- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
MATERIALS AND METHODSMaterials. Lip
MATERIALS AND METHODS
Materials. Lipopolysaccharide (LPS), 20,70-dichlorofluorescin diacetate
(DCFH-DA), MTT dye [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl
tetrazolium bromide], sulfanilamide and anti-β-actin antibody were purchased
from the Sigma Chemical Co. (St. Louis,MO).Dimethyl sulfoxide
(DMSO) was purchased from the Merck Co. (Darmstadt, Germany).
Dulbecco’smodified Eagle’smedium(DMEM), fetal bovine serum(FBS),
L-glutamine and the antibiotic mixture (penicillin-streptomycin) were
purchased fromthe Invitrogen Co. (Carlsbad,CA).Anti-COX-2 and antiiNOS
antibodies were purchased from ABcam (Cambridge, MA). Antirabbit
and anti-mouse secondary horseradish peroxidase conjugated
antibodies were purchased from Bethyl Laboratories (Montgomery,
TX). Protein molecular mass markers were obtained from Pharmacia
Biotech (Saclay, France). Polyvinylidene fluoride (PVDF) membranes for
Western blotting were obtained fromMillipore (Bedford, MA). All other
chemicals were reagent grade.
Sample Preparation. A 20 g dry powder of O. aristatus was extracted
with methanol, ethanol or water (200 mL) on a rotary shaker at room
temperature for 24 h. The methanol, ethanol and water extracts from
O. aristatus were filtered through Whatman No. 1 filter paper, dried by a
vacuum-evaporator and stored at-20 Cuntil use. Themethanol, ethanol
and water extracts from O. aristatus were named MEOA (methanol
extract of O. aristatus), EEOA (ethanol extract of O. aristatus) and
WEOA (water extract of O. aristatus).
Determination of Total Phenolic Content. The concentration of
total phenolic was measured according to the method described by
Taga et al. (16) and calculated using gallic acid as a standard. A sample
(0.1 mL) was added to 2.0 mL of 0.02 g/mL Na2CO3. After 2 min, 50%
Folin-Ciocalteu reagent (100 μL) was added to the mixture and then left
for 30 min. Absorbance was measured at 750 nm using a spectrophotometer
(BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany). The total phenolics
were calculated as a gallic acid equivalent using the regression equation
between gallic acid standard and absorbance.
Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC) Assay. Determination
of TEAC was carried out using the method of Arnao et al. (17).
ABTS•þ
was generated by the interaction of ABTS (100 μmol/L), H2O2
(50 μmol/L), and peroxidase (4.4U/mL). Tomeasure antioxidant activity,
0.25 mL of serum was mixed well with an equal volume of ABTS, H2O2,
peroxidase, and 1.5mL of deionized water. The absorbance was measured
at 734 nmafter interactingwith sample solution for 10 min.The decrease in
absorption at 734 nm after the addition of the reactant was used to
calculate the TEAC value.A dose-response curve was plotted for Trolox,
and antioxidant ability was expressed as the TEAC. The higher the TEAC
value of a sample, the stronger the antioxidant activity.
Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) Assay. The
automated ORAC assay was carried out on a Fluostar Galaxy plate
reader (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) with a fluorescent
filter (excitation wavelength of 540 nm and emission wavelength of
565 nm). The procedure was based on a previous report by Cao et al. (18)
with slight modification. Briefly, in the final assay mixture, 16.7 nM
β-phycoerythrin (β-PE) was used as a target of free radical (or oxidant)
attack withAAPH (40mM) as a peroxyl radical generator. Trolox (1 μM)
was used as a standard and prepared fresh daily. The analyzer was
programmed to record the fluorescence of β-PE every 5 min after AAPH
was added. All fluorescence measurements were expressed relative to
the initial reading. A final ORACROO• value was calculated using
the differences of area under the β-PE decay curves between the blank
and the sample and expressed as μmol of Trolox equivalents per μmol
of sample.
Cellular Antioxidant Activity (CAA) Assay. The quantification of
cellular antioxidant activity was determined according to the method
of Wolfe and Liu (19) with a slight modification. HepG2 cells were plated
in a 96-wellmicrotiter plate at a density of 5104 cells/well.After 24 h, the
cells were treated with 100 μL of quercetin or extract plus 25 μMDCFHDAdissolved
in the treatmentmediumfor 1 h. The treatmentmediumwas
removed, and the cells were incubated with 100 μL of 1 mM AAPH.
Fluorescence was measured (excitation wavelength of 485 nm and emission
wavelength of 520 nm) with a FLUOstar galaxy fluorescence plate
reader (BMGLabtechnologies,Offenburg,Germany) at 37 Cevery5min
for 1 h. Final CAA values were calculated using the CAA unit at each
concentration of quercetin and extract and expressed as μmol of quercetin
equivalents per g of extract.
Materials. Lipopolysaccharide (LPS), 20,70-dichlorofluorescin diacetate
(DCFH-DA), MTT dye [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl
tetrazolium bromide], sulfanilamide and anti-β-actin antibody were purchased
from the Sigma Chemical Co. (St. Louis,MO).Dimethyl sulfoxide
(DMSO) was purchased from the Merck Co. (Darmstadt, Germany).
Dulbecco’smodified Eagle’smedium(DMEM), fetal bovine serum(FBS),
L-glutamine and the antibiotic mixture (penicillin-streptomycin) were
purchased fromthe Invitrogen Co. (Carlsbad,CA).Anti-COX-2 and antiiNOS
antibodies were purchased from ABcam (Cambridge, MA). Antirabbit
and anti-mouse secondary horseradish peroxidase conjugated
antibodies were purchased from Bethyl Laboratories (Montgomery,
TX). Protein molecular mass markers were obtained from Pharmacia
Biotech (Saclay, France). Polyvinylidene fluoride (PVDF) membranes for
Western blotting were obtained fromMillipore (Bedford, MA). All other
chemicals were reagent grade.
Sample Preparation. A 20 g dry powder of O. aristatus was extracted
with methanol, ethanol or water (200 mL) on a rotary shaker at room
temperature for 24 h. The methanol, ethanol and water extracts from
O. aristatus were filtered through Whatman No. 1 filter paper, dried by a
vacuum-evaporator and stored at-20 Cuntil use. Themethanol, ethanol
and water extracts from O. aristatus were named MEOA (methanol
extract of O. aristatus), EEOA (ethanol extract of O. aristatus) and
WEOA (water extract of O. aristatus).
Determination of Total Phenolic Content. The concentration of
total phenolic was measured according to the method described by
Taga et al. (16) and calculated using gallic acid as a standard. A sample
(0.1 mL) was added to 2.0 mL of 0.02 g/mL Na2CO3. After 2 min, 50%
Folin-Ciocalteu reagent (100 μL) was added to the mixture and then left
for 30 min. Absorbance was measured at 750 nm using a spectrophotometer
(BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany). The total phenolics
were calculated as a gallic acid equivalent using the regression equation
between gallic acid standard and absorbance.
Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC) Assay. Determination
of TEAC was carried out using the method of Arnao et al. (17).
ABTS•þ
was generated by the interaction of ABTS (100 μmol/L), H2O2
(50 μmol/L), and peroxidase (4.4U/mL). Tomeasure antioxidant activity,
0.25 mL of serum was mixed well with an equal volume of ABTS, H2O2,
peroxidase, and 1.5mL of deionized water. The absorbance was measured
at 734 nmafter interactingwith sample solution for 10 min.The decrease in
absorption at 734 nm after the addition of the reactant was used to
calculate the TEAC value.A dose-response curve was plotted for Trolox,
and antioxidant ability was expressed as the TEAC. The higher the TEAC
value of a sample, the stronger the antioxidant activity.
Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) Assay. The
automated ORAC assay was carried out on a Fluostar Galaxy plate
reader (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) with a fluorescent
filter (excitation wavelength of 540 nm and emission wavelength of
565 nm). The procedure was based on a previous report by Cao et al. (18)
with slight modification. Briefly, in the final assay mixture, 16.7 nM
β-phycoerythrin (β-PE) was used as a target of free radical (or oxidant)
attack withAAPH (40mM) as a peroxyl radical generator. Trolox (1 μM)
was used as a standard and prepared fresh daily. The analyzer was
programmed to record the fluorescence of β-PE every 5 min after AAPH
was added. All fluorescence measurements were expressed relative to
the initial reading. A final ORACROO• value was calculated using
the differences of area under the β-PE decay curves between the blank
and the sample and expressed as μmol of Trolox equivalents per μmol
of sample.
Cellular Antioxidant Activity (CAA) Assay. The quantification of
cellular antioxidant activity was determined according to the method
of Wolfe and Liu (19) with a slight modification. HepG2 cells were plated
in a 96-wellmicrotiter plate at a density of 5104 cells/well.After 24 h, the
cells were treated with 100 μL of quercetin or extract plus 25 μMDCFHDAdissolved
in the treatmentmediumfor 1 h. The treatmentmediumwas
removed, and the cells were incubated with 100 μL of 1 mM AAPH.
Fluorescence was measured (excitation wavelength of 485 nm and emission
wavelength of 520 nm) with a FLUOstar galaxy fluorescence plate
reader (BMGLabtechnologies,Offenburg,Germany) at 37 Cevery5min
for 1 h. Final CAA values were calculated using the CAA unit at each
concentration of quercetin and extract and expressed as μmol of quercetin
equivalents per g of extract.
0/5000
วัสดุและวิธีการวัสดุ Lipopolysaccharide (LPS), diacetate 20,70-dichlorofluorescin(DCFH-ดา), MTT ย้อม [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์], ซื้อซัลฟานิลาไมด์และแอนติบอดีต่อต้าน-β-แอกตินจากซิกเคมี บริษัท (เซนต์หลุยส์ MO) Dimethyl sulfoxide(DMSO) ที่ซื้อจาก บริษัทเมอร์ค (ดาร์มส เยอรมนี)Dulbecco'smodified Eagle'smedium(DMEM), serum(FBS) วัวและทารกในครรภ์L glutamine และผสมยาปฏิชีวนะ (ยาเพนนิซิลลิน-streptomycin)ซื้อจาก บริษัท Invitrogen (คาร์ลส CA) ป้องกัน-COX-2 และ antiiNOSแอนตี้ถูกซื้อจาก ABcam (เคมบริดจ์ MA) Antirabbitและ peroxidase horseradish รองเมาส์ป้องกันกลวงแอนตี้ถูกซื้อจากห้องปฏิบัติการ Bethyl (มอนท์โกTX) เครื่องหมายมวลโมเลกุลโปรตีนได้รับจาก Pharmaciaเทคโนโลยีชีวภาพ (Saclay ฝรั่งเศส) สารฟลูออไรด์ (PVDF) Polyvinylidene สำหรับBlotting วิธีเวสเทิร์นได้รับ fromMillipore (กลาสโกว์ MA) อื่น ๆ ทั้งหมดรีเอเจนต์เกรดเคมีได้การเตรียมสารตัวอย่าง 20 กรัมผงแห้งของ aristatus โอที่สกัดด้วยเมทานอล เอทานอล หรือน้ำ (200 มล) เชคเกอร์โรตารี่ที่พักอุณหภูมิใน 24 ชม สารสกัดเมทานอล เอทานอล และน้ำจากโอ aristatus ถูกกรองโดยใช้กระดาษกรอง Whatman No. 1 แห้งโดยการvacuum evaporator และเก็บไว้ที่-20 Cuntil ใช้ Themethanol เอทานอลและสารสกัดน้ำจาก aristatus โอชื่อว่า MEOA (เมทานอลสารสกัดของโอ aristatus), EEOA (เอทานอลสารสกัดของโอ aristatus) และWEOA (สารสกัดน้ำของโอ aristatus)กำหนดเนื้อหารวมฟีนอ ความเข้มข้นของรวมฟีนอถูกวัดตามวิธีการอธิบายไว้โดยAl. ไร Taga ร้อยเอ็ด (16) และคำนวณโดยใช้กรด gallic เป็นมาตรฐาน ตัวอย่าง(0.1 มล.) ถูกเพิ่ม 2.0 มล.