Kunkel's method[edit]In 1987, Thoma

Kunkel's method[edit]
In 1987, Thomas Kunkel introduced a technique that reduces the need to select for the mutants.[12] The DNA fragment to be mutated is inserted into a phagemid such as M13mp18/19 and is then transformed into an E. coli strain deficient in two enzymes, dUTPase (dut) and uracil deglycosidase (ung). Both enzymes are part of a DNA repair pathway that protects the bacterial chromosome from mutations by the spontaneous deamination of dCTP to dUTP. The dUTPase deficiency prevents the breakdown of dUTP, resulting in a high level of dUTP in the cell. The uracil deglycosidase deficiency prevents the removal of uracil from newly synthesized DNA. As the double-mutant E. coli replicates the phage DNA, its enzymatic machinery may, therefore, misincorporate dUTP instead of dTTP, resulting in single-strand DNA that contains some uracils (ssUDNA). The ssUDNA is extracted from the bacteriophage that is released into the medium, and then used as template for mutagenesis. An oligonucleotide containing the desired mutation is used for primer extension. The heteroduplex DNA, that forms, consists of one parental non-mutated strand containing dUTP and a mutated strand containing dTTP. The DNA is then transformed into an E. coli strain carrying the wildtype dut and ung genes. Here, the uracil-containing parental DNA strand is degraded, so that nearly all of the resulting DNA consists of the mutated strand. Thus mutation is induced.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการของเกิล [แก้ไข]
ในปี 1987 โทมัสเกิลแนะนำเทคนิคที่ช่วยลดความจำเป็นที่จะต้องเลือกสำหรับการกลายพันธุ์ได้. [12] ชิ้นดีเอ็นเอที่จะกลายพันธุ์จะถูกแทรกเข้าไป phagemid เช่น M13mp18 / 19 และจะเปลี่ยนแล้วเป็นอี coli สายพันธุ์ขาดสองเอนไซม์ dUTPase (DUT) และ uracil deglycosidase (อึ้ง) เอนไซม์ทั้งสองเป็นส่วนหนึ่งของทางเดินซ่อมแซมดีเอ็นเอที่ช่วยปกป้องโครโมโซมแบคทีเรียจากการกลายพันธุ์โดยธรรมชาติของ deamination dCTP เพื่อ dUTP ขาด dUTPase ป้องกันไม่ให้รายละเอียดของ dUTP ผลในระดับสูงของ dUTP ในเซลล์ uracil ขาด deglycosidase ป้องกันไม่ให้การกำจัดของ uracil จากดีเอ็นเอสังเคราะห์ใหม่ ในฐานะที่เป็นคู่กลายพันธุ์เชื้อ E. coli ซ้ำดีเอ็นเอทำลายจุลินทรีย์เครื่องจักรเอนไซม์ที่อาจจึง misincorporate dUTP แทน dTTP ผลในดีเอ็นเอเดียวที่มีสาระ uracils บางคน (ssUDNA) ssUDNA สกัดจากแบคทีเรียที่ถูกปล่อยออกสู่กลางและใช้เป็นแม่แบบสำหรับการกลายพันธุ์ oligonucleotide มีการกลายพันธุ์ที่ต้องการจะใช้สำหรับการขยายไพรเมอร์ ดีเอ็นเอ heteroduplex ที่รูปแบบประกอบด้วยหนึ่งของผู้ปกครองสาระที่ไม่กลายพันธุ์ที่มี dUTP และสาระกลายพันธุ์ที่มี dTTP ดีเอ็นเอจะเปลี่ยนแล้วเป็นสายพันธุ์เชื้อ E. coli ถือ DUT wildtype และยีนอึ้ง นี่ uracil ที่มีดีเอ็นเอของผู้ปกครองที่มีการสลายตัวเพื่อที่ว่าเกือบทั้งหมดของดีเอ็นเอที่เกิดขึ้นประกอบด้วยสาระกลายพันธุ์ ดังนั้นการกลายพันธุ์จะเหนี่ยวนำให้เกิด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คันเกิลแบบ [ แก้ไข ]
ใน 1987 , โทมัส คันเกิลแนะนำเทคนิคที่ช่วยลดความต้องการที่จะเลือกสำหรับมนุษย์กลายพันธุ์ [ 12 ] ดีเอ็นเอจะถูกแทรกลงใน phagemid กลