- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
40 °C. After the second centrifugat
40 °C. After the second centrifugation, a transparent anhydrous lipid
extract was obtained in the upper layer of the centrifuged tube. Two
other fractions were obtained, these were a thin cream layer and a
lower layer with water and water soluble compounds. The amount
of aqueous lipid extracts (ALE) was calculated. The lipid extracts
were stored under nitrogen atmosphere at −20 °C for further
analysis.
2.1.4. Feed lipid extracted with Soxhlet extraction
Insect feed was freeze-dried until arriving at stable weight
(GRI Vriesdroger, GR Instruments B.V., Wijk bij Duurstede, the
Netherlands). Afterwards, lipidswere extracted using a Soxhlet apparatus
for 6 hours (Biosolve, CAS nr. 110-54-3) using petroleum ether
(CAS nr. 0101316465) as a solvent. Afterwards, petroleum ether was
removed using a rotary evaporator (R420, Buchi, Switzerland) at
350 mbar in a water bath at 40 °C, and further increased up to 60 °C
until no solventwas seen. The lipid extractswere stored under nitrogen
atmosphere at −20 °C for further analysis. All experiments were
performed in duplicate.
2.2. Chemical characterization
2.2.1. Determination of fatty acid composition
The FA composition of the lipid extract from four insect species and
insect feeds were analysed as fatty acid methyl esters (FAME) prepared
by transesterification in accordance with international standard
ISO5509:2000(E). The determination of FA composition was performed
by means of gas chromatography with flame ionization
detector (GC-FID) (Thermo Scientific Trace GC Ultra) using a WCOT
fused silica column (100 m × 0.25 mm i.d., Coating Select Fame,
Varian, the Netherlands) in accordance with international standard
ISO15885:2002(E)IDF184:2002(E).
2.2.2. Qualitative determination of lipid classes
A qualitative determination of lipid classes of insect lipid extracts
was achieved by silica gel thin layer chromatography (TLC). The extracted
lipids and reference compounds were dissolved in dichloromethane
(40 μg/μL). In short, 5 μL of lipid extracts and reference compounds was
applied in spots to a silica gel plate of 20 × 20 cm, with a thickness of
500 μm (Analtech Inc., Newark, DE). The plates were developed in
glass chambers using hexane/diethyl ether/acetic acid (70:30:1, v/v)
asmobile phase (Kaluzny, Duncan,Merritt, & Epps, 1985). The following
references for lipid classes were used: L-α-phosphatidylcholine
(CAS nr. 8002-43-5) for phospholipids, monopalmitin (CAS nr.
32899-41-5) for monoacylglycerols, dipalmitin (CAS nr. 26657-95-
4) for diacylglycerols, free cholesterol (CAS nr. 57-88-5) for free
sterols, palmitic acid (CAS nr. 57-10-3) for free fatty acids (FFA),
tripalmitin (CAS nr. 555-44-2) for triacylglycerols, and cholesteryl
butyrate (CAS nr. 521-13-1) for sterols. Iodine vapour (CAS nr.
7553-56-2) was used to reveal the lipid classes.
2.2.3. Determination of triacylglycerol (TAG) profile by equivalent carbon
number (ECN)
Equivalent carbon number (ECN) was determined in insect lipid
extracts. ECN is a quantitative determination of the size distribution
of the TAG in lipids. This information complements that of the FA composition.
The determination of TAG profile was performed by means of
gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID) (CP-380,
Varian) using a WCOT SimDist fused silica column (5 m × 0.53 mm
i.d., DF = 0,17 μm, Varian, The Netherlands) in accordance with the
reference method of ComissionRegulation(EC)No.273/2008 Annex XX.
A certified reference of TAG containing a wide range of TAG (from 24
to 54 carbons) was used as calibration standard (IRMM/BCR519, Fluka,
the Netherlands). The ECN of a triacylglycerol is an indirect way to
determine the molecular weight of TAG because it is related to the
number of carbons and to the number of double bonds in the TAG.
ECN is determined by the formula ECN=N−2n inwhich N is the number
of carbon atoms in the three FA that make up the TAG and ‘n’ is the
total number of double bonds present in the TAG (Christie & Han, 2010).
2.3. Statistical analysis
To test for significant differences between the extraction methods,
two way ANOVA was performed, followed by pos-hoc LSD test. IBM
SPSS statistics software (version 21; IBM Corp., Armonk, NY) was
used. A significance level of p b 0.05 was used throughout the study.
3. Results and discussion
3.1. Total lipid content and extraction yield from different extraction
methods
The proximate lipid content of four insect species was determined
on live weight basis by using Folch, Soxhlet and an aqueous based
method (Table 1). Extracted yield was calculated based on total lipid
content of SLE/FLE as well as that of ALE/FLE (Table 1). The proximate
total lipid content of four insect species ranged from 1.6 to 7.8% using
aqueous extraction, from 6.0 to 12.7% using Soxhlet extraction and
from 7.5 to 12.9% for Folch extraction. As expected, the highest quantities
of lipids were obtained using Folch extraction aswell as Soxhlet extraction,
and the least amounts were extracted using the aqueous
method. No significant difference on lipid content was seen between
Soxhlet and Folch extractions, except for A. domesticus (p b 0.001).
The lipid content obtained by aqueous method was significantly different
from Soxhlet and Folch (Table 1). Aqueous extraction led to 40.9,
58.3 and 60.3% of lipid yield (ALE/FLE) for B. dubia, A. diaperinus
T. molitor, respectively. In contrast, the lipid yield of A. dometicus was
only 19%. A similar trend was seen for Soxhlet extraction, with Soxhlet
extraction the lipid yield obtained was very close to the yield obtained
by Folch extraction, reaching almost 100% for T. molitor, A. diaperinus
and A. domesticus; however for B. dubia the lipid yield was only 74.8%.
The crude fat content of T. molitor was about 12.7 g/100 g fresh insects,
which is comparable to previous findings (Finke, 2002; Ghaly & Alkoaik,
2009; Jones, Cooper, & Harding, 1972). The crude fat content for
A. domesticus (adult) was comparable to the ranges described in literature,
which is approximately 6–7 g/100 g insects (Barker, Fitzpatrick,
& Dierenfeld, 1998; Finke, 2002). For A. diaperinus and B. dubia, no
crude fat data are available in the literature.
3.2. Chemical characterization: influence of extraction method on lipid
composition of insect lipid extracts
3.2.1. Fatty acid composition
The FA profiles found in the four insect species as analysed byGC-FID
(Table 2) are in accordance with the profiles found in previous studies
on lipids where high amounts of unsaturated FA (USFA) were found
relative to saturated FA (SFA) (Finke, 2002; Paoletti, 2005; Rumpold &
Schluter, 2013; Thompson, 1973). The most abundant USFA in each of
the four insect lipid extracts was C18:1 cis9 and C18:2 cis9,12; the
most abundant SFA was C16:0. These three FA accounted from 84.7 to
89.8 g/100 g of the FA in the lipid extracts (Table 2). In the four insect
species studied, the average amount of USFA ranged from 64 g/100 g
in A. diaperinus and A. domesticus to 75 g/100 g in T. molitor and
B. dubia. Other minor FA present in insect lipid extracts included trans,
ω -3 and CLA FA.
In the current study, C18:1 cis9 and C18:1 trans12, and C18:1 cis11
and C18:1 trans15 co-eluted in the GC column. Since the cis isomers
are the most abundant in nature we expect that the detected peak
in the chromatogram corresponds mainly to the cis isomers. Lately
the chromatographic techniques in lipid analysis had become more
powerful. Better isomer separations have been achieved and the detection
limit has dramatically decreased. Therefore, it is now possible to
extract was obtained in the upper layer of the centrifuged tube. Two
other fractions were obtained, these were a thin cream layer and a
lower layer with water and water soluble compounds. The amount
of aqueous lipid extracts (ALE) was calculated. The lipid extracts
were stored under nitrogen atmosphere at −20 °C for further
analysis.
2.1.4. Feed lipid extracted with Soxhlet extraction
Insect feed was freeze-dried until arriving at stable weight
(GRI Vriesdroger, GR Instruments B.V., Wijk bij Duurstede, the
Netherlands). Afterwards, lipidswere extracted using a Soxhlet apparatus
for 6 hours (Biosolve, CAS nr. 110-54-3) using petroleum ether
(CAS nr. 0101316465) as a solvent. Afterwards, petroleum ether was
removed using a rotary evaporator (R420, Buchi, Switzerland) at
350 mbar in a water bath at 40 °C, and further increased up to 60 °C
until no solventwas seen. The lipid extractswere stored under nitrogen
atmosphere at −20 °C for further analysis. All experiments were
performed in duplicate.
2.2. Chemical characterization
2.2.1. Determination of fatty acid composition
The FA composition of the lipid extract from four insect species and
insect feeds were analysed as fatty acid methyl esters (FAME) prepared
by transesterification in accordance with international standard
ISO5509:2000(E). The determination of FA composition was performed
by means of gas chromatography with flame ionization
detector (GC-FID) (Thermo Scientific Trace GC Ultra) using a WCOT
fused silica column (100 m × 0.25 mm i.d., Coating Select Fame,
Varian, the Netherlands) in accordance with international standard
ISO15885:2002(E)IDF184:2002(E).
2.2.2. Qualitative determination of lipid classes
A qualitative determination of lipid classes of insect lipid extracts
was achieved by silica gel thin layer chromatography (TLC). The extracted
lipids and reference compounds were dissolved in dichloromethane
(40 μg/μL). In short, 5 μL of lipid extracts and reference compounds was
applied in spots to a silica gel plate of 20 × 20 cm, with a thickness of
500 μm (Analtech Inc., Newark, DE). The plates were developed in
glass chambers using hexane/diethyl ether/acetic acid (70:30:1, v/v)
asmobile phase (Kaluzny, Duncan,Merritt, & Epps, 1985). The following
references for lipid classes were used: L-α-phosphatidylcholine
(CAS nr. 8002-43-5) for phospholipids, monopalmitin (CAS nr.
32899-41-5) for monoacylglycerols, dipalmitin (CAS nr. 26657-95-
4) for diacylglycerols, free cholesterol (CAS nr. 57-88-5) for free
sterols, palmitic acid (CAS nr. 57-10-3) for free fatty acids (FFA),
tripalmitin (CAS nr. 555-44-2) for triacylglycerols, and cholesteryl
butyrate (CAS nr. 521-13-1) for sterols. Iodine vapour (CAS nr.
7553-56-2) was used to reveal the lipid classes.
2.2.3. Determination of triacylglycerol (TAG) profile by equivalent carbon
number (ECN)
Equivalent carbon number (ECN) was determined in insect lipid
extracts. ECN is a quantitative determination of the size distribution
of the TAG in lipids. This information complements that of the FA composition.
The determination of TAG profile was performed by means of
gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID) (CP-380,
Varian) using a WCOT SimDist fused silica column (5 m × 0.53 mm
i.d., DF = 0,17 μm, Varian, The Netherlands) in accordance with the
reference method of ComissionRegulation(EC)No.273/2008 Annex XX.
A certified reference of TAG containing a wide range of TAG (from 24
to 54 carbons) was used as calibration standard (IRMM/BCR519, Fluka,
the Netherlands). The ECN of a triacylglycerol is an indirect way to
determine the molecular weight of TAG because it is related to the
number of carbons and to the number of double bonds in the TAG.
ECN is determined by the formula ECN=N−2n inwhich N is the number
of carbon atoms in the three FA that make up the TAG and ‘n’ is the
total number of double bonds present in the TAG (Christie & Han, 2010).