ของ 0.02 g/mL Na2CO3 หลังจาก 2 นาที 50%เพิ่มส่วนผสมแล้ว ซ้าย Folin-Ciocalteu รีเอเจนต์ (100 μL)สำหรับ 30 นาที Absorbance ที่วัดที่ 750 nm โดยใช้เป็นเครื่องทดสอบกรดด่าง(BMG Labtechnologies, Offenburg เยอรมนี) Phenolics รวมมีคำนวณเป็นกรด gallic เท่ากับโดยใช้สมการถดถอยระหว่างกรด gallic มาตรฐานและ absorbanceTrolox เทียบเท่าสารต้านอนุมูลอิสระ (TEAC) กำลังทดสอบ ความมุ่งมั่นของ TEAC ถูกดำเนินการโดยใช้วิธีของ Arnao et al. (17)ABTS•þสร้าง โดยการโต้ตอบของรเรียน (100 μmol/L), H2O2(50 μmol/L), และ peroxidase (4.4U / mL) กิจกรรม Tomeasure สารต้านอนุมูลอิสระ0.25 mL ของเซรั่มที่ผสมกับปริมาตรการเท่ากันของรเรียน H2O2peroxidase และ 1.5mL น้ำ deionized มีวัด absorbance ที่ที่ 734 nmafter interactingwith ตัวอย่างการแก้ปัญหาสำหรับ 10 นาที ลดลงในดูดซึมที่ 734 nm หลังจากการเพิ่มของตัวทำปฏิกิริยาไม่ใช้คำนวณค่า TEAC เส้นโค้งตอบสนองยาถูกพล็อต Trolox สำหรับและความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระถูกแสดงในรูป TEAC TEAC สูงตัวอย่าง ค่ากิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งออกซิเจนรุนแรง Absorbance (ORAC) กำลังทดสอบ ที่อัตโนมัติ ORAC assay ถูกดำเนินการบนจานดาราจักร Fluostarอ่าน (BMG Labtechnologies, Offenburg เยอรมนี) กับแบบฟลูออเรสเซนต์ตัวกรอง (ในการกระตุ้นความยาวคลื่นของ 540 nm และปล่อยก๊าซความยาวคลื่นของ565 nm) ขั้นตอนเป็นไปตามรายงานก่อนหน้านี้โดย Cao et al. (18)มีแก้ไขเล็กน้อย ในการทดสอบขั้นสุดท้ายส่วนผสม 16.7 สั้น ๆ nMΒ-phycoerythrin (β-PE) ถูกใช้เป็นเป้าหมายของอนุมูลอิสระ (อนุมูลอิสระ)โจมตี withAAPH (40mm) เป็นเครื่องกำเนิดไฟฟ้ารุนแรง peroxyl Trolox (1 μM)ใช้เป็นแบบมาตรฐาน และจัดทำสดใหม่ทุกวัน เป็นตัววิเคราะห์โปรแกรมบันทึก fluorescence ของβ-PE ทุก 5 นาทีหลังจาก AAPHมีเพิ่ม วัด fluorescence ทั้งหมดถูกแสดงกับการอ่านเบื้องต้น มีคำนวณโดยใช้ค่า ORACROO• สุดท้ายความแตกต่างของพื้นที่ใต้เส้นโค้งผุβ-PE ระหว่างว่างเปล่าและตัวอย่าง และแสดงเป็น μmol ของเทียบเท่า Trolox ต่อ μmolของอย่างนี้วิเคราะห์กิจกรรม (ซีเอเอโฮ) ต้านอนุมูลอิสระในเซลล์ นับของกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระในเซลล์ได้กำหนดตามวิธีการWolfe และหลิว (19) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เซลล์ HepG2 ถูกชุบจาน 96 wellmicrotiter ที่ความหนาแน่นของเซลล์ดี 5 104 หลังจาก 24 ชมเซลล์ได้รับการรักษา ด้วย μL 100 ของ quercetin หรือสารสกัด 25 μMDCFHDAdissolvedใน treatmentmediumfor 1 h Treatmentmediumwasลบออก และเซลล์มี incubated กับ μL 100 มม. 1 AAPHมีวัด fluorescence (ในการกระตุ้นความยาวคลื่น 485 nm และปล่อยก๊าซความยาวคลื่นของ 520 nm) กับ FLUOstar กาแล็กซี่ fluorescence จานอ่าน (BMGLabtechnologies, Offenburg เยอรมนี) ที่ 37 Cevery5min1 h. ค่าซีเอเอโฮสุดท้ายถูกคำนวณโดยใช้หน่วยซีเอเอโฮแต่ละความเข้มข้นของสารสกัดและ quercetin และแสดงเป็น μmol ของ quercetinเทียบเท่าต่อกรัมของสารสกัด
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการ
วัสดุ lipopolysaccharide (LPS) diacetate 20,70-dichlorofluorescin
(DCFH-DA), สีย้อม MTT [3 (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5-diphenyl
โบรไมด์ tetrazolium] Sulfanilamide และ anti-β-โปรตีน แอนติบอดีที่ซื้อมา
จาก Sigma เคมี จำกัด (เซนต์หลุยส์) .Dimethyl sulfoxide
(DMSO) ซื้อมาจากเมอร์ค จำกัด (Darmstadt, Germany).
Dulbecco'smodified Eagle'smedium (DMEM), เซรั่มวัวของทารกในครรภ์ (FBS ),
L-glutamine และผสมยาปฏิชีวนะ (ยาปฏิชีวนะ-streptomycin) กำลัง
ซื้อ fromthe Invitrogen จำกัด (คาร์ลส, แคลิฟอร์เนีย) .Anti-COX-2 และ antiiNOS
แอนติบอดีที่ซื้อมาจาก Abcam (เคมบริดจ์, แมสซาชูเซต) Antirabbit
และป้องกันเมาส์ peroxidase มะรุมรองผัน
แอนติบอดีที่ซื้อมาจาก Bethyl ห้องปฏิบัติการ (กอเมอรี,
เท็กซัส) โปรตีนมวลโมเลกุลเครื่องหมายที่ได้รับจาก Pharmacia
ไบโอเทค (ซาเคลย์, ฝรั่งเศส) ฟลูออไร Polyvinylidene (PVDF) เยื่อสำหรับ
ซับตะวันตกที่ได้รับ fromMillipore (ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) อื่น ๆ ทั้งหมด
สารเคมีเป็นสารเกรด.
