1 เซลล์ เซลล์มี seeded ในดี 24 แผ่นที่ความหนาแน่นของเซลล์ 4 105 ดีในกลาง F 12 ของแฮมที่ประกอบด้วย 10% ซีรั่มวัวและทารกในครรภ์และincubated ที่ 37 C ในบัฟเฟอร์การวิเคราะห์ประกอบด้วย HEPES, 50 มม.20 มม.ตรี 5 mM KCl, MgCl2 มม. 1, CaCl2 1 mM และ 137 มม.NaCl ที่ pH 7.4 Assayed กิจกรรมขนส่ง SGLT2 และ SGLT1หลังจาก h 2 ปฏิกิริยาเวลา 0.3 หรือ 0.5 mM ได้-methyl-D-glucopyranoside(AMG SigmaeAldrich, St. Louis, MO) หน้า[14 C] AMG (PerkinElmer, Waltham, MA) นับตัวของสารกัมมันตรังสีในการเซลล์ที่ถูกกำหนดโดยใช้ตัวนับ scintillation เหลว (PerkinElmer)ความเข้มข้นของโปรตีนถูกวัดโดยใช้การ CoomassiePlusชุดทดสอบโปรตีน (เพียร์ซ ร็อคฟอร์ด IL)2.2.2. DPP4 ยับยั้งการทดสอบลิปกลอสไขกิจกรรมกับมนุษย์ DPP4 ถูกวัดโดยใช้แบบfluorogenic DPP4 Assay Kit (ซื้อ BPS, San Diego, CA) ทดสอบแก้ปัญหาที่ซับซ้อน DPP พื้นผิว และ DPP4 recombinant มนุษย์ถูกผสมเริ่มปฏิกิริยาเอนไซม์ หลังจากปฏิกิริยา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง มีวัดความเข้ม fluorescenceใช้อ่าน microplate (อุปกรณ์โมเลกุล Sunnyvale, CA)ลิปกลอสไขกิจกรรมกับหนู DPP4 ถูกวัดโดยใช้เซรั่มที่รวบรวมจากหนู SpragueeDawley (SD) ชายอายุ 7 สัปดาห์(แม่น้ำชาร์ลส์ญี่ปุ่น โยโกฮามะ ญี่ปุ่น) เซรั่มหนูและ Glycyl Lproline4-methylcoumaryl-7-amide (MCA) ถูกผสม ด้วย PBSประกอบด้วย 0.003% Brij-35 เริ่มปฏิกิริยาเอนไซม์ เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย (18) มีความเข้ม fluorescence ของ MCAวัดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate หลังจากบ่ม 1 h ที่ 37 เซลเซียส2.3 ศึกษาในสัตว์ทดลอง2.3.1. สัตว์และทดสอบผสมดูแลขั้นตอนการทดลองสัตว์ทั้งหมดได้รับการอนุมัติโดยการสถาบันดูแลสัตว์และกรรมการใช้ของ Tanabe มิตซูบิชิบริษัทฟาร์มาหรือ บริษัท Medience LSI (โตเกียว ญี่ปุ่น)และพบการทดลองสัตว์วิจัยสมาคมญี่ปุ่นมาตรฐาน กำหนดแนวทางในสัตว์ทดลอง(1987) หนูชาย ZDF-Leprfa/CrlCrlj ซื้อจากชาร์ลส์เวอร์ญี่ปุ่น ช่วงการ acclimatization 6 สัปดาห์ สัตว์ห้องพักพร้อมวงจรไฟ/มืด 12 h และควบคุมอุณหภูมิและความชื้น หนูได้ ad libitum น้ำและอาหารทางการค้ามาตรฐาน สารทดสอบใน gavage ปากถูกเตรียมใน methylcellulose hydroxypropyl 0.5%2.3.2. OGTT ในหนู ZDFเนื่องจากหนู ZDF หญิงแสดง hyperglycemia แม้จะไม่ค่อยโรคอ้วนและอินซูลินต้านทานเทียบเท่ากับเพศชาย (20,23), เรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการศึกษาเพื่อสำรวจศักยภาพเบาหวานของการยับยั้งการเกิดขึ้นพร้อมกันของ SGLT2 และ DPP4 ผลรวมของ teneligliptin และ canagliflozin บนแพ้น้ำตาลกลูโคสในช่องปากการทดสอบความทนทานต่อกลูโคส(OGTT) ถูกตรวจสอบในรอบ 13 สัปดาห์เก่าZucker เบาหวานไขมัน (ZDF ) หนู. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 รีเอเจนต์และสารเคมีTeneligliptin (98.8% บริสุทธิ์) และ canagliflozin (> ความบริสุทธิ์ 99.95%) ถูกสังเคราะห์ที่มิตซูบิชิทานาเบะฟาร์คอร์ปอเรชั่น (Todashi, ไซตามะ, ญี่ปุ่น). 2.2 การตรวจเซลล์ตาม2.2.1 SGLTs ทดสอบการยับยั้งพลาสมิดที่มีการแสดงออกของมนุษย์SGLT1 (hSGLT1) มนุษย์SGLT2 (hSGLT2) SGLT1 หนู (rSGLT1) และหนู SGLT2 (rSGLT2) ถูกtransfected เสถียรเข้าไปในรังไข่หนูแฮมสเตอร์จีน (CHO) เซลล์ EK1 เซลล์เมล็ดลงในแผ่น 24 หลุมที่มีความหนาแน่นของ 4 หรือไม่? 