2.3. Statistical analysis
To test for significant differences between the extraction methods,
two way ANOVA was performed, followed by pos-hoc LSD test. IBM
SPSS statistics software (version 21; IBM Corp., Armonk, NY) was
used. A significance level of p b 0.05 was used throughout the study.
3. Results and discussion
3.1. Total lipid content and extraction yield from different extraction
methods
The proximate lipid content of four insect species was determined
on live weight basis by using Folch, Soxhlet and an aqueous based
method (Table 1). Extracted yield was calculated based on total lipid
content of SLE/FLE as well as that of ALE/FLE (Table 1). The proximate
total lipid content of four insect species ranged from 1.6 to 7.8% using
aqueous extraction, from 6.0 to 12.7% using Soxhlet extraction and
from 7.5 to 12.9% for Folch extraction. As expected, the highest quantities
of lipids were obtained using Folch extraction aswell as Soxhlet extraction,
and the least amounts were extracted using the aqueous
method. No significant difference on lipid content was seen between
Soxhlet and Folch extractions, except for A. domesticus (p b 0.001).
The lipid content obtained by aqueous method was significantly different
from Soxhlet and Folch (Table 1). Aqueous extraction led to 40.9,
58.3 and 60.3% of lipid yield (ALE/FLE) for B. dubia, A. diaperinus
T. molitor, respectively. In contrast, the lipid yield of A. dometicus was
only 19%. A similar trend was seen for Soxhlet extraction, with Soxhlet
extraction the lipid yield obtained was very close to the yield obtained
by Folch extraction, reaching almost 100% for T. molitor, A. diaperinus
and A. domesticus; however for B. dubia the lipid yield was only 74.8%.
The crude fat content of T. molitor was about 12.7 g/100 g fresh insects,
which is comparable to previous findings (Finke, 2002; Ghaly & Alkoaik,
2009; Jones, Cooper, & Harding, 1972). The crude fat content for
A. domesticus (adult) was comparable to the ranges described in literature,
which is approximately 6–7 g/100 g insects (Barker, Fitzpatrick,
& Dierenfeld, 1998; Finke, 2002). For A. diaperinus and B. dubia, no
crude fat data are available in the literature.
3.2. Chemical characterization: influence of extraction method on lipid
composition of insect lipid extracts
3.2.1. Fatty acid composition
The FA profiles found in the four insect species as analysed byGC-FID
(Table 2) are in accordance with the profiles found in previous studies
on lipids where high amounts of unsaturated FA (USFA) were found
relative to saturated FA (SFA) (Finke, 2002; Paoletti, 2005; Rumpold &
Schluter, 2013; Thompson, 1973). The most abundant USFA in each of
the four insect lipid extracts was C18:1 cis9 and C18:2 cis9,12; the
most abundant SFA was C16:0. These three FA accounted from 84.7 to
89.8 g/100 g of the FA in the lipid extracts (Table 2). In the four insect
species studied, the average amount of USFA ranged from 64 g/100 g
in A. diaperinus and A. domesticus to 75 g/100 g in T. molitor and
B. dubia. Other minor FA present in insect lipid extracts included trans,
ω -3 and CLA FA.
In the current study, C18:1 cis9 and C18:1 trans12, and C18:1 cis11
and C18:1 trans15 co-eluted in the GC column. Since the cis isomers
are the most abundant in nature we expect that the detected peak
in the chromatogram corresponds mainly to the cis isomers. Lately
the chromatographic techniques in lipid analysis had become more
powerful. Better isomer separations have been achieved and the detection
limit has dramatically decreased. Therefore, it is now possible to
0/5000
40 องศาเซลเซียส หลังจากสอง centrifugation ไขมันไดโปร่งใส
สารสกัดได้รับในชั้นบนของหลอด centrifuged สอง
ส่วนอื่น ๆ ได้รับ มีชั้นครีมบางและ
ชั้นล่างกับน้ำและสารละลายน้ำ ยอด
ของไขมันอควี สารสกัด (น้ำ) ที่คำนวณ กระบวนการแยก
ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจนที่ −20 ° C สำหรับเพิ่มเติม
วิเคราะห์
2.1.4 อาหารไขมันสกัด ด้วยสกัด Soxhlet
อาหารแมลงที่กรอบจนมาถึงที่มั่นคงน้ำหนัก
(GRI Vriesdroger, GR เครื่อง B.V., Wijk bij Duurstede
เนเธอร์แลนด์) ภายหลัง lipidswere ที่สกัดโดยใช้เครื่อง Soxhlet
6 ชั่วโมง (Biosolve, CAS nr. 110-54-3) ใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์
(CAS nr. 0101316465) เป็นตัวทำละลาย ภายหลัง ปิโตรเลียมอีเทอร์ถูก
เอาใช้ evaporator โรตารี่ (R420, Buchi สวิตเซอร์แลนด์) ที่
mbar 350 ในน้ำอ่างอาบน้ำที่ 40 ° C และต่อไป เพิ่มขึ้นถึง 60 ° C
จน solventwas ไม่เห็น Extractswere ไขมันที่เก็บไว้ภายใต้ไนโตรเจน
บรรยากาศที่ −20 ° C สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม ทดลองทั้งหมดถูก
ทำในซ้ำ
2.2 จำแนกสารเคมี
2.2.1 กำหนดองค์ประกอบกรดไขมัน
FA ส่วนประกอบของไขมันสกัดจากแมลงชนิดสี่ และ
เนื้อหาสรุปแมลงถูก analysed เป็นกรดไขมัน methyl esters (เฟม) เตรียม
โดยเพิ่มตาม standard
ISO5509:2000(E) นานาชาติ ทำการกำหนดองค์ประกอบของ FA
วิธี chromatography ก๊าซด้วยเปลวไฟ ionization
จับ (GC-FID) (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ติดตาม GC Ultra) ใช้เป็น WCOT
ซิลิก้า fused คอลัมน์ (100 m × 0.25 มม.ประชาชน เคลือบเลือกชื่อเสียง,
แล้วแต่กำหนด เนเธอร์แลนด์) ตามมาตรฐานสากล
ISO15885:2002 (E) IDF184:2002 (E) .
2.2.2 กำหนดคุณภาพของชั้นไขมัน
การกำหนดคุณภาพของชั้นไขมันสารสกัดจากแมลงไขมัน
สำเร็จ โดย chromatography บางชั้นของซิลิก้าเจล (TLC) การแยก
โครงการและสารอ้างอิงได้ละลายใน dichloromethane
(40 μg/μL) ในระยะสั้น μL 5 แยกไขมันและสารอ้างอิงถูก
กับในจุดที่แผ่นเจลของ 20 × 20 ซม. มีความหนาของ
μm 500 (Analtech Inc. นวร์ก DE) แผ่นได้รับการพัฒนาใน
แก้วหอใช้อีเทอร์เฮก เซน/diethyl/กรด อะซิติก (70:30:1, v/v)
ระยะ asmobile (Kaluzny ดันแคน Merritt & Epps 1985) ต่อไปนี้
อ้างอิงสำหรับใช้เรียนไขมัน: L-α-สำคัญ
(CAS nr. 8002-43-5) สำหรับ phospholipids, monopalmitin (CAS nr.
32899-41-5) สำหรับ monoacylglycerols, dipalmitin (CAS nr 26657 - 95-
4) สำหรับ diacylglycerols ฟรีไขมัน (CAS nr. 57-88-5) ฟรี
สเตอรอลส์ กรด palmitic (CAS nr. 57-10-3) สำหรับกรดไขมันอิสระ (FFA),
tripalmitin (CAS nr 555-44-2) triacylglycerols และ cholesteryl
butyrate (CAS nr. 521-13-1) สำหรับสเตอรอลส์ ไอโอดีนไอ (CAS nr.
7553-56-2) ใช้ในการเปิดเผยประเภทไขมัน
2.2.3 การกำหนดโพรไฟล์ triacylglycerol (แท็ก) โดยเทียบเท่าคาร์บอน
เลข (ECN)
กำหนดจำนวนคาร์บอนเทียบเท่า (ECN) ในแมลงไขมัน
แยก ECN เป็นเรื่องเชิงปริมาณของการกระจายขนาด
แท็กในโครงการ ข้อมูลเสริมที่ของ FA องค์ประกอบ
กำหนดโพรไฟล์แท็กทำผ่าน
chromatography ก๊าซกับเครื่องตรวจจับการ ionization เปลวไฟ (GC-FID) (CP-380,
แล้วแต่กำหนด) โดยใช้คอลัมน์ WCOT SimDist fused ซิลิก้า (5 m × 0.53 mm
i.d. DF = 0,17 μm แล้วแต่กำหนด ประเทศเนเธอร์แลนด์) สอดคล้อง
อ้างอิงวิธีการของหมายเลข ComissionRegulation (EC)แอนเน็กซ์ 273/2008 XX.
อ้างอิงที่ได้รับการรับรองของแท็กที่ประกอบด้วยช่วงกว้างของแท็ก (จาก 24
การ 54 carbons) ถูกใช้เป็นมาตรฐานเทียบ (IRMM/BCR519, Fluka,
เนเธอร์แลนด์) ECN ของ triacylglycerol เป็นเป็นวิธีทางอ้อมการ
กำหนดน้ำหนักโมเลกุลของแท็ก เพราะมันเกี่ยวข้องกับการ
หมายเลข carbons และจำนวนคู่พันธบัตรในแท็ก
สารสกัดได้รับในชั้นบนของหลอด centrifuged สอง
ส่วนอื่น ๆ ได้รับ มีชั้นครีมบางและ
ชั้นล่างกับน้ำและสารละลายน้ำ ยอด
ของไขมันอควี สารสกัด (น้ำ) ที่คำนวณ กระบวนการแยก
ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจนที่ −20 ° C สำหรับเพิ่มเติม
วิเคราะห์
2.1.4 อาหารไขมันสกัด ด้วยสกัด Soxhlet
อาหารแมลงที่กรอบจนมาถึงที่มั่นคงน้ำหนัก
(GRI Vriesdroger, GR เครื่อง B.V., Wijk bij Duurstede
เนเธอร์แลนด์) ภายหลัง lipidswere ที่สกัดโดยใช้เครื่อง Soxhlet
6 ชั่วโมง (Biosolve, CAS nr. 110-54-3) ใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์
(CAS nr. 0101316465) เป็นตัวทำละลาย ภายหลัง ปิโตรเลียมอีเทอร์ถูก
เอาใช้ evaporator โรตารี่ (R420, Buchi สวิตเซอร์แลนด์) ที่
mbar 350 ในน้ำอ่างอาบน้ำที่ 40 ° C และต่อไป เพิ่มขึ้นถึง 60 ° C
จน solventwas ไม่เห็น Extractswere ไขมันที่เก็บไว้ภายใต้ไนโตรเจน
บรรยากาศที่ −20 ° C สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม ทดลองทั้งหมดถูก
ทำในซ้ำ
2.2 จำแนกสารเคมี
2.2.1 กำหนดองค์ประกอบกรดไขมัน
FA ส่วนประกอบของไขมันสกัดจากแมลงชนิดสี่ และ
เนื้อหาสรุปแมลงถูก analysed เป็นกรดไขมัน methyl esters (เฟม) เตรียม
โดยเพิ่มตาม standard
ISO5509:2000(E) นานาชาติ ทำการกำหนดองค์ประกอบของ FA
วิธี chromatography ก๊าซด้วยเปลวไฟ ionization
จับ (GC-FID) (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ติดตาม GC Ultra) ใช้เป็น WCOT
ซิลิก้า fused คอลัมน์ (100 m × 0.25 มม.ประชาชน เคลือบเลือกชื่อเสียง,
แล้วแต่กำหนด เนเธอร์แลนด์) ตามมาตรฐานสากล
ISO15885:2002 (E) IDF184:2002 (E) .