เตรียมสารตัวอย่าง 20 กรัมผงแห้งของ aristatus ทุมถูกสกัด
ด้วยเมทานอลเอทานอลหรือน้ำ (200 มิลลิลิตร) ในเครื่องปั่นหมุนที่ห้อง
อุณหภูมิ 24 ชั่วโมง เมทานอลเอทานอลและสารสกัดน้ำจาก
ทุม aristatus ถูกกรองผ่าน Whatman ฉบับที่ 1 กระดาษกรองแห้งโดย
สูญญากาศระเหยและเก็บไว้ที่-20 ใช้ Cuntil Themethanol เอทานอล
และสารสกัดน้ำจาก aristatus ทุมถูกตั้งชื่อ MEOA (เมทานอล
สารสกัดจาก aristatus ทุม) EEOA (สารสกัดเอทานอลของ aristatus ทุม) และ
WEOA (สารสกัดน้ำจาก aristatus ทุม).
การกำหนดเนื้อหารวมฟีโนลิก ความเข้มข้นของ
ฟีนอลรวมวัดตามวิธีการอธิบายโดย
Taga et al, (16) และการคำนวณโดยใช้ฝรั่งเศสกรดเป็นมาตรฐาน ตัวอย่าง
(0.1 มิลลิลิตร) ถูกบันทึกอยู่ใน 2.0 มิลลิลิตร 0.02 กรัม / มิลลิลิตร Na2CO3 หลังจากนั้น 2 นาที, 50%
น้ำยา Folin-Ciocalteu (100 ไมโครลิตร) ถูกบันทึกอยู่ในส่วนผสมแล้วทิ้งไว้
เป็นเวลา 30 นาที การดูดกลืนแสงวัดที่ 750 นาโนเมตรโดยใช้ spectrophotometer
(BMG Labtechnologies, Offenburg, เยอรมนี) ฟีนอลทั้งหมด
จะถูกคำนวณเป็นเทียบเท่าฝรั่งเศสกรดโดยใช้สมการถดถอย
ระหว่างมาตรฐานฝรั่งเศสกรดและการดูดกลืนแสง.
Trolox ความจุเทียบเท่าสารต้านอนุมูลอิสระ (TEAC) Assay ความมุ่งมั่น
ของ TEAC ได้รับการดำเนินการโดยใช้วิธีการ Arnao et al, (17).
ABTS •þ
ถูกสร้างขึ้นโดยการทำงานร่วมกันของ ABTS (100 ไมโครโมล / ลิตร), H2O2
(50 ไมโครโมล / ลิตร) และ peroxidase (4.4U / มิลลิลิตร) Tomeasure ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ,
0.25 มิลลิลิตรซีรั่มผสมกันได้ดีกับปริมาณที่เท่ากันของ ABTS, H2O2,
peroxidase และ 1.5ml น้ำปราศจากไอออน วัดการดูดกลืนแสง
ที่ 734 nmafter interactingwith สารละลายตัวอย่าง 10 min.The การลดลงของ
การดูดซึมที่ 734 นาโนเมตรหลังจากที่นอกเหนือจากสารตั้งต้นที่ใช้ในการ
คำนวณ TEAC value.A โค้งปริมาณการตอบสนองได้รับการวางแผนสำหรับ Trolox,
และความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระได้แสดงออก เป็น TEAC สูง TEAC
ค่าของตัวอย่างที่แข็งแกร่งสารต้านอนุมูลอิสระ.
Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) Assay
ทดสอบ ORAC อัตโนมัติได้ดำเนินการบนจาน Fluostar Galaxy
อ่าน (BMG Labtechnologies, Offenburg, เยอรมนี) กับเรืองแสง
กรอง (ความยาวคลื่นกระตุ้น 540 นาโนเมตรและปล่อยความยาวคลื่น
565 นาโนเมตร) ขั้นตอนที่อยู่บนพื้นฐานของรายงานก่อนหน้านี้โดยเฉา et al, (18)
ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ ในส่วนผสมการทดสอบสุดท้าย 16.7 นาโนเมตร
β-phycoerythrin (β-PE) ถูกนำมาใช้เป็นเป้าหมายของอนุมูลอิสระ (หรืออนุมูลอิสระ)
โจมตี withAAPH (40mm) เป็นเครื่องกำเนิดไฟฟ้าที่รุนแรง peroxyl Trolox (1 ไมครอน)
ถูกใช้เป็นมาตรฐานและจัดทำสดใหม่ทุกวัน วิเคราะห์ถูก
ตั้งโปรแกรมให้บันทึกการเรืองแสงของβ-PE ทุก 5 นาทีหลังจาก AAPH
ถูกเพิ่มเข้ามา ทุกวัดเรืองแสงได้รับการแสดงความสัมพันธ์กับ
การอ่านครั้งแรก สุดท้าย ORACROO •ค่าที่คำนวณโดยใช้
ความแตกต่างของพื้นที่ใต้เส้นโค้งการสลายตัวของβ-PE ระหว่างว่างเปล่า
และตัวอย่างและแสดงเป็นไมโครโมลเทียบเท่า Trolox ต่อไมโครโมล
ของกลุ่มตัวอย่าง.
มือถือฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ (CAA) Assay ปริมาณของ
สารต้านอนุมูลอิสระของเซลล์ที่ถูกกำหนดตามวิธีการ
ของวูล์ฟและหลิว (19) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เซลล์ HepG2 ถูกชุบ
ในแผ่น 96 wellmicrotiter ที่มีความหนาแน่น 5? 104 เซลล์ / well.After 24 ชั่วโมง,
เซลล์ได้รับการรักษาด้วย 100 ไมโครลิตรของ quercetin หรือสารสกัดจากบวก 25 μMDCFHDAdissolved
ใน treatmentmediumfor 1 ชั่วโมง treatmentmediumwas
ออกและเซลล์ถูกบ่มด้วย 100 ไมโครลิตร 1 มิลลิ AAPH.