105 เซลล์ / ดีในแฮมกลางF-12 ที่มีซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ 10% และได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียสในบัฟเฟอร์ทดสอบมี 50 มิลลิ HEPES, 20 มิลลิ Tris ฐาน 5 มิลลิ KCl 1 มิลลิ MgCl2 1 มิลลิ CaCl2 และ 137 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ที่pH 7.4 SGLT1 และกิจกรรมขนส่ง SGLT2 ถูก assayed หลังจาก 2 ชั่วโมงเวลาปฏิกิริยากับ 0.3 หรือ 0.5 มม-methyl-D-glucopyranoside (AMG; SigmaeAldrich, เซนต์หลุยส์) ในการปรากฏตัวของ[14C] AMG (PerkinElmer, เคมบริดจ์ ) นับกัมมันตรังสีในเซลล์ได้รับการพิจารณาโดยใช้ของเหลวประกายเคาน์เตอร์ (PerkinElmer). ความเข้มข้นของโปรตีนวัดโดยใช้ CoomassiePlus โปรตีน Assay Kit (เพียร์ซ, ฟอร์ด, IL). 2.2.2 DPP4 ทดสอบการยับยั้งกิจกรรมยับยั้งDPP4 มนุษย์ถูกวัดโดยใช้DPP4 แจง Assay Kit (BPS ชีววิทยาศาสตร์, ซานดิเอโก) การทดสอบวิธีการแก้ปัญหาสารตั้งต้น DPP และ recombinant มนุษย์ DPP4 ถูกผสมเพื่อเริ่มต้นปฏิกิริยาเอนไซม์ หลังจากปฏิกิริยา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องความเข้มแสงที่ถูกวัดโดยใช้เครื่องอ่านmicroplate (อุปกรณ์โมเลกุลซันนีเวล, แคลิฟอร์เนีย). กิจกรรมยับยั้ง DPP4 หนูถูกวัดโดยใช้ซีรั่มที่เก็บรวบรวมจาก7 สัปดาห์ชายอายุ SpragueeDawley (SD) หนู( ชาร์ลส์ริเวอร์ญี่ปุ่นโยโกฮามาญี่ปุ่น) ซีรั่มหนูและ Glycyl-Lproline 4 methylcoumaryl-7-เอไมด์ (เอ็ม) ได้รับการผสมกับพีบีเอสที่มี0.003% Brij-35 ที่จะเริ่มต้นปฏิกิริยาเอนไซม์ที่เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย(18) ความเข้มแสงของเอ็มได้รับการวัดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate หลังจากฟักตัว 1 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส 2.3 ในการศึกษาร่างกาย2.3.1 สัตว์และการทดสอบการบริหารจัดการสารทั้งหมดสัตว์ขั้นตอนการทดลองได้รับการอนุมัติจากการดูแลสัตว์สถาบันและการใช้คณะกรรมการของมิตซูบิชิทานาเบะฟาCorporation หรือ LSI มีเดียคอร์ปอเรชั่น (ประเทศญี่ปุ่น) และได้พบกับสัตว์ทดลองญี่ปุ่นสมาคมวิจัยมาตรฐานตามที่กำหนดไว้ในแนวทางการสัตว์การทดลอง(1987) ชาย ZDF-Leprfa / หนู CrlCrlj ที่ซื้อมาจากชาร์ลส์ริเวอร์ญี่ปุ่น ในช่วงระยะเวลาที่เคยชินกับสภาพของ 6 สัปดาห์สัตว์ที่ถูกเก็บด้วยแสง12 ชั่วโมง / รอบที่มืดและมีการควบคุมอุณหภูมิและความชื้น หนูมีให้กินอย่างเต็มที่โฆษณาน้ำและอาหารที่มีมาตรฐานทางการค้า สารทดสอบติดชื้อนานในช่องปากได้จัดทำขึ้น 0.5% ไฮดรอกซี. 2.3.2 OGTT ในหนู ZDF เพราะหญิงหนู ZDF ไม่ค่อยแสดงน้ำตาลในเลือดสูงแม้จะมีโรคอ้วนและภาวะดื้อต่ออินซูลินเปรียบได้กับชาย(20,23) เรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการศึกษาครั้งนี้ เพื่อศึกษาศักยภาพของการยับยั้งการเกิดของ sglt2 กว่า
dpp4 และผลรวมของ
teneligliptin canagliflozin กลูโคสและเกิดในช่องปากกลูโคสทดสอบความอดทน
( วิธี ) ถูกตรวจสอบใน 13 สัปดาห์เก่า
ซัคเกอร์เบาหวานไขมัน ( ZDF ) หนู .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมีและสารเคมี
teneligliptin ( ความบริสุทธิ์ 98.8 % ) และ canagliflozin ( > 9995% ความบริสุทธิ์ )
สังเคราะห์ที่มิตซูบิชิ บริษัท ฟาร์มา จำกัด ( todashi
, ไซตามะ , ญี่ปุ่น ) .