2.2.2 กำหนดคุณภาพของชั้นไขมัน
การกำหนดคุณภาพของชั้นไขมันสารสกัดจากแมลงไขมัน
สำเร็จ โดย chromatography บางชั้นของซิลิก้าเจล (TLC) การแยก
โครงการและสารอ้างอิงได้ละลายใน dichloromethane
(40 μg/μL) ในระยะสั้น μL 5 แยกไขมันและสารอ้างอิงถูก
กับในจุดที่แผ่นเจลของ 20 × 20 ซม. มีความหนาของ
μm 500 (Analtech Inc. นวร์ก DE) แผ่นได้รับการพัฒนาใน
แก้วหอใช้อีเทอร์เฮก เซน/diethyl/กรด อะซิติก (70:30:1, v/v)
ระยะ asmobile (Kaluzny ดันแคน Merritt & Epps 1985) ต่อไปนี้
อ้างอิงสำหรับใช้เรียนไขมัน: L-α-สำคัญ
(CAS nr. 8002-43-5) สำหรับ phospholipids, monopalmitin (CAS nr.
32899-41-5) สำหรับ monoacylglycerols, dipalmitin (CAS nr 26657 - 95-
4) สำหรับ diacylglycerols ฟรีไขมัน (CAS nr. 57-88-5) ฟรี
สเตอรอลส์ กรด palmitic (CAS nr. 57-10-3) สำหรับกรดไขมันอิสระ (FFA),
tripalmitin (CAS nr 555-44-2) triacylglycerols และ cholesteryl
butyrate (CAS nr. 521-13-1) สำหรับสเตอรอลส์ ไอโอดีนไอ (CAS nr.
7553-56-2) ใช้ในการเปิดเผยประเภทไขมัน
2.2.3 การกำหนดโพรไฟล์ triacylglycerol (แท็ก) โดยเทียบเท่าคาร์บอน
เลข (ECN)
กำหนดจำนวนคาร์บอนเทียบเท่า (ECN) ในแมลงไขมัน
แยก ECN เป็นเรื่องเชิงปริมาณของการกระจายขนาด
แท็กในโครงการ ข้อมูลเสริมที่ของ FA องค์ประกอบ
กำหนดโพรไฟล์แท็กทำผ่าน
chromatography ก๊าซกับเครื่องตรวจจับการ ionization เปลวไฟ (GC-FID) (CP-380,
แล้วแต่กำหนด) โดยใช้คอลัมน์ WCOT SimDist fused ซิลิก้า (5 m × 0.53 mm
i.d. DF = 0,17 μm แล้วแต่กำหนด ประเทศเนเธอร์แลนด์) สอดคล้อง
อ้างอิงวิธีการของหมายเลข ComissionRegulation (EC)แอนเน็กซ์ 273/2008 XX.
อ้างอิงที่ได้รับการรับรองของแท็กที่ประกอบด้วยช่วงกว้างของแท็ก (จาก 24
การ 54 carbons) ถูกใช้เป็นมาตรฐานเทียบ (IRMM/BCR519, Fluka,
เนเธอร์แลนด์) ECN ของ triacylglycerol เป็นเป็นวิธีทางอ้อมการ
กำหนดน้ำหนักโมเลกุลของแท็ก เพราะมันเกี่ยวข้องกับการ
หมายเลข carbons และจำนวนคู่พันธบัตรในแท็ก
การแปล กรุณารอสักครู่..
40 °C. After the second centrifugation, a transparent anhydrous lipid
extract was obtained in the upper layer of the centrifuged tube. Two
other fractions were obtained, these were a thin cream layer and a
lower layer with water and water soluble compounds. The amount
of aqueous lipid extracts (ALE) was calculated. The lipid extracts
were stored under nitrogen atmosphere at −20 °C for further
analysis.
2.1.4. Feed lipid extracted with Soxhlet extraction
Insect feed was freeze-dried until arriving at stable weight
(GRI Vriesdroger, GR Instruments B.V., Wijk bij Duurstede, the
Netherlands). Afterwards, lipidswere extracted using a Soxhlet apparatus
for 6 hours (Biosolve, CAS nr. 110-54-3) using petroleum ether
(CAS nr. 0101316465) as a solvent. Afterwards, petroleum ether was
removed using a rotary evaporator (R420, Buchi, Switzerland) at
350 mbar in a water bath at 40 °C, and further increased up to 60 °C
until no solventwas seen. The lipid extractswere stored under nitrogen
atmosphere at −20 °C for further analysis. All experiments were
performed in duplicate.
2.2. Chemical characterization
2.2.1. Determination of fatty acid composition
The FA composition of the lipid extract from four insect species and
insect feeds were analysed as fatty acid methyl esters (FAME) prepared
by transesterification in accordance with international standard
ISO5509:2000(E). The determination of FA composition was performed
by means of gas chromatography with flame ionization
detector (GC-FID) (Thermo Scientific Trace GC Ultra) using a WCOT
fused silica column (100 m × 0.25 mm i.d., Coating Select Fame,
Varian, the Netherlands) in accordance with international standard
ISO15885:2002(E)IDF184:2002(E).
2.2.2. Qualitative determination of lipid classes
A qualitative determination of lipid classes of insect lipid extracts
was achieved by silica gel thin layer chromatography (TLC). The extracted
lipids and reference compounds were dissolved in dichloromethane
(40 μg/μL). In short, 5 μL of lipid extracts and reference compounds was
applied in spots to a silica gel plate of 20 × 20 cm, with a thickness of
500 μm (Analtech Inc., Newark, DE). The plates were developed in
glass chambers using hexane/diethyl ether/acetic acid (70:30:1, v/v)
asmobile phase (Kaluzny, Duncan,Merritt, & Epps, 1985). The following
references for lipid classes were used: L-α-phosphatidylcholine
(CAS nr. 8002-43-5) for phospholipids, monopalmitin (CAS nr.
32899-41-5) for monoacylglycerols, dipalmitin (CAS nr. 26657-95-
4) for diacylglycerols, free cholesterol (CAS nr. 57-88-5) for free
sterols, palmitic acid (CAS nr. 57-10-3) for free fatty acids (FFA),
tripalmitin (CAS nr. 555-44-2) for triacylglycerols, and cholesteryl
butyrate (CAS nr. 521-13-1) for sterols. Iodine vapour (CAS nr.
7553-56-2) was used to reveal the lipid classes.
2.2.3. Determination of triacylglycerol (TAG) profile by equivalent carbon
number (ECN)
Equivalent carbon number (ECN) was determined in insect lipid
extracts. ECN is a quantitative determination of the size distribution
of the TAG in lipids. This information complements that of the FA composition.
The determination of TAG profile was performed by means of
gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID) (CP-380,
Varian) using a WCOT SimDist fused silica column (5 m × 0.53 mm
i.d., DF = 0,17 μm, Varian, The Netherlands) in accordance with the
reference method of ComissionRegulation(EC)No.273/2008 Annex XX.
A certified reference of TAG containing a wide range of TAG (from 24
to 54 carbons) was used as calibration standard (IRMM/BCR519, Fluka,
the Netherlands). The ECN of a triacylglycerol is an indirect way to
determine the molecular weight of TAG because it is related to the
number of carbons and to the number of double bonds in the TAG.
ECN is determined by the formula ECN=N−2n inwhich N is the number
of carbon atoms in the three FA that make up the TAG and ‘n’ is the
total number of double bonds present in the TAG (Christie & Han, 2010).
2.3. Statistical analysis
To test for significant differences between the extraction methods,
two way ANOVA was performed, followed by pos-hoc LSD test. IBM
SPSS statistics software (version 21; IBM Corp., Armonk, NY) was
used. A significance level of p b 0.05 was used throughout the study.
3. Results and discussion
3.1. Total lipid content and extraction yield from different extraction
methods
The proximate lipid content of four insect species was determined
on live weight basis by using Folch, Soxhlet and an aqueous based
method (Table 1). Extracted yield was calculated based on total lipid
content of SLE/FLE as well as that of ALE/FLE (Table 1). The proximate
total lipid content of four insect species ranged from 1.6 to 7.8% using
aqueous extraction, from 6.0 to 12.7% using Soxhlet extraction and
from 7.5 to 12.9% for Folch extraction. As expected, the highest quantities
of lipids were obtained using Folch extraction aswell as Soxhlet extraction,
and the least amounts were extracted using the aqueous
method. No significant difference on lipid content was seen between
Soxhlet and Folch extractions, except for A. domesticus (p b 0.001).
The lipid content obtained by aqueous method was significantly different
from Soxhlet and Folch (Table 1). Aqueous extraction led to 40.9,
58.3 and 60.3% of lipid yield (ALE/FLE) for B. dubia, A. diaperinus
T. molitor, respectively. In contrast, the lipid yield of A. dometicus was
only 19%. A similar trend was seen for Soxhlet extraction, with Soxhlet
extraction the lipid yield obtained was very close to the yield obtained
by Folch extraction, reaching almost 100% for T. molitor, A. diaperinus
and A. domesticus; however for B. dubia the lipid yield was only 74.8%.
The crude fat content of T. molitor was about 12.7 g/100 g fresh insects,
which is comparable to previous findings (Finke, 2002; Ghaly & Alkoaik,
2009; Jones, Cooper, & Harding, 1972). The crude fat content for
A. domesticus (adult) was comparable to the ranges described in literature,
which is approximately 6–7 g/100 g insects (Barker, Fitzpatrick,
& Dierenfeld, 1998; Finke, 2002). For A. diaperinus and B. dubia, no
crude fat data are available in the literature.
3.2. Chemical characterization: influence of extraction method on lipid
composition of insect lipid extracts
3.2.1. Fatty acid composition
The FA profiles found in the four insect species as analysed byGC-FID
(Table 2) are in accordance with the profiles found in previous studies
on lipids where high amounts of unsaturated FA (USFA) were found
relative to saturated FA (SFA) (Finke, 2002; Paoletti, 2005; Rumpold &
Schluter, 2013; Thompson, 1973). The most abundant USFA in each of
the four insect lipid extracts was C18:1 cis9 and C18:2 cis9,12; the
most abundant SFA was C16:0. These three FA accounted from 84.7 to
89.8 g/100 g of the FA in the lipid extracts (Table 2). In the four insect
species studied, the average amount of USFA ranged from 64 g/100 g
in A. diaperinus and A. domesticus to 75 g/100 g in T. molitor and
B. dubia. Other minor FA present in insect lipid extracts included trans,
ω -3 and CLA FA.