วัดเรืองแสง (ความยาวคลื่นกระตุ้น 485 นาโนเมตรและการปล่อย
ความยาวคลื่น 520 นาโนเมตร) ที่มีแผ่นเรืองแสงกาแล็คซี่ FLUOstar
อ่าน (BMGLabtechnologies, Offenburg, เยอรมนี) ที่ 37? Cevery5min
เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ค่าซีเอรอบชิงชนะเลิศจะถูกคำนวณโดยใช้หน่วย CAA ในแต่ละ
ความเข้มข้นของสาร quercetin และสารสกัดจากและแสดงความเป็นไมโครโมลของ quercetin
เทียบเท่าต่อกรัมของสารสกัดจาก
วัสดุ lipopolysaccharide (LPS) diacetate 20,70-dichlorofluorescin
(DCFH-DA), สีย้อม MTT [3 (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5-diphenyl
โบรไมด์ tetrazolium] Sulfanilamide และ anti-β-โปรตีน แอนติบอดีที่ซื้อมา
จาก Sigma เคมี จำกัด (เซนต์หลุยส์) .Dimethyl sulfoxide
(DMSO) ซื้อมาจากเมอร์ค จำกัด (Darmstadt, Germany).
Dulbecco'smodified Eagle'smedium (DMEM), เซรั่มวัวของทารกในครรภ์ (FBS ),
L-glutamine และผสมยาปฏิชีวนะ (ยาปฏิชีวนะ-streptomycin) กำลัง
ซื้อ fromthe Invitrogen จำกัด (คาร์ลส, แคลิฟอร์เนีย) .Anti-COX-2 และ antiiNOS
แอนติบอดีที่ซื้อมาจาก Abcam (เคมบริดจ์, แมสซาชูเซต) Antirabbit
และป้องกันเมาส์ peroxidase มะรุมรองผัน
แอนติบอดีที่ซื้อมาจาก Bethyl ห้องปฏิบัติการ (กอเมอรี,
เท็กซัส) โปรตีนมวลโมเลกุลเครื่องหมายที่ได้รับจาก Pharmacia
ไบโอเทค (ซาเคลย์, ฝรั่งเศส) ฟลูออไร Polyvinylidene (PVDF) เยื่อสำหรับ
ซับตะวันตกที่ได้รับ fromMillipore (ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) อื่น ๆ ทั้งหมด
สารเคมีเป็นสารเกรด.
เตรียมสารตัวอย่าง 20 กรัมผงแห้งของ aristatus ทุมถูกสกัด
ด้วยเมทานอลเอทานอลหรือน้ำ (200 มิลลิลิตร) ในเครื่องปั่นหมุนที่ห้อง
อุณหภูมิ 24 ชั่วโมง เมทานอลเอทานอลและสารสกัดน้ำจาก
ทุม aristatus ถูกกรองผ่าน Whatman ฉบับที่ 1 กระดาษกรองแห้งโดย
สูญญากาศระเหยและเก็บไว้ที่-20 ใช้ Cuntil Themethanol เอทานอล
และสารสกัดน้ำจาก aristatus ทุมถูกตั้งชื่อ MEOA (เมทานอล
สารสกัดจาก aristatus ทุม) EEOA (สารสกัดเอทานอลของ aristatus ทุม) และ
WEOA (สารสกัดน้ำจาก aristatus ทุม).
การกำหนดเนื้อหารวมฟีโนลิก ความเข้มข้นของ
ฟีนอลรวมวัดตามวิธีการอธิบายโดย
Taga et al, (16) และการคำนวณโดยใช้ฝรั่งเศสกรดเป็นมาตรฐาน ตัวอย่าง
(0.1 มิลลิลิตร) ถูกบันทึกอยู่ใน 2.0 มิลลิลิตร 0.02 กรัม / มิลลิลิตร Na2CO3 หลังจากนั้น 2 นาที, 50%
น้ำยา Folin-Ciocalteu (100 ไมโครลิตร) ถูกบันทึกอยู่ในส่วนผสมแล้วทิ้งไว้
เป็นเวลา 30 นาที การดูดกลืนแสงวัดที่ 750 นาโนเมตรโดยใช้ spectrophotometer
(BMG Labtechnologies, Offenburg, เยอรมนี) ฟีนอลทั้งหมด
จะถูกคำนวณเป็นเทียบเท่าฝรั่งเศสกรดโดยใช้สมการถดถอย
ระหว่างมาตรฐานฝรั่งเศสกรดและการดูดกลืนแสง.
Trolox ความจุเทียบเท่าสารต้านอนุมูลอิสระ (TEAC) Assay ความมุ่งมั่น
ของ TEAC ได้รับการดำเนินการโดยใช้วิธีการ Arnao et al, (17).
ABTS •þ
ถูกสร้างขึ้นโดยการทำงานร่วมกันของ ABTS (100 ไมโครโมล / ลิตร), H2O2
(50 ไมโครโมล / ลิตร) และ peroxidase (4.4U / มิลลิลิตร) Tomeasure ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ,
0.25 มิลลิลิตรซีรั่มผสมกันได้ดีกับปริมาณที่เท่ากันของ ABTS, H2O2,
peroxidase และ 1.5ml น้ำปราศจากไอออน วัดการดูดกลืนแสง
ที่ 734 nmafter interactingwith สารละลายตัวอย่าง 10 min.The การลดลงของ
การดูดซึมที่ 734 นาโนเมตรหลังจากที่นอกเหนือจากสารตั้งต้นที่ใช้ในการ
คำนวณ TEAC value.A โค้งปริมาณการตอบสนองได้รับการวางแผนสำหรับ Trolox,
และความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระได้แสดงออก เป็น TEAC สูง TEAC
ค่าของตัวอย่างที่แข็งแกร่งสารต้านอนุมูลอิสระ.
Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) Assay
ทดสอบ ORAC อัตโนมัติได้ดำเนินการบนจาน Fluostar Galaxy
อ่าน (BMG Labtechnologies, Offenburg, เยอรมนี) กับเรืองแสง
กรอง (ความยาวคลื่นกระตุ้น 540 นาโนเมตรและปล่อยความยาวคลื่น
565 นาโนเมตร) ขั้นตอนที่อยู่บนพื้นฐานของรายงานก่อนหน้านี้โดยเฉา et al, (18)
ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ ในส่วนผสมการทดสอบสุดท้าย 16.7 นาโนเมตร
β-phycoerythrin (β-PE) ถูกนำมาใช้เป็นเป้าหมายของอนุมูลอิสระ (หรืออนุมูลอิสระ)
โจมตี withAAPH (40mm) เป็นเครื่องกำเนิดไฟฟ้าที่รุนแรง peroxyl Trolox (1 ไมครอน)
ถูกใช้เป็นมาตรฐานและจัดทำสดใหม่ทุกวัน วิเคราะห์ถูก
ตั้งโปรแกรมให้บันทึกการเรืองแสงของβ-PE ทุก 5 นาทีหลังจาก AAPH
ถูกเพิ่มเข้ามา ทุกวัดเรืองแสงได้รับการแสดงความสัมพันธ์กับ
การอ่านครั้งแรก สุดท้าย ORACROO •ค่าที่คำนวณโดยใช้
ความแตกต่างของพื้นที่ใต้เส้นโค้งการสลายตัวของβ-PE ระหว่างว่างเปล่า
และตัวอย่างและแสดงเป็นไมโครโมลเทียบเท่า Trolox ต่อไมโครโมล
ของกลุ่มตัวอย่าง.
มือถือฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ (CAA) Assay ปริมาณของ
สารต้านอนุมูลอิสระของเซลล์ที่ถูกกำหนดตามวิธีการ
ของวูล์ฟและหลิว (19) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เซลล์ HepG2 ถูกชุบ
ในแผ่น 96 wellmicrotiter ที่มีความหนาแน่น 5? 104 เซลล์ / well.After 24 ชั่วโมง,
เซลล์ได้รับการรักษาด้วย 100 ไมโครลิตรของ quercetin หรือสารสกัดจากบวก 25 μMDCFHDAdissolved
ใน treatmentmediumfor 1 ชั่วโมง treatmentmediumwas
ออกและเซลล์ถูกบ่มด้วย 100 ไมโครลิตร 1 มิลลิ AAPH.
วัดเรืองแสง (ความยาวคลื่นกระตุ้น 485 นาโนเมตรและการปล่อย
ความยาวคลื่น 520 นาโนเมตร) ที่มีแผ่นเรืองแสงกาแล็คซี่ FLUOstar
อ่าน (BMGLabtechnologies, Offenburg, เยอรมนี) ที่ 37? Cevery5min
เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ค่าซีเอรอบชิงชนะเลิศจะถูกคำนวณโดยใช้หน่วย CAA ในแต่ละ
ความเข้มข้นของสาร quercetin และสารสกัดจากและแสดงความเป็นไมโครโมลของ quercetin
เทียบเท่าต่อกรัมของสารสกัดจาก
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการ
วัสดุ สีดำเข้ม ( หล่อลื่น ) 20,70-dichlorofluorescin ได ซิเตท
( dcfh-da ) MTT ย้อม [ 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2,5-diphenyl
tetrazolium โบรไมด์ ] sulfanilamide และต่อต้าน - บีตา - actin ) ซื้อ
จาก Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO ) ไดเมทิลซัลฟอกไซด์
( DMSO ) ซื้อจากบริษัทเมอร์ค จำกัด ( ดาร์มชตัท เยอรมนี )
dulbecco'smodified eagle'smedium ( dmem )แม่วัวเลือด ( FBS )
L Glutamine และผสมยาปฏิชีวนะ ( ยา streptomycin )
ซื้อจาก Invitrogen Co . ( Carlsbad , CA ) anti-cox-2 และ antiinos
) ซื้อมาจาก ABCAM ( Cambridge , MA ) antirabbit
ป้องกันเมาส์รอง . เอนไซม์ conjugated
) ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการ bethyl ( Montgomery
TX )โปรตีนโมเลกุลเครื่องหมายที่ได้จากมวลชนที่มุ่งมั่น
BIOTECH ( saclay , ฝรั่งเศส ) ีนฟลูออไรด์ ( PVDF ) เมมเบรนสำหรับ
Western blotting พบว่า frommillipore ( เบดฟอร์ด มา ) สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดเป็นเกรด 3
.
ตัวอย่างการเตรียม 20 กรัมผงแห้งของ O .
aristatus ถูกสกัดด้วยเมทานอล , เอทานอลและน้ำ ( 200 มล. ) ในเครื่องปั่นหมุนที่อุณหภูมิห้อง
เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเมทานอล เอทานอล และ สารสกัดน้ำจาก
O aristatus ถูกกรองผ่านกระดาษกรอง เบอร์ 1 whatman แห้งด้วยสุญญากาศระเหยและเก็บ at-20
cuntil ใช้ . themethanol เอทานอล และ สารสกัดน้ำจาก
O aristatus ชื่อ meoa ( สารสกัดเมทานอล
O aristatus หนาเตอะเลือก ( ) ของสารทั้ง aristatus O )
weoa ( น้ำสกัดจาก aristatus
O )การวิเคราะห์ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด
วัดตามวิธีการที่อธิบายโดย
ทากะ et al . ( 16 ) และคำนวณการใช้เพิ่มขึ้นเป็นมาตรฐาน ตัวอย่าง
( 0.1 ml ) คือเพิ่ม 2.0 มิลลิลิตร 0.02 กรัม / มิลลิลิตร Na2CO3 . หลังจาก 2 นาที 50 %
folin ciocalteu Reagent ( 100 μ L ) ถูกเพิ่มลงในส่วนผสมแล้วทิ้ง
เป็นเวลา 30 นาทีวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 750 นาโนเมตรโดยใช้ Spectrophotometer
( BMG labtechnologies Offenburg , Germany )
ผลรวมคำนวณเป็นเพิ่มขึ้นเทียบเท่าการใช้สมการถดถอยระหว่างมาตรฐานกรดแกลลิคและค่า
.