2.2 . เซลล์จากเลือด
2.2.1 . sglts การยับยั้งการแสดงออก (
) ที่มี sglt1 มนุษย์ ( hsglt1 ) sglt2 มนุษย์
( hsglt2 ) หนู sglt1 ( rsglt1 ) , และหนู sglt2 ( rsglt2 )
transfected อย่างถาวรในจีนหนูแฮมสเตอร์รังไข่ ( โช ) ek1 เซลล์ เซลล์
มีเมล็ดเป็น 24 ดีจานที่ความหนาแน่นของ 4
105 เซลล์ / ดี
ของแฮม f-12 ขนาดกลางที่มี 10% เซรั่ม ) ทารกในครรภ์และ
บ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ในการใช้บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 50 มิลฮีเปส
ฐานโดย 20 มม. , KCl 5 มิลลิเมตร ชุด 1 มิลลิเมตร ผลิตและ 137 1 มิลลิเมตร อืม
NaCl ที่พีเอช 7.4 . และกิจกรรม sglt1 sglt2 ขนส่งถูก assayed
หลังจาก 2 ชั่วโมงของเวลาปฏิกิริยากับ 0.3 หรือ 0.5 มม. a-methyl-d-glucopyranoside
( AMG ; sigmaealdrich เซนต์หลุยส์ โม ) ในการแสดงตนของ
[ ]
14c AMG ( Perkinelmer Waltham , MA ) กัมมันตรังสีนับใน
เซลล์มีการพิจารณาของเหลวประกายนับ ( Perkinelmer ) .
ความเข้มข้นโปรตีนถูกวัดโดยใช้ coomassieplus
โปรตีนต่อชุด ( เพียร์ซ , Rockford , IL ) .
2.2.2 . dpp4 ยับยั้งวิธียับยั้งกิจกรรมต่อต้าน dpp4 มนุษย์

วัดโดยใช้fluorogenic dpp4 ต่อชุด ( TM BIOSCIENCE , San Diego , CA ) ทดสอบ
ผสมสารละลาย DPP พื้นผิวและ
dpp4 recombinant มนุษย์ถูกผสมเริ่มต้นเอนไซม์ปฏิกิริยา หลังจาก 10 นาที ปฏิกิริยา
ที่อุณหภูมิห้อง , เรืองแสงเข้มวัด
ใช้อ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อุปกรณ์โมเลกุล , Sunnyvale , CA ) .
กิจกรรมยับยั้งกับหนู dpp4
วัดโดยใช้เซรั่มที่รวบรวมจาก 7-week-old spragueedawley ชาย ( SD ) หนู
( แม่น้ำชาร์ลส์ญี่ปุ่น โยโกฮาม่า ประเทศญี่ปุ่น ) เซรั่ม หนู และ glycyl lproline
4-methylcoumaryl-7-amide ( MCA ) ผสมกับ PBS
ที่มี 0.003 % brij-35 เพื่อเริ่มต้นของปฏิกิริยาที่ก่อนหน้านี้
อธิบาย ( 18 ) ความเข้มของการเรืองแสง MCA คือ
วัดใช้เครื่องอ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยเป็นหลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส 1-h
2.3 การศึกษาในสัตว์
2.3.1 . สัตว์และการทดสอบสารการบริหาร
ทั้งหมดสัตว์ทดลองวิธีการได้รับการอนุมัติโดย
สัตว์สถาบันและคณะกรรมการใช้มิตซูบิชิ ทานาเบะ
บริษัทฟาร์มา medience หรือ LSI Corporation ( โตเกียว , ญี่ปุ่น )

และได้พบกับมาตรฐานสมาคมวิจัยสัตว์ทดลองญี่ปุ่น ตามที่กำหนดไว้ในแนวทาง
สัตว์ทดลอง ( 1987 )ชาย ZDF leprfa / crlcrlj หนูซื้อมาจากชาร์ลส์
น้ำญี่ปุ่น ในระหว่างการระยะเวลา 6 สัปดาห์ สัตว์
ถูกกับ 12-h แสง / มืดและวงจรควบคุม
อุณหภูมิและความชื้น หนูมี
อย่างเต็มที่และน้ำเชิงพาณิชย์มาตรฐานอาหาร ทดสอบ (
gavage ช่องปากเตรียม 0.5% โพรพิลเมธิลเซลลูโลส .
2.3.2 . วิธีใน ZDF หนู
เพราะหนู ZDF หญิงไม่ค่อยจัดแสดง hyperglycemia แม้
โรคอ้วนและความต้านทานต่ออินซูลินเทียบเท่ากับเพศชาย ( 20,23 เรา
)