In the current study, C18:1 cis9 and C18:1 trans12, and C18:1 cis11
and C18:1 trans15 co-eluted in the GC column. Since the cis isomers
are the most abundant in nature we expect that the detected peak
in the chromatogram corresponds mainly to the cis isomers. Lately
the chromatographic techniques in lipid analysis had become more
powerful. Better isomer separations have been achieved and the detection
limit has dramatically decreased. Therefore, it is now possible to40 ° C หลังจากที่ปั่นสองไขมันโปร่งใสปราศจาก
สารสกัดที่ได้รับในชั้นบนของหลอดหมุนเหวี่ยง สอง
เศษส่วนอื่น ๆ ที่ได้รับเหล่านี้เป็นชั้นครีมบางและ
ชั้นล่างที่มีน้ำและสารที่ละลายน้ำได้ ปริมาณ
ของสารสกัดจากไขมันในน้ำ (เบียร์) ที่คำนวณได้ สารสกัดจากไขมัน
ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจนที่ -20 ° C ต่อการ
วิเคราะห์
2.1.4 อาหารไขมันสกัดด้วยวิธีหมักสกัด
อาหารแมลงก็แห้งจนมาถึงที่น้ำหนักคงที่
(GRI Vriesdroger, GR เครื่องมือ BV, วิก Duurstede,
เนเธอร์แลนด์) หลังจากนั้น lipidswere สกัดโดยใช้เครื่องมือวิธีการสกัดแบบ
6 ชั่วโมง (Biosolve, CAS Nr. 110-54-3) โดยใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์
(CAS Nr. 0101316465) เป็นตัวทำละลาย หลังจากนั้นปิโตรเลียมอีเทอร์ถูก
ลบออกโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน (R420, Buchi วิตเซอร์แลนด์) ที่
350 เอ็มบาร์ในอ่างน้ำที่ 40 ° C และเพิ่มขึ้นถึง 60 ° C ต่อไป
จนกว่าจะไม่มี solventwas เห็น ไขมัน extractswere เก็บไว้ภายใต้ไนโตรเจน
บรรยากาศที่ -20 ° C สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป การทดลองทั้งหมดถูก
ดำเนินการในที่ซ้ำกัน
2.2 สารเคมีลักษณะ
2.2.1 การกำหนดองค์ประกอบของกรดไขมัน
เอฟเอคัองค์ประกอบของสารสกัดจากไขมันจากสี่ชนิดของแมลงและ
แมลงฟีดถูกนำมาวิเคราะห์เป็นเมทิลเอสเตอร์ของกรดไขมัน (FAME) จัดทำ
โดย transesterification ให้สอดคล้องกับมาตรฐานสากล
ISO5509: 2000 (E) ความมุ่งมั่นขององค์ประกอบเอฟเอได้รับการดำเนินการ
โดยวิธีโครมาโตก๊าซกับไอออนไนซ์เปลวไฟ
เครื่องตรวจจับ (GC-FID) (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ติดตาม GC อัลตร้า) โดยใช้ WCOT
ผสมคอลัมน์ซิลิกา (100 เมตร× 0.25 มิลลิเมตร id เคลือบเลือกเกียรติยศ
Varian, เนเธอร์แลนด์ ) ให้สอดคล้องกับมาตรฐานสากล
ISO15885: 2002 (E) IDF184: 2002 (E)
2.2.2 การกำหนดคุณภาพของการเรียนไขมัน
กำหนดคุณภาพของการเรียนไขมันของสารสกัดจากไขมันแมลง
ก็ประสบความสำเร็จโดยโคซิลิกาเจลชั้นบาง (TLC) สกัด
ไขมันและสารอ้างอิงถูกกลืนหายไปในไดคลอโรมีเทน
(40 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร) ในระยะสั้น 5 ไมโครลิตรของสารสกัดจากไขมันและสารอ้างอิงที่ถูก
นำไปใช้ในจุดที่แผ่นซิลิกาเจล 20 × 20 ซม, ที่มีความหนา
500 ไมครอน (Analtech อิงค์นิวอาร์, DE) แผ่นถูกพัฒนาขึ้นใน
ห้องกระจกโดยใช้เฮกเซน / อีเทอร์ / กรดอะซิติก (70: 30: 1, v / v)
ระยะ Asmobile (Kaluzny ดันแคน, ริตต์และ Epps, 1985) ต่อไปนี้
การอ้างอิงสำหรับการเรียนไขมันถูกนำมาใช้: L-α-phosphatidylcholine
. (CAS ไม่มี 8002-43-5) สำหรับฟอสโฟ monopalmitin (CAS ไม่มี
32899-41-5) สำหรับ monoacylglycerols, dipalmitin (CAS ไม่มี 26657-95-.
4) สำหรับ diacylglycerols คอเลสเตอรอลฟรี (ไม่มี CAS. 57-88-5) ฟรี
sterols, กรดปาล์มิติก (CAS Nr. 57-10-3) กรดไขมันอิสระ (FFA)
tripalmitin (CAS Nr. 555-44- 2) สำหรับ triacylglycerols และ Cholesteryl
butyrate (ไม่มี CAS. 521-13-1) สำหรับ sterols ไอโอดีนไอ (CAS ไม่มี
7553-56-2) ถูกนำมาใช้เพื่อแสดงให้เห็นถึงการเรียนไขมัน
2.2.3 ความมุ่งมั่นของ triacylglycerol (TAG) รายละเอียดโดยคาร์บอนเทียบเท่า
จำนวน (ECN)
จำนวนคาร์บอนเทียบเท่า (ECN) ถูกกำหนดไว้ในไขมันแมลง
สารสกัดจาก ECN คือความมุ่งมั่นเชิงปริมาณของการกระจายขนาด
ของแท็กในไขมัน ข้อมูลเหล่านี้จะเติมเต็มขององค์ประกอบเอฟเอ
กำหนดรายละเอียด TAG ได้รับการดำเนินการโดยวิธีการ
แก๊สโครมากับเครื่องตรวจจับเปลวไฟไอออนไนซ์ (GC-FID) (CP-380,
Varian) โดยใช้ WCOT SimDist ผสมคอลัมน์ซิลิกา (5 เมตร× 0.53 มิลลิเมตร
id, DF = 0,17 ไมโครเมตร Varian, เนเธอร์แลนด์) ให้สอดคล้องกับ
วิธีการอ้างอิงของ ComissionRegulation (EU) No.273 / 2008 ภาคผนวก XX
อ้างอิงได้รับการรับรองของแท็กที่มีความหลากหลายของ TAG (จาก 24
ถึง 54 ก๊อบปี้ ) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานการสอบเทียบ (IRMM / BCR519, Fluka,
เนเธอร์แลนด์) ECN ของ triacylglycerol เป็นวิธีทางอ้อมเพื่อ
กำหนดน้ำหนักโมเลกุลของ TAG เพราะมันมีความเกี่ยวข้องกับ
จำนวนของคาร์บอนและจำนวนของพันธะคู่ใน TAG
ECN จะถูกกำหนดโดยเครือข่ายอนุรักษ์ช้างสูตร = N-2n inwhich N คือ จำนวน
ของอะตอมคาร์บอนในสามเอฟเอที่ทำขึ้น TAG และ 'n' เป็น
จำนวนรวมของพันธะคู่อยู่ในแท็ก (คริสตี้และฮัน, 2010)
2.3 การวิเคราะห์ทางสถิติ
ในการทดสอบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างวิธีการสกัดที่
สองทาง ANOVA ได้ดำเนินการตาม pos เฉพาะกิจการทดสอบ LSD IBM
ซอฟแวร์โปรแกรม SPSS สถิติ (รุ่น 21; ไอบีเอ็มคอร์ป, อาร์ม, นิวยอร์ก) ถูก
นำมาใช้ ระดับนัยสำคัญของ PB 0.05 ถูกนำมาใช้ตลอดการศึกษา
3 ผลลัพธ์และการอภิปราย
3.1 ไขมันรวมและผลผลิตสกัดจากการสกัดที่แตกต่างกัน
วิธีการ
ไขมันใกล้เคียงสี่แมลงสายพันธุ์ที่ถูกกำหนด
บนพื้นฐานน้ำหนักสดโดยใช้ Folch, วิธีหมักและน้ำตาม
วิธีการ (ตารางที่ 1) ผลผลิตที่สกัดได้เมื่อคำนวณจากไขมันรวม
เนื้อหาของ SLE / FLE เช่นเดียวกับที่ ALE / FLE (ตารางที่ 1) ใกล้เคียง
ไขมันรวมเป็นสี่แมลงสายพันธุ์ที่อยู่ในช่วง 1.6-7.8% โดยใช้
การสกัดน้ำ 6.0-12.7% โดยใช้วิธีการสกัดแบบการสกัดและ
7.5-12.9% สำหรับการสกัด Folch คาดว่าจะเป็นปริมาณที่สูงที่สุด
ของไขมันที่ได้รับใช้ Folch สกัดตลอดจนการสกัดวิธีการสกัดแบบ,
และจำนวนน้อยถูกสกัดโดยใช้น้ำ
วิธี ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญต่อปริมาณไขมันที่เห็นระหว่าง
วิธีการสกัดแบบและ Folch สกัดยกเว้น A. domesticus (Pb 0.001)
ไขมันที่ได้จากวิธีการน้ำอย่างมีนัยสำคัญที่แตกต่าง
จากวิธีการสกัดแบบและ Folch (ตารางที่ 1) สกัดน้ำนำไปสู่การ 40.9,
58.3 และ 60.3% จากอัตราผลตอบแทนของไขมัน (ALE / FLE) สำหรับบี dubia, A. diaperinus
ต molitor ตามลำดับ ในทางตรงกันข้ามผลตอบแทนไขมันของ A. dometicus เป็น
เพียง 19% แนวโน้มที่คล้ายกันก็เห็นในการสกัดวิธีการสกัดแบบด้วยวิธีการสกัดแบบ
สกัดไขมันที่ได้อยู่ใกล้กับผลตอบแทนที่ได้รับ
โดยการสกัด Folch ถึงเกือบ 100% สำหรับ molitor ตอ diaperinus
และ A. domesticus; แต่สำหรับบี dubia ผลผลิตไขมันเป็นเพียง 74.8%
ปริมาณไขมันดิบของ T. molitor ประมาณ 12.7 กรัม / 100 กรัมแมลงสด
ซึ่งเทียบได้กับผลการวิจัยก่อนหน้า (Finke 2002; Ghaly & Alkoaik,
2009; โจนส์ คูเปอร์และฮาร์ดิง, 1972) ปริมาณไขมันดิบ
A. domesticus (ผู้ใหญ่) เป็นช่วงที่ใกล้เคียงกับที่อธิบายไว้ในวรรณกรรม
ซึ่งมีประมาณ 6-7 กรัม / 100 กรัมแมลง (บาร์คเกอร์ฟิทซ์
และ Dierenfeld 1998; Finke, 2002) สำหรับเอ diaperinus และ B dubia ไม่มี
ข้อมูลไขมันดิบที่มีอยู่ในวรรณคดี
3.2 ลักษณะทางเคมี: อิทธิพลของวิธีการสกัดไขมันใน
องค์ประกอบของไขมันสารสกัดจากแมลง
3.2.1 องค์ประกอบของกรดไขมัน
โปรไฟล์เอฟเอที่พบในสี่แมลงสายพันธุ์ที่เป็นวิเคราะห์ byGC-FID
(ตารางที่ 2) เป็นไปตามรูปแบบที่พบในการศึกษาก่อนหน้า
เกี่ยวกับไขมันที่จำนวนเงินที่สูงของเอฟเอไม่อิ่มตัว (USFA) พบว่า
เมื่อเทียบกับเอฟเอคัอิ่มตัว (SFA ) (Finke 2002; Paoletti 2005; Rumpold และ
Schluter, 2013; ธ อมป์สัน, 1973) ที่มีมากที่สุด USFA ในแต่ละ
สี่สารสกัดจากไขมันแมลงเป็น C18: 1 cis9 และ C18: 2 cis9,12;
ที่มีมากที่สุด SFA เป็น C16: 0 ทั้งสามเอฟเอคิดจาก 84.7 ถึง
89.8 กรัม / 100 กรัมของเอฟเอในสารสกัดจากไขมัน (ตารางที่ 2) ในสี่แมลง
สายพันธุ์ที่ศึกษาจำนวนเงินเฉลี่ยของ USFA ตั้งแต่ 64 กรัม / 100 กรัม
ใน A. diaperinus และ A. domesticus ถึง 75 กรัม / 100 กรัมใน molitor ตและ
บี dubia อื่น ๆ ที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะปัจจุบันเอฟเอในสารสกัดจากไขมันแมลงรวมทรานส์
ω -3 และ CLA เอฟเอ
ในการศึกษาในปัจจุบัน C18: 1 cis9 และ C18: 1 trans12 และ C18: 1 cis11
และ C18: 1 trans15 ร่วมชะในคอลัมน์ GC . ตั้งแต่ isomers ถูกต้อง
มีความอุดมสมบูรณ์มากที่สุดในธรรมชาติที่เราคาดหวังว่ายอดเขาที่ตรวจพบ
ใน chromatogram ตรงส่วนใหญ่จะ isomers ถูกต้อง เมื่อเร็ว ๆ นี้
เทคนิคโครมาในการวิเคราะห์ไขมันได้มากขึ้น
ที่มีประสิทธิภาพ ดีกว่าการแยก isomer ได้รับการประสบความสำเร็จและการตรวจสอบ
ขีด จำกัด ได้ลดลงอย่างมาก ดังนั้นจึงเป็นไปได้ที่จะ
extract was obtained in the upper layer of the centrifuged tube. Two
other fractions were obtained, these were a thin cream layer and a
lower layer with water and water soluble compounds. The amount
of aqueous lipid extracts (ALE) was calculated. The lipid extracts
were stored under nitrogen atmosphere at −20 °C for further
analysis.