สาร สารต้านอนุมูลอิสระเทียบเท่าความจุ ( Teac ) ตามลำดับ การหา
ของ Teac ได้ดําเนินการโดยใช้วิธี arnao et al . ( 17 )
•þ Abbrถูกสร้างขึ้นจากปฏิกิริยาของ Abbr ( 100 μ mol / L ) , H2O2
( 50 μ mol / L ) และเปอร์ออกซิเดส ( 4.4u / ml ) สารต้านอนุมูลอิสระ วัด , 0.25 ml เซรั่ม
ผสมกับปริมาณเท่ากันของ Abbr H2O2
, , peroxidase และ 1.5ml คล้ายเนื้อเยื่อประสานของน้ำ นวัด
ที่ 734 nmafter interactingwith ตัวอย่างโซลูชัน 10 นาทีลด
การดูดซึมที่ 734 nm หลังจากการเพิ่มของน้ำที่ใช้คำนวณค่า
Teac . ความคิดเห็นเส้นโค้งถูกวางแผนสำหรับสารต้าน
และความสามารถแสดงออกเป็น Teac . สูงกว่า Teac
มูลค่าอย่างแข็งแกร่งต้านอนุมูลอิสระ ความจุ
ออกซิเจน Radical Absorbance ( ORAC ) ตามลำดับ
อัตโนมัติ ( ORAC ทำการบนจาน
fluostar กาแล็กซี่อ่าน ( BMG labtechnologies Offenburg , Germany , ) กับกรองเรืองแสง
( ความยาวคลื่น 540 นาโนเมตร และกระตุ้นการปล่อยความยาวคลื่น
810 nm ) ขั้นตอนตามรายงานก่อนหน้านี้โดยโจโฉ et al . ( 18 )
กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ , ในการผสม การทดสอบขั้นสุดท้าย 16.7 nm
บีตา - ไฟโคอิริทริท ( บีตา - PE ) ถูกใช้เป็นเป้าของอนุมูลอิสระ ( อนุมูลอิสระ )
withaaph โจมตี ( 40 ) เป็น peroxyl หัวรุนแรงเครื่องกำเนิดไฟฟ้า สาร ( 1 μ m )
ถูกใช้เป็นมาตรฐาน และเตรียมสดใหม่ทุกวัน วิเคราะห์เป็นโปรแกรมที่จะบันทึก
เรืองแสงของบีตา - PE ทุก 5 นาทีหลังจากที่ aaph
ถูกเพิ่มเข้ามา การวัดการเรืองแสงทั้งหมดมีความสัมพันธ์กับ
การอ่านเบื้องต้น สุดท้าย oracroo บวกค่าถูกคำนวณโดยใช้
ความแตกต่างของพื้นที่ใต้เส้นโค้งบีตา - ผุ PE ระหว่างว่าง
และตัวอย่างและแสดงเป็นμโมลของสารที่มีต่อ
μโมลของกลุ่มตัวอย่าง ต้านอนุมูลอิสระ CELLULAR ( caa ) ตามลำดับ มีปริมาณของสารต้านอนุมูลอิสระโทรศัพท์มือถือ
ถูกกำหนดตามวิธีการ
ของวูล์ฟและหลิว ( 19 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เซลล์มะเร็งตับ ( ชุบ
ในจาน 96 wellmicrotiter ในอัตราความหนาแน่น 5 104 เซลล์ / well.after 24 h ,
เซลล์จะถูก 100 μลิตรเคอร์หรือแยกบวก 25 μ mdcfhdadissolved
ใน treatmentmediumfor 1 ชั่วโมง treatmentmediumwas
ลบออก และเซลล์ก็แยกμ 100 ลิตร aaph
เรือง วัด 1 มิลลิเมตร ( และความยาวคลื่นของ 485 nm และการปล่อย
ความยาวคลื่น 520 nm ) กับ fluostar Galaxy เรืองจาน
อ่าน ( bmglabtechnologies Offenburg , Germany , ) ที่อุณหภูมิ 37 cevery5min
1 h . สุดท้าย caa คำนวณโดยใช้ค่าในแต่ละหน่วย caa
ความเข้มข้นของเคอร์และสารสกัดและแสดงเป็นμโมลของเคอร์
เทียบเท่าต่อกรัมสารสกัด
วัสดุ สีดำเข้ม ( หล่อลื่น ) 20,70-dichlorofluorescin ได ซิเตท
( dcfh-da ) MTT ย้อม [ 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2,5-diphenyl
tetrazolium โบรไมด์ ] sulfanilamide และต่อต้าน - บีตา - actin ) ซื้อ
จาก Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO ) ไดเมทิลซัลฟอกไซด์
( DMSO ) ซื้อจากบริษัทเมอร์ค จำกัด ( ดาร์มชตัท เยอรมนี )
dulbecco'smodified eagle'smedium ( dmem )แม่วัวเลือด ( FBS )
L Glutamine และผสมยาปฏิชีวนะ ( ยา streptomycin )
ซื้อจาก Invitrogen Co . ( Carlsbad , CA ) anti-cox-2 และ antiinos
) ซื้อมาจาก ABCAM ( Cambridge , MA ) antirabbit
ป้องกันเมาส์รอง . เอนไซม์ conjugated
) ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการ bethyl ( Montgomery
TX )โปรตีนโมเลกุลเครื่องหมายที่ได้จากมวลชนที่มุ่งมั่น
BIOTECH ( saclay , ฝรั่งเศส ) ีนฟลูออไรด์ ( PVDF ) เมมเบรนสำหรับ
Western blotting พบว่า frommillipore ( เบดฟอร์ด มา ) สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดเป็นเกรด 3
.
ตัวอย่างการเตรียม 20 กรัมผงแห้งของ O .
aristatus ถูกสกัดด้วยเมทานอล , เอทานอลและน้ำ ( 200 มล. ) ในเครื่องปั่นหมุนที่อุณหภูมิห้อง
เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเมทานอล เอทานอล และ สารสกัดน้ำจาก
O aristatus ถูกกรองผ่านกระดาษกรอง เบอร์ 1 whatman แห้งด้วยสุญญากาศระเหยและเก็บ at-20
cuntil ใช้ . themethanol เอทานอล และ สารสกัดน้ำจาก
O aristatus ชื่อ meoa ( สารสกัดเมทานอล
O aristatus หนาเตอะเลือก ( ) ของสารทั้ง aristatus O )
weoa ( น้ำสกัดจาก aristatus
O )การวิเคราะห์ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด
วัดตามวิธีการที่อธิบายโดย
ทากะ et al . ( 16 ) และคำนวณการใช้เพิ่มขึ้นเป็นมาตรฐาน ตัวอย่าง
( 0.1 ml ) คือเพิ่ม 2.0 มิลลิลิตร 0.02 กรัม / มิลลิลิตร Na2CO3 . หลังจาก 2 นาที 50 %
folin ciocalteu Reagent ( 100 μ L ) ถูกเพิ่มลงในส่วนผสมแล้วทิ้ง
เป็นเวลา 30 นาทีวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 750 นาโนเมตรโดยใช้ Spectrophotometer
( BMG labtechnologies Offenburg , Germany )
ผลรวมคำนวณเป็นเพิ่มขึ้นเทียบเท่าการใช้สมการถดถอยระหว่างมาตรฐานกรดแกลลิคและค่า
.