2.1.4. Feed lipid extracted with Soxhlet extraction
Insect feed was freeze-dried until arriving at stable weight
(GRI Vriesdroger, GR Instruments B.V., Wijk bij Duurstede, the
Netherlands). Afterwards, lipidswere extracted using a Soxhlet apparatus
for 6 hours (Biosolve, CAS nr. 110-54-3) using petroleum ether
(CAS nr. 0101316465) as a solvent. Afterwards, petroleum ether was
removed using a rotary evaporator (R420, Buchi, Switzerland) at
350 mbar in a water bath at 40 °C, and further increased up to 60 °C
until no solventwas seen. The lipid extractswere stored under nitrogen
atmosphere at −20 °C for further analysis. All experiments were
performed in duplicate.
2.2. Chemical characterization
2.2.1. Determination of fatty acid composition
The FA composition of the lipid extract from four insect species and
insect feeds were analysed as fatty acid methyl esters (FAME) prepared
by transesterification in accordance with international standard
ISO5509:2000(E). The determination of FA composition was performed
by means of gas chromatography with flame ionization
detector (GC-FID) (Thermo Scientific Trace GC Ultra) using a WCOT
fused silica column (100 m × 0.25 mm i.d., Coating Select Fame,
Varian, the Netherlands) in accordance with international standard
ISO15885:2002(E)IDF184:2002(E).
2.2.2. Qualitative determination of lipid classes
A qualitative determination of lipid classes of insect lipid extracts
was achieved by silica gel thin layer chromatography (TLC). The extracted
lipids and reference compounds were dissolved in dichloromethane
(40 μg/μL). In short, 5 μL of lipid extracts and reference compounds was
applied in spots to a silica gel plate of 20 × 20 cm, with a thickness of
500 μm (Analtech Inc., Newark, DE). The plates were developed in
glass chambers using hexane/diethyl ether/acetic acid (70:30:1, v/v)
asmobile phase (Kaluzny, Duncan,Merritt, & Epps, 1985). The following
references for lipid classes were used: L-α-phosphatidylcholine
(CAS nr. 8002-43-5) for phospholipids, monopalmitin (CAS nr.
32899-41-5) for monoacylglycerols, dipalmitin (CAS nr. 26657-95-
4) for diacylglycerols, free cholesterol (CAS nr. 57-88-5) for free
sterols, palmitic acid (CAS nr. 57-10-3) for free fatty acids (FFA),
tripalmitin (CAS nr. 555-44-2) for triacylglycerols, and cholesteryl
butyrate (CAS nr. 521-13-1) for sterols. Iodine vapour (CAS nr.
7553-56-2) was used to reveal the lipid classes.
2.2.3. Determination of triacylglycerol (TAG) profile by equivalent carbon
number (ECN)
Equivalent carbon number (ECN) was determined in insect lipid
extracts. ECN is a quantitative determination of the size distribution
of the TAG in lipids. This information complements that of the FA composition.
The determination of TAG profile was performed by means of
gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID) (CP-380,
Varian) using a WCOT SimDist fused silica column (5 m × 0.53 mm
i.d., DF = 0,17 μm, Varian, The Netherlands) in accordance with the
reference method of ComissionRegulation(EC)No.273/2008 Annex XX.
A certified reference of TAG containing a wide range of TAG (from 24
to 54 carbons) was used as calibration standard (IRMM/BCR519, Fluka,
the Netherlands). The ECN of a triacylglycerol is an indirect way to
determine the molecular weight of TAG because it is related to the
number of carbons and to the number of double bonds in the TAG.
ECN is determined by the formula ECN=N−2n inwhich N is the number
of carbon atoms in the three FA that make up the TAG and ‘n’ is the
total number of double bonds present in the TAG (Christie & Han, 2010).
2.3. Statistical analysis
To test for significant differences between the extraction methods,
two way ANOVA was performed, followed by pos-hoc LSD test. IBM
SPSS statistics software (version 21; IBM Corp., Armonk, NY) was
used. A significance level of p b 0.05 was used throughout the study.
3. Results and discussion
3.1. Total lipid content and extraction yield from different extraction
methods
The proximate lipid content of four insect species was determined
on live weight basis by using Folch, Soxhlet and an aqueous based
method (Table 1). Extracted yield was calculated based on total lipid
content of SLE/FLE as well as that of ALE/FLE (Table 1). The proximate
total lipid content of four insect species ranged from 1.6 to 7.8% using
aqueous extraction, from 6.0 to 12.7% using Soxhlet extraction and
from 7.5 to 12.9% for Folch extraction. As expected, the highest quantities
of lipids were obtained using Folch extraction aswell as Soxhlet extraction,
and the least amounts were extracted using the aqueous
method. No significant difference on lipid content was seen between
Soxhlet and Folch extractions, except for A. domesticus (p b 0.001).
The lipid content obtained by aqueous method was significantly different
from Soxhlet and Folch (Table 1). Aqueous extraction led to 40.9,
58.3 and 60.3% of lipid yield (ALE/FLE) for B. dubia, A. diaperinus
T. molitor, respectively. In contrast, the lipid yield of A. dometicus was
only 19%. A similar trend was seen for Soxhlet extraction, with Soxhlet
extraction the lipid yield obtained was very close to the yield obtained
by Folch extraction, reaching almost 100% for T. molitor, A. diaperinus
and A. domesticus; however for B. dubia the lipid yield was only 74.8%.
The crude fat content of T. molitor was about 12.7 g/100 g fresh insects,
which is comparable to previous findings (Finke, 2002; Ghaly & Alkoaik,
2009; Jones, Cooper, & Harding, 1972). The crude fat content for
A. domesticus (adult) was comparable to the ranges described in literature,
which is approximately 6–7 g/100 g insects (Barker, Fitzpatrick,
& Dierenfeld, 1998; Finke, 2002). For A. diaperinus and B. dubia, no
crude fat data are available in the literature.
3.2. Chemical characterization: influence of extraction method on lipid
composition of insect lipid extracts
3.2.1. Fatty acid composition
The FA profiles found in the four insect species as analysed byGC-FID
(Table 2) are in accordance with the profiles found in previous studies
on lipids where high amounts of unsaturated FA (USFA) were found
relative to saturated FA (SFA) (Finke, 2002; Paoletti, 2005; Rumpold &
Schluter, 2013; Thompson, 1973). The most abundant USFA in each of
the four insect lipid extracts was C18:1 cis9 and C18:2 cis9,12; the
most abundant SFA was C16:0. These three FA accounted from 84.7 to
89.8 g/100 g of the FA in the lipid extracts (Table 2). In the four insect
species studied, the average amount of USFA ranged from 64 g/100 g
in A. diaperinus and A. domesticus to 75 g/100 g in T. molitor and
B. dubia. Other minor FA present in insect lipid extracts included trans,
ω -3 and CLA FA.
In the current study, C18:1 cis9 and C18:1 trans12, and C18:1 cis11
and C18:1 trans15 co-eluted in the GC column. Since the cis isomers
are the most abundant in nature we expect that the detected peak
in the chromatogram corresponds mainly to the cis isomers. Lately
the chromatographic techniques in lipid analysis had become more
powerful. Better isomer separations have been achieved and the detection
limit has dramatically decreased. Therefore, it is now possible to40 ° C หลังจากที่ปั่นสองไขมันโปร่งใสปราศจาก
สารสกัดที่ได้รับในชั้นบนของหลอดหมุนเหวี่ยง สอง
เศษส่วนอื่น ๆ ที่ได้รับเหล่านี้เป็นชั้นครีมบางและ
ชั้นล่างที่มีน้ำและสารที่ละลายน้ำได้ ปริมาณ
ของสารสกัดจากไขมันในน้ำ (เบียร์) ที่คำนวณได้ สารสกัดจากไขมัน
ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจนที่ -20 ° C ต่อการ
วิเคราะห์
2.1.4 อาหารไขมันสกัดด้วยวิธีหมักสกัด
อาหารแมลงก็แห้งจนมาถึงที่น้ำหนักคงที่
(GRI Vriesdroger, GR เครื่องมือ BV, วิก Duurstede,
เนเธอร์แลนด์) หลังจากนั้น lipidswere สกัดโดยใช้เครื่องมือวิธีการสกัดแบบ
6 ชั่วโมง (Biosolve, CAS Nr. 110-54-3) โดยใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์
(CAS Nr. 0101316465) เป็นตัวทำละลาย หลังจากนั้นปิโตรเลียมอีเทอร์ถูก
ลบออกโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน (R420, Buchi วิตเซอร์แลนด์) ที่
350 เอ็มบาร์ในอ่างน้ำที่ 40 ° C และเพิ่มขึ้นถึง 60 ° C ต่อไป
จนกว่าจะไม่มี solventwas เห็น ไขมัน extractswere เก็บไว้ภายใต้ไนโตรเจน
บรรยากาศที่ -20 ° C สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป การทดลองทั้งหมดถูก
ดำเนินการในที่ซ้ำกัน
2.2 สารเคมีลักษณะ
2.2.1 การกำหนดองค์ประกอบของกรดไขมัน
เอฟเอคัองค์ประกอบของสารสกัดจากไขมันจากสี่ชนิดของแมลงและ
แมลงฟีดถูกนำมาวิเคราะห์เป็นเมทิลเอสเตอร์ของกรดไขมัน (FAME) จัดทำ
โดย transesterification ให้สอดคล้องกับมาตรฐานสากล
ISO5509: 2000 (E) ความมุ่งมั่นขององค์ประกอบเอฟเอได้รับการดำเนินการ
โดยวิธีโครมาโตก๊าซกับไอออนไนซ์เปลวไฟ
เครื่องตรวจจับ (GC-FID) (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ติดตาม GC อัลตร้า) โดยใช้ WCOT
ผสมคอลัมน์ซิลิกา (100 เมตร× 0.25 มิลลิเมตร id เคลือบเลือกเกียรติยศ
Varian, เนเธอร์แลนด์ ) ให้สอดคล้องกับมาตรฐานสากล
ISO15885: 2002 (E) IDF184: 2002 (E)
2.2.2 การกำหนดคุณภาพของการเรียนไขมัน
กำหนดคุณภาพของการเรียนไขมันของสารสกัดจากไขมันแมลง
ก็ประสบความสำเร็จโดยโคซิลิกาเจลชั้นบาง (TLC) สกัด
ไขมันและสารอ้างอิงถูกกลืนหายไปในไดคลอโรมีเทน
(40 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร) ในระยะสั้น 5 ไมโครลิตรของสารสกัดจากไขมันและสารอ้างอิงที่ถูก
นำไปใช้ในจุดที่แผ่นซิลิกาเจล 20 × 20 ซม, ที่มีความหนา
500 ไมครอน (Analtech อิงค์นิวอาร์, DE) แผ่นถูกพัฒนาขึ้นใน
ห้องกระจกโดยใช้เฮกเซน / อีเทอร์ / กรดอะซิติก (70: 30: 1, v / v)
ระยะ Asmobile (Kaluzny ดันแคน, ริตต์และ Epps, 1985) ต่อไปนี้
การอ้างอิงสำหรับการเรียนไขมันถูกนำมาใช้: L-α-phosphatidylcholine
. (CAS ไม่มี 8002-43-5) สำหรับฟอสโฟ monopalmitin (CAS ไม่มี
32899-41-5) สำหรับ monoacylglycerols, dipalmitin (CAS ไม่มี 26657-95-.
4) สำหรับ diacylglycerols คอเลสเตอรอลฟรี (ไม่มี CAS. 57-88-5) ฟรี
sterols, กรดปาล์มิติก (CAS Nr. 57-10-3) กรดไขมันอิสระ (FFA)
tripalmitin (CAS Nr. 555-44- 2) สำหรับ triacylglycerols และ Cholesteryl
butyrate (ไม่มี CAS. 521-13-1) สำหรับ sterols ไอโอดีนไอ (CAS ไม่มี
7553-56-2) ถูกนำมาใช้เพื่อแสดงให้เห็นถึงการเรียนไขมัน
2.2.3 ความมุ่งมั่นของ triacylglycerol (TAG) รายละเอียดโดยคาร์บอนเทียบเท่า
จำนวน (ECN)
จำนวนคาร์บอนเทียบเท่า (ECN) ถูกกำหนดไว้ในไขมันแมลง
สารสกัดจาก ECN คือความมุ่งมั่นเชิงปริมาณของการกระจายขนาด
ของแท็กในไขมัน ข้อมูลเหล่านี้จะเติมเต็มขององค์ประกอบเอฟเอ
กำหนดรายละเอียด TAG ได้รับการดำเนินการโดยวิธีการ
แก๊สโครมากับเครื่องตรวจจับเปลวไฟไอออนไนซ์ (GC-FID) (CP-380,
Varian) โดยใช้ WCOT SimDist ผสมคอลัมน์ซิลิกา (5 เมตร× 0.53 มิลลิเมตร
id, DF = 0,17 ไมโครเมตร Varian, เนเธอร์แลนด์) ให้สอดคล้องกับ
วิธีการอ้างอิงของ ComissionRegulation (EU) No.273 / 2008 ภาคผนวก XX
อ้างอิงได้รับการรับรองของแท็กที่มีความหลากหลายของ TAG (จาก 24
ถึง 54 ก๊อบปี้ ) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานการสอบเทียบ (IRMM / BCR519, Fluka,
เนเธอร์แลนด์) ECN ของ triacylglycerol เป็นวิธีทางอ้อมเพื่อ
กำหนดน้ำหนักโมเลกุลของ TAG เพราะมันมีความเกี่ยวข้องกับ
จำนวนของคาร์บอนและจำนวนของพันธะคู่ใน TAG
ECN จะถูกกำหนดโดยเครือข่ายอนุรักษ์ช้างสูตร = N-2n inwhich N คือ จำนวน
ของอะตอมคาร์บอนในสามเอฟเอที่ทำขึ้น TAG และ 'n' เป็น
จำนวนรวมของพันธะคู่อยู่ในแท็ก (คริสตี้และฮัน, 2010)
2.3 การวิเคราะห์ทางสถิติ
ในการทดสอบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างวิธีการสกัดที่
สองทาง ANOVA ได้ดำเนินการตาม pos เฉพาะกิจการทดสอบ LSD IBM
ซอฟแวร์โปรแกรม SPSS สถิติ (รุ่น 21; ไอบีเอ็มคอร์ป, อาร์ม, นิวยอร์ก) ถูก
นำมาใช้ ระดับนัยสำคัญของ PB 0.05 ถูกนำมาใช้ตลอดการศึกษา
3 ผลลัพธ์และการอภิปราย
3.1 ไขมันรวมและผลผลิตสกัดจากการสกัดที่แตกต่างกัน
วิธีการ
ไขมันใกล้เคียงสี่แมลงสายพันธุ์ที่ถูกกำหนด
บนพื้นฐานน้ำหนักสดโดยใช้ Folch, วิธีหมักและน้ำตาม
วิธีการ (ตารางที่ 1) ผลผลิตที่สกัดได้เมื่อคำนวณจากไขมันรวม
เนื้อหาของ SLE / FLE เช่นเดียวกับที่ ALE / FLE (ตารางที่ 1) ใกล้เคียง
ไขมันรวมเป็นสี่แมลงสายพันธุ์ที่อยู่ในช่วง 1.6-7.8% โดยใช้
การสกัดน้ำ 6.0-12.7% โดยใช้วิธีการสกัดแบบการสกัดและ
7.5-12.9% สำหรับการสกัด Folch คาดว่าจะเป็นปริมาณที่สูงที่สุด
ของไขมันที่ได้รับใช้ Folch สกัดตลอดจนการสกัดวิธีการสกัดแบบ,
และจำนวนน้อยถูกสกัดโดยใช้น้ำ
วิธี ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญต่อปริมาณไขมันที่เห็นระหว่าง
วิธีการสกัดแบบและ Folch สกัดยกเว้น A. domesticus (Pb 0.001)
ไขมันที่ได้จากวิธีการน้ำอย่างมีนัยสำคัญที่แตกต่าง
จากวิธีการสกัดแบบและ Folch (ตารางที่ 1) สกัดน้ำนำไปสู่การ 40.9,
58.3 และ 60.3% จากอัตราผลตอบแทนของไขมัน (ALE / FLE) สำหรับบี dubia, A. diaperinus
ต molitor ตามลำดับ ในทางตรงกันข้ามผลตอบแทนไขมันของ A. dometicus เป็น
เพียง 19% แนวโน้มที่คล้ายกันก็เห็นในการสกัดวิธีการสกัดแบบด้วยวิธีการสกัดแบบ
สกัดไขมันที่ได้อยู่ใกล้กับผลตอบแทนที่ได้รับ
โดยการสกัด Folch ถึงเกือบ 100% สำหรับ molitor ตอ diaperinus
และ A. domesticus; แต่สำหรับบี dubia ผลผลิตไขมันเป็นเพียง 74.8%
ปริมาณไขมันดิบของ T. molitor ประมาณ 12.7 กรัม / 100 กรัมแมลงสด
ซึ่งเทียบได้กับผลการวิจัยก่อนหน้า (Finke 2002; Ghaly & Alkoaik,
2009; โจนส์ คูเปอร์และฮาร์ดิง, 1972) ปริมาณไขมันดิบ
A. domesticus (ผู้ใหญ่) เป็นช่วงที่ใกล้เคียงกับที่อธิบายไว้ในวรรณกรรม
ซึ่งมีประมาณ 6-7 กรัม / 100 กรัมแมลง (บาร์คเกอร์ฟิทซ์
และ Dierenfeld 1998; Finke, 2002) สำหรับเอ diaperinus และ B dubia ไม่มี
ข้อมูลไขมันดิบที่มีอยู่ในวรรณคดี
3.2 ลักษณะทางเคมี: อิทธิพลของวิธีการสกัดไขมันใน
องค์ประกอบของไขมันสารสกัดจากแมลง
3.2.1 องค์ประกอบของกรดไขมัน
โปรไฟล์เอฟเอที่พบในสี่แมลงสายพันธุ์ที่เป็นวิเคราะห์ byGC-FID
(ตารางที่ 2) เป็นไปตามรูปแบบที่พบในการศึกษาก่อนหน้า
เกี่ยวกับไขมันที่จำนวนเงินที่สูงของเอฟเอไม่อิ่มตัว (USFA) พบว่า
เมื่อเทียบกับเอฟเอคัอิ่มตัว (SFA ) (Finke 2002; Paoletti 2005; Rumpold และ
Schluter, 2013; ธ อมป์สัน, 1973) ที่มีมากที่สุด USFA ในแต่ละ
สี่สารสกัดจากไขมันแมลงเป็น C18: 1 cis9 และ C18: 2 cis9,12;
ที่มีมากที่สุด SFA เป็น C16: 0 ทั้งสามเอฟเอคิดจาก 84.7 ถึง
89.8 กรัม / 100 กรัมของเอฟเอในสารสกัดจากไขมัน (ตารางที่ 2) ในสี่แมลง
สายพันธุ์ที่ศึกษาจำนวนเงินเฉลี่ยของ USFA ตั้งแต่ 64 กรัม / 100 กรัม
ใน A. diaperinus และ A. domesticus ถึง 75 กรัม / 100 กรัมใน molitor ตและ
บี dubia อื่น ๆ ที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะปัจจุบันเอฟเอในสารสกัดจากไขมันแมลงรวมทรานส์
ω -3 และ CLA เอฟเอ
ในการศึกษาในปัจจุบัน C18: 1 cis9 และ C18: 1 trans12 และ C18: 1 cis11
และ C18: 1 trans15 ร่วมชะในคอลัมน์ GC . ตั้งแต่ isomers ถูกต้อง
มีความอุดมสมบูรณ์มากที่สุดในธรรมชาติที่เราคาดหวังว่ายอดเขาที่ตรวจพบ
ใน chromatogram ตรงส่วนใหญ่จะ isomers ถูกต้อง เมื่อเร็ว ๆ นี้
เทคนิคโครมาในการวิเคราะห์ไขมันได้มากขึ้น
ที่มีประสิทธิภาพ ดีกว่าการแยก isomer ได้รับการประสบความสำเร็จและการตรวจสอบ
ขีด จำกัด ได้ลดลงอย่างมาก ดังนั้นจึงเป็นไปได้ที่จะ
การแปล กรุณารอสักครู่..
40 องศา หลังจากปั่นสองแยกไขมัน
รัสใสได้ในชั้นบนของไฟฟ้าท่อ ส่วนอีกสอง
ได้รับ เหล่านี้เป็นชั้นครีมบางและชั้นลด
ด้วยน้ำและละลายน้ำได้สารประกอบ ปริมาณของไขมัน ( สารสกัดน้ำ
เอล ) คือการคำนวณ ไขมันสกัด
ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจน 20 ° C −
เพิ่มเติม2.1.4 การวิเคราะห์ .