สาร สารต้านอนุมูลอิสระเทียบเท่าความจุ ( Teac ) ตามลำดับ การหา
ของ Teac ได้ดําเนินการโดยใช้วิธี arnao et al . ( 17 )
•þ Abbrถูกสร้างขึ้นจากปฏิกิริยาของ Abbr ( 100 μ mol / L ) , H2O2
( 50 μ mol / L ) และเปอร์ออกซิเดส ( 4.4u / ml ) สารต้านอนุมูลอิสระ วัด , 0.25 ml เซรั่ม
ผสมกับปริมาณเท่ากันของ Abbr H2O2
, , peroxidase และ 1.5ml คล้ายเนื้อเยื่อประสานของน้ำ นวัด
ที่ 734 nmafter interactingwith ตัวอย่างโซลูชัน 10 นาทีลด
การดูดซึมที่ 734 nm หลังจากการเพิ่มของน้ำที่ใช้คำนวณค่า
Teac . ความคิดเห็นเส้นโค้งถูกวางแผนสำหรับสารต้าน
และความสามารถแสดงออกเป็น Teac . สูงกว่า Teac
มูลค่าอย่างแข็งแกร่งต้านอนุมูลอิสระ ความจุ
ออกซิเจน Radical Absorbance ( ORAC ) ตามลำดับ
อัตโนมัติ ( ORAC ทำการบนจาน
fluostar กาแล็กซี่อ่าน ( BMG labtechnologies Offenburg , Germany , ) กับกรองเรืองแสง
( ความยาวคลื่น 540 นาโนเมตร และกระตุ้นการปล่อยความยาวคลื่น
810 nm ) ขั้นตอนตามรายงานก่อนหน้านี้โดยโจโฉ et al . ( 18 )
กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ , ในการผสม การทดสอบขั้นสุดท้าย 16.7 nm
บีตา - ไฟโคอิริทริท ( บีตา - PE ) ถูกใช้เป็นเป้าของอนุมูลอิสระ ( อนุมูลอิสระ )
withaaph โจมตี ( 40 ) เป็น peroxyl หัวรุนแรงเครื่องกำเนิดไฟฟ้า สาร ( 1 μ m )
ถูกใช้เป็นมาตรฐาน และเตรียมสดใหม่ทุกวัน วิเคราะห์เป็นโปรแกรมที่จะบันทึก
เรืองแสงของบีตา - PE ทุก 5 นาทีหลังจากที่ aaph
ถูกเพิ่มเข้ามา การวัดการเรืองแสงทั้งหมดมีความสัมพันธ์กับ
การอ่านเบื้องต้น สุดท้าย oracroo บวกค่าถูกคำนวณโดยใช้
ความแตกต่างของพื้นที่ใต้เส้นโค้งบีตา - ผุ PE ระหว่างว่าง
และตัวอย่างและแสดงเป็นμโมลของสารที่มีต่อ
μโมลของกลุ่มตัวอย่าง ต้านอนุมูลอิสระ CELLULAR ( caa ) ตามลำดับ มีปริมาณของสารต้านอนุมูลอิสระโทรศัพท์มือถือ
ถูกกำหนดตามวิธีการ
ของวูล์ฟและหลิว ( 19 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เซลล์มะเร็งตับ ( ชุบ
ในจาน 96 wellmicrotiter ในอัตราความหนาแน่น 5 104 เซลล์ / well.after 24 h ,
เซลล์จะถูก 100 μลิตรเคอร์หรือแยกบวก 25 μ mdcfhdadissolved
ใน treatmentmediumfor 1 ชั่วโมง treatmentmediumwas
ลบออก และเซลล์ก็แยกμ 100 ลิตร aaph
เรือง วัด 1 มิลลิเมตร ( และความยาวคลื่นของ 485 nm และการปล่อย
ความยาวคลื่น 520 nm ) กับ fluostar Galaxy เรืองจาน
อ่าน ( bmglabtechnologies Offenburg , Germany , ) ที่อุณหภูมิ 37 cevery5min
1 h . สุดท้าย caa คำนวณโดยใช้ค่าในแต่ละหน่วย caa
ความเข้มข้นของเคอร์และสารสกัดและแสดงเป็นμโมลของเคอร์
เทียบเท่าต่อกรัมสารสกัด
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ผลลัพธ์ (ภาษาอังกฤษ) 1:Why you make a pa
- เรียงความเรื่องอาชีพของฉัน ครูครูคืออาชี
- อยู่ที่ชั้นวางของ
- เพราะวันนี้วันสุดท้าย
- วันเกิดคุณวันไหน
- So what dies your mother do for a living
- เรียงความเรื่องอาชีพของฉัน ครูครูคืออาชี
- I do not know. Today I started to feel t
- เป็นเวลาของครอบครัวเวลาหยุดครอบครัวของฉั
- But probably because of this tribe
- เรียงความเรื่องอาชีพของฉัน ครูครูคืออาชี
- advertisement
- ทุกอย่างจบ
- Tourney TZ50 Bike Bicycle Rear Derailleu
- What's the wea the going to be
- I got eligibility geocentric that's why.
- A31 Promotion Black Rack Tool Bike Bicyc
- I am not so serious about it, I just wan
- เวลาที่
- 11-12 ถนนอู่ทอง หมู่ 4 ต.ประตูชัย, ริมแม
- Did you get off on the phone with me thi
- เป็นเวลาของครอบครัวเวลาหยุดครอบครัวของฉั
- Cut the heart
- Can't hear you