. ไขมันอาหารไขมันสกัดด้วยการสกัด
แมลงอาหารถูกแช่แข็งจนมาถึง
น้ำหนักคงที่ ( GRI vriesdroger ลดลง GR , ใช้ วิจน์ใกล้กับ duurstede ,
เนเธอร์แลนด์ ) หลังจากนั้น lipidswere สกัดโดยใช้เครื่องมือ 1
6 ชั่วโมง ( ไบโอโนเน็กซ์ CAS Nr
110-54-3 ) โดยใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์ ( CAS Nr 0101316465 ) เป็นตัวทำละลาย หลังจากนั้น ปิโตรเลียมอีเทอร์เป็น
ลบโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน ( 3 บูชิ , สวิตเซอร์แลนด์ )
350 มิลลิบาร์ในอ่างน้ำที่ 40 ° C และสูงขึ้นถึง 60 ° C
จนไม่มีตัวทำละลายเห็น ไขมัน extractswere เก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจน
ที่ 20 ° C −สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป ทุกการทดลองในการปฏิบัติซ้ำ
. . . คุณสมบัติทางเคมี
2.2.1 . การหาปริมาณกรดไขมัน
เอฟเอ องค์ประกอบของไขมันที่สกัดจากแมลงและแมลง 4 ชนิด
อาหารวิเคราะห์เป็นกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ ( ชื่อเสียง ) ที่เตรียมโดยกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่น
ตาม iso5509:2000 มาตรฐานนานาชาติ ( E ) การกำหนดองค์ประกอบของเอฟเอา
โดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟีกับเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์
เปลวไฟ ( gc-fid ) ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ติดตาม GC Ultra ) โดยใช้ wcot
รวมคอลัมน์ซิลิกา ( 100 m × 0.25 มิลลิเมตร เคลือบบัตร เลือกชื่อเสียง
Varian , เนเธอร์แลนด์ ) ให้สอดคล้องกับมาตรฐานระหว่างประเทศ iso15885:2002
( E ) idf184:2002 ( E )
2.2.2 . การกำหนดคุณภาพของไขมันชั้น
การตัดสินคุณภาพของชั้นไขมันของแมลงต่อสารสกัด
ทำโดยซิลิกาเจลบางๆ chromatography ( TLC ) สกัด
ไขมันและสารประกอบที่ละลายในการอ้างอิงเป็นสิ่ง
( 40 μกรัม / μ L ) ในสั้น , 5 μลิตรสารสกัดไขมันและสารประกอบที่ใช้ในจุดอ้างอิง
กับซิลิกาเจล แผ่น 20 × 20 เซนติเมตร มีความหนา
500 μ m ( analtech อิงค์ , Newark , DE ) จานถูกพัฒนาใน
แก้วห้องโดยใช้เฮกเซน / อีเทอร์ / กรดน้ำส้ม ( 70:30:1 , V / V )
เฟส asmobile ( kaluzny ดันแคน เมอร์ริตต์& , เอฟ ,1985 ) ต่อไปนี้
อ้างอิงไขมัน การเรียนที่ใช้ : L - แอลฟาฟอสฟาติดิลโคลีน
( CAS Nr 8002-43-5 ด monopalmitin ( CAS ) , Nr .
32899-41-5 monoacylglycerols dipalmitin ( CAS ) , Nr 26657-95 -
4 ) สำหรับ diacylglycerols คอเลสเตอรอลฟรี ( CAS Nr 57-88-5 ) สเตอรอลฟรี
, กรดปาล์มิติก ( 57-10-3 Nr . ) สำหรับกรดไขมันอิสระ ( FFA )
tripalmitin ( CAS Nr .555-44-2 ) ไตรกลีเซอรอล และคอเล
บิว ( CAS Nr 521-13-1 ) สเตอรอล . ไอโอดีน ( CAS Nr
7553-56-2 ) คือใช้ในการเปิดเผยของชั้นเรียน .
2.2.3 . การกำหนด triacylglycerol ( แท็ก ) โปรไฟล์โดยเทียบเท่าคาร์บอน ( ECN )
เลขจำนวนคาร์บอนเทียบเท่า ( ECN ) เป็นสารสกัดจากแมลงไว้ในไขมัน
ECN คือการวิเคราะห์ปริมาณการกระจายขนาด
ของแท็กในไขมัน . ข้อมูลเพิ่มเติมของ เอฟเอ องค์ประกอบ การกำหนดแท็ก
โปรไฟล์กระทำโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟีกับเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์
เปลวไฟ ( gc-fid ) ( cp-380
, เครื่อง ) ใช้ wcot simdist ผสมคอลัมน์ซิลิกา ( 5 m × 0.53 mm
บัตร , df = 0,17 μ M , เครื่อง , เนเธอร์แลนด์ ) ตามวิธีมาตรฐานของ comissionregulation
( EC ) ไม่273 / 2551 ภาคผนวก X .
อ้างอิงที่ได้รับการรับรองของแท็กที่มีช่วงกว้างของแท็ก ( จาก 24
54 ด้วย ) มาใช้เป็นมาตรฐานการสอบเทียบ ( irmm / bcr519 fluka
, , เนเธอร์แลนด์ ) ECN ของ triacylglycerol เป็นวิธีทางอ้อม
หาน้ำหนักโมเลกุลของแท็ก เพราะมันเกี่ยวข้องกับ
จำนวนคาร์บอนและจำนวนของพันธบัตรเดิม ในแท็ก .
ECN จะถูกกำหนดโดยสูตร ECN = n − 2 โดย n คือจำนวนของคาร์บอนอะตอมใน
3 ฟ้าที่ทำให้แท็ก ' n '
จำนวนพันธบัตรเดิมที่มีอยู่ในแท็ก ( คริสตี้&ฮัน , 2010 ) .
2.3 สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลเพื่อทดสอบความแตกต่าง
ระหว่างวิธีการสกัด 2 วิธี ANOVA แสดงตาม POS เฉพาะกิจ LSD test IBM
สถิติซอฟต์แวร์ ( รุ่น 21 ; IBM Corp . , คานส์ , NY ) คือ
ใช้ . เป็นระดับนัยสำคัญ P B อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับ . 05 คือ ใช้ระยะเวลาศึกษา .
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ไขมันทั้งหมดและการสกัดผลผลิตที่ได้จากการสกัดด้วยวิธีต่าง ๆ กัน
ปริมาณไขมันของแมลง 4 ชนิดคือมุ่งมั่น
สดน้ำหนักพื้นฐานโดยใช้ฟอล์ช 1 , และโดยวิธีการตาม
( ตารางที่ 1 )สกัดผลผลิตคำนวณบนพื้นฐานของไขมัน
รวมของโรค SLE / fle เช่นเดียวกับที่ของเบียร์ / fle ( ตารางที่ 1 ) ที่ใกล้เคียง
รวมไขมันของแมลง 4 ชนิดอยู่ระหว่าง 1.6 กับ 7.8 % โดยใช้การสกัดสารละลาย
จาก 6.0 ถึง 12.7% และการสกัดไขมัน
จาก 7.5 12.9 % สำหรับการสกัดฟอล์ช . ตามที่คาดไว้ , สูงสุดปริมาณ
ของไขมันที่ได้รับการสกัดและแยกฟอล์ช 1
, และปริมาณน้อย คือ สกัดโดยใช้น้ำ
ไม่มีความแตกต่างในไขมันที่เห็นระหว่าง
1 และ ฟอล์ชสกัด ยกเว้น A ( P B เลี้ยง พบว่า ปริมาณไขมันที่ได้จากวิธี
จาก 1 โดยมีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ และฟอล์ช ( ตารางที่ 1 )การสกัดแยกและทำให้ร้อยละ 58.3 %
, สถิติของผลผลิต ( เบียร์ / fle ) พ. สามชนิดที่ อ. diaperinus
T . โมลิเตอร์ ตามลำดับ ในทางตรงกันข้ามไขมันผลผลิต . dometicus คือ
เพียง 19 % แนวโน้มที่คล้ายกันคือเห็นในการสกัดไขมันกับไขมัน
การสกัดไขมันผลผลิตใกล้เคียงกับผลผลิต
โดยการสกัดฟอล์ช ถึงเกือบ 100 % ต. โมลิเตอร์ อ. diaperinus
และเลี้ยง อย่างไรก็ตาม สำหรับ บี สามชนิดไขมันให้ผลแค่ 74.8 ล้านบาท ปริมาณไขมันดิบของ T .
โมลิเตอร์ประมาณ 12.7 กรัม / 100 กรัม แมลงสด ซึ่งเปรียบได้กับข้อมูลก่อนหน้านี้
( Finke , 2002 ; กาลี& alkoaik
2009 ; , โจนส์ , คูเปอร์ &ฮาร์ดิง , 1972 ) ปริมาณไขมันดิบสำหรับ
. เลี้ยง ( ผู้ใหญ่ ) ก็เทียบได้กับช่วงที่อธิบายไว้ในวรรณกรรม
ซึ่งมีประมาณ 6 – 7 กรัม / 100 กรัม แมลง ( Barker ฟิตซ์แพตทริค
& dierenfeld , 1998 ; ทาง , 2002 ) . diaperinus และ สามชนิด ไม่
ข้อมูลไขมันดิบที่มีอยู่ในวรรณคดี .
2 . ลักษณะทางเคมี : อิทธิพลของวิธีการสกัดต่อองค์ประกอบไขมันสกัดไขมัน
แมลงดำเนินงาน . กรดไขมัน
เอฟเอ โปรไฟล์ที่พบในแมลงชนิดนี้เป็นแบบสี่ bygc FID
( ตารางที่ 2 ) ให้สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ที่พบใน
โปรไฟล์ของกรดไขมันไม่อิ่มตัวในปริมาณสูง ไขมันที่ฟ้า ( usfa ) พบ
เมื่อเทียบกับ FA ( ไขมันอิ่มตัว ( SFA ) ทาง , 2002 ; เปาเลทติ , 2005 ; rumpold &
ชลูเตอร์ 2013 ; Thompson , 1973 ) การ usfa ชุกชุมมากที่สุดในแต่ละ
4 สารสกัดจากแมลงเป็นไขมันและที่ทำการ cis9 C18 cis9,12 ;
ชุกชุมที่สุด SFA เป็น c16:0 .ทั้งสาม ฟ้าคิด
89.8 จาก 81.9 กรัม / 100 กรัมของเอฟเอ ในไขมันสกัด ( ตารางที่ 2 ) ในสี่แมลง
ชนิดที่ศึกษา มีค่าเฉลี่ย usfa 64 g / 100 g
. diaperinus . เลี้ยง และ 75 กรัม / 100 กรัมใน โมลิเตอร์
B และสามชนิด . ปัจจุบันรองฟ้าอื่น ๆสารสกัดไขมันรวมแมลง Trans
ω - 3 และ CLA FA .
ในการศึกษาปัจจุบัน และ trans12 ที่ทำการที่ทำการ cis9 ,ที่ทำการ cis11
และที่ทำการ trans15 Co และตัวอย่างใน GC คอลัมน์ ตั้งแต่ CIS ไอโซเมอร์
จะชุกชุมมากที่สุดในธรรมชาติ เราคาดหวังว่าตรวจพบยอด
ในโครมาสอดคล้องกับแหล่งข่าวส่วนใหญ่คือ เทคนิคทางโครมาโทกราฟี การวิเคราะห์นี้
และได้กลายเป็นที่มีประสิทธิภาพ ดีกว่าไอโซเมอร์แยกได้รับความการกำหนดอย่างมาก
และได้ลดลง ดังนั้นขณะนี้เป็นไปได้
รัสใสได้ในชั้นบนของไฟฟ้าท่อ ส่วนอีกสอง
ได้รับ เหล่านี้เป็นชั้นครีมบางและชั้นลด
ด้วยน้ำและละลายน้ำได้สารประกอบ ปริมาณของไขมัน ( สารสกัดน้ำ
เอล ) คือการคำนวณ ไขมันสกัด
ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจน 20 ° C −
เพิ่มเติม2.1.4 การวิเคราะห์ .
. ไขมันอาหารไขมันสกัดด้วยการสกัด
แมลงอาหารถูกแช่แข็งจนมาถึง
น้ำหนักคงที่ ( GRI vriesdroger ลดลง GR , ใช้ วิจน์ใกล้กับ duurstede ,
เนเธอร์แลนด์ ) หลังจากนั้น lipidswere สกัดโดยใช้เครื่องมือ 1
6 ชั่วโมง ( ไบโอโนเน็กซ์ CAS Nr
110-54-3 ) โดยใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์ ( CAS Nr 0101316465 ) เป็นตัวทำละลาย หลังจากนั้น ปิโตรเลียมอีเทอร์เป็น
ลบโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน ( 3 บูชิ , สวิตเซอร์แลนด์ )
350 มิลลิบาร์ในอ่างน้ำที่ 40 ° C และสูงขึ้นถึง 60 ° C
จนไม่มีตัวทำละลายเห็น ไขมัน extractswere เก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจน
ที่ 20 ° C −สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป ทุกการทดลองในการปฏิบัติซ้ำ
. . . คุณสมบัติทางเคมี
2.2.1 . การหาปริมาณกรดไขมัน
เอฟเอ องค์ประกอบของไขมันที่สกัดจากแมลงและแมลง 4 ชนิด
อาหารวิเคราะห์เป็นกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ ( ชื่อเสียง ) ที่เตรียมโดยกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่น
ตาม iso5509:2000 มาตรฐานนานาชาติ ( E ) การกำหนดองค์ประกอบของเอฟเอา
โดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟีกับเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์
เปลวไฟ ( gc-fid ) ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ติดตาม GC Ultra ) โดยใช้ wcot
รวมคอลัมน์ซิลิกา ( 100 m × 0.25 มิลลิเมตร เคลือบบัตร เลือกชื่อเสียง
Varian , เนเธอร์แลนด์ ) ให้สอดคล้องกับมาตรฐานระหว่างประเทศ iso15885:2002
( E ) idf184:2002 ( E )
2.2.2 . การกำหนดคุณภาพของไขมันชั้น
การตัดสินคุณภาพของชั้นไขมันของแมลงต่อสารสกัด
ทำโดยซิลิกาเจลบางๆ chromatography ( TLC ) สกัด
ไขมันและสารประกอบที่ละลายในการอ้างอิงเป็นสิ่ง
( 40 μกรัม / μ L ) ในสั้น , 5 μลิตรสารสกัดไขมันและสารประกอบที่ใช้ในจุดอ้างอิง
กับซิลิกาเจล แผ่น 20 × 20 เซนติเมตร มีความหนา
500 μ m ( analtech อิงค์ , Newark , DE ) จานถูกพัฒนาใน
แก้วห้องโดยใช้เฮกเซน / อีเทอร์ / กรดน้ำส้ม ( 70:30:1 , V / V )
เฟส asmobile ( kaluzny ดันแคน เมอร์ริตต์& , เอฟ ,1985 ) ต่อไปนี้
อ้างอิงไขมัน การเรียนที่ใช้ : L - แอลฟาฟอสฟาติดิลโคลีน
( CAS Nr 8002-43-5 ด monopalmitin ( CAS ) , Nr .
32899-41-5 monoacylglycerols dipalmitin ( CAS ) , Nr 26657-95 -
4 ) สำหรับ diacylglycerols คอเลสเตอรอลฟรี ( CAS Nr 57-88-5 ) สเตอรอลฟรี
, กรดปาล์มิติก ( 57-10-3 Nr . ) สำหรับกรดไขมันอิสระ ( FFA )
tripalmitin ( CAS Nr .555-44-2 ) ไตรกลีเซอรอล และคอเล
บิว ( CAS Nr 521-13-1 ) สเตอรอล . ไอโอดีน ( CAS Nr
7553-56-2 ) คือใช้ในการเปิดเผยของชั้นเรียน .
2.2.3 . การกำหนด triacylglycerol ( แท็ก ) โปรไฟล์โดยเทียบเท่าคาร์บอน ( ECN )
เลขจำนวนคาร์บอนเทียบเท่า ( ECN ) เป็นสารสกัดจากแมลงไว้ในไขมัน
ECN คือการวิเคราะห์ปริมาณการกระจายขนาด
ของแท็กในไขมัน . ข้อมูลเพิ่มเติมของ เอฟเอ องค์ประกอบ การกำหนดแท็ก
โปรไฟล์กระทำโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟีกับเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์
เปลวไฟ ( gc-fid ) ( cp-380
, เครื่อง ) ใช้ wcot simdist ผสมคอลัมน์ซิลิกา ( 5 m × 0.53 mm
บัตร , df = 0,17 μ M , เครื่อง , เนเธอร์แลนด์ ) ตามวิธีมาตรฐานของ comissionregulation
( EC ) ไม่273 / 2551 ภาคผนวก X .
อ้างอิงที่ได้รับการรับรองของแท็กที่มีช่วงกว้างของแท็ก ( จาก 24
54 ด้วย ) มาใช้เป็นมาตรฐานการสอบเทียบ ( irmm / bcr519 fluka
, , เนเธอร์แลนด์ ) ECN ของ triacylglycerol เป็นวิธีทางอ้อม
หาน้ำหนักโมเลกุลของแท็ก เพราะมันเกี่ยวข้องกับ
จำนวนคาร์บอนและจำนวนของพันธบัตรเดิม ในแท็ก .
ECN จะถูกกำหนดโดยสูตร ECN = n − 2 โดย n คือจำนวนของคาร์บอนอะตอมใน
3 ฟ้าที่ทำให้แท็ก ' n '
จำนวนพันธบัตรเดิมที่มีอยู่ในแท็ก ( คริสตี้&ฮัน , 2010 ) .
2.3 สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลเพื่อทดสอบความแตกต่าง
ระหว่างวิธีการสกัด 2 วิธี ANOVA แสดงตาม POS เฉพาะกิจ LSD test IBM
สถิติซอฟต์แวร์ ( รุ่น 21 ; IBM Corp . , คานส์ , NY ) คือ
ใช้ . เป็นระดับนัยสำคัญ P B อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับ . 05 คือ ใช้ระยะเวลาศึกษา .
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ไขมันทั้งหมดและการสกัดผลผลิตที่ได้จากการสกัดด้วยวิธีต่าง ๆ กัน
ปริมาณไขมันของแมลง 4 ชนิดคือมุ่งมั่น
สดน้ำหนักพื้นฐานโดยใช้ฟอล์ช 1 , และโดยวิธีการตาม
( ตารางที่ 1 )สกัดผลผลิตคำนวณบนพื้นฐานของไขมัน
รวมของโรค SLE / fle เช่นเดียวกับที่ของเบียร์ / fle ( ตารางที่ 1 ) ที่ใกล้เคียง
รวมไขมันของแมลง 4 ชนิดอยู่ระหว่าง 1.6 กับ 7.8 % โดยใช้การสกัดสารละลาย
จาก 6.0 ถึง 12.7% และการสกัดไขมัน
จาก 7.5 12.9 % สำหรับการสกัดฟอล์ช . ตามที่คาดไว้ , สูงสุดปริมาณ
ของไขมันที่ได้รับการสกัดและแยกฟอล์ช 1
, และปริมาณน้อย คือ สกัดโดยใช้น้ำ
ไม่มีความแตกต่างในไขมันที่เห็นระหว่าง
1 และ ฟอล์ชสกัด ยกเว้น A ( P B เลี้ยง พบว่า ปริมาณไขมันที่ได้จากวิธี
จาก 1 โดยมีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ และฟอล์ช ( ตารางที่ 1 )การสกัดแยกและทำให้ร้อยละ 58.3 %
, สถิติของผลผลิต ( เบียร์ / fle ) พ. สามชนิดที่ อ. diaperinus
T . โมลิเตอร์ ตามลำดับ ในทางตรงกันข้ามไขมันผลผลิต . dometicus คือ
เพียง 19 % แนวโน้มที่คล้ายกันคือเห็นในการสกัดไขมันกับไขมัน
การสกัดไขมันผลผลิตใกล้เคียงกับผลผลิต
โดยการสกัดฟอล์ช ถึงเกือบ 100 % ต. โมลิเตอร์ อ. diaperinus
และเลี้ยง อย่างไรก็ตาม สำหรับ บี สามชนิดไขมันให้ผลแค่ 74.8 ล้านบาท ปริมาณไขมันดิบของ T .
โมลิเตอร์ประมาณ 12.7 กรัม / 100 กรัม แมลงสด ซึ่งเปรียบได้กับข้อมูลก่อนหน้านี้
( Finke , 2002 ; กาลี& alkoaik
2009 ; , โจนส์ , คูเปอร์ &ฮาร์ดิง , 1972 ) ปริมาณไขมันดิบสำหรับ
. เลี้ยง ( ผู้ใหญ่ ) ก็เทียบได้กับช่วงที่อธิบายไว้ในวรรณกรรม
ซึ่งมีประมาณ 6 – 7 กรัม / 100 กรัม แมลง ( Barker ฟิตซ์แพตทริค
& dierenfeld , 1998 ; ทาง , 2002 ) . diaperinus และ สามชนิด ไม่
ข้อมูลไขมันดิบที่มีอยู่ในวรรณคดี .
2 . ลักษณะทางเคมี : อิทธิพลของวิธีการสกัดต่อองค์ประกอบไขมันสกัดไขมัน
แมลงดำเนินงาน . กรดไขมัน
เอฟเอ โปรไฟล์ที่พบในแมลงชนิดนี้เป็นแบบสี่ bygc FID
( ตารางที่ 2 ) ให้สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ที่พบใน
โปรไฟล์ของกรดไขมันไม่อิ่มตัวในปริมาณสูง ไขมันที่ฟ้า ( usfa ) พบ
เมื่อเทียบกับ FA ( ไขมันอิ่มตัว ( SFA ) ทาง , 2002 ; เปาเลทติ , 2005 ; rumpold &
ชลูเตอร์ 2013 ; Thompson , 1973 ) การ usfa ชุกชุมมากที่สุดในแต่ละ
4 สารสกัดจากแมลงเป็นไขมันและที่ทำการ cis9 C18 cis9,12 ;
ชุกชุมที่สุด SFA เป็น c16:0 .ทั้งสาม ฟ้าคิด
89.8 จาก 81.9 กรัม / 100 กรัมของเอฟเอ ในไขมันสกัด ( ตารางที่ 2 ) ในสี่แมลง
ชนิดที่ศึกษา มีค่าเฉลี่ย usfa 64 g / 100 g
. diaperinus . เลี้ยง และ 75 กรัม / 100 กรัมใน โมลิเตอร์
B และสามชนิด . ปัจจุบันรองฟ้าอื่น ๆสารสกัดไขมันรวมแมลง Trans
ω - 3 และ CLA FA .
ในการศึกษาปัจจุบัน และ trans12 ที่ทำการที่ทำการ cis9 ,ที่ทำการ cis11
และที่ทำการ trans15 Co และตัวอย่างใน GC คอลัมน์ ตั้งแต่ CIS ไอโซเมอร์
จะชุกชุมมากที่สุดในธรรมชาติ เราคาดหวังว่าตรวจพบยอด
ในโครมาสอดคล้องกับแหล่งข่าวส่วนใหญ่คือ เทคนิคทางโครมาโทกราฟี การวิเคราะห์นี้
และได้กลายเป็นที่มีประสิทธิภาพ ดีกว่าไอโซเมอร์แยกได้รับความการกำหนดอย่างมาก
และได้ลดลง ดังนั้นขณะนี้เป็นไปได้
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- สาขาวิชาการบัญชีครูผู้สอนมีกี่คน
- May grow
- soak
- One example of the interaction between a
- someone doesn't realize our mind,just ki
- คุณไม่ใช่มนุษย์ไฟฟ้า
- the surface smooth, feel physically fit,
- i wish i had enjoyed it the hotel where
- Deal
- At 20 c,the balance between ROS producti
- ฉันจะเก็บความออ่นแอไว้กับตัวเองไม่ให้ใคร
- Specific
- ค่าโทรศัพท์ค้างจ่าย
- ฉันจะเก็บความออ่นแอไว้กับตัวเองไม่ให้ใคร
- It is not important my love i love you
- yes, but the past video does not load th
- My love soon me and you will eat togethe
- I dont deserve u..
- คุณมีงานด่วนเหรอ
- ฉันซื้อสร้อยข้อมือทองค่ะ เพราะว่ามันจะอย
- my sun is now an intimate question for y
- Boy likes me very much.
- ใช่ ฉันชอบวงExo
- l eat food thailand very hot and spicy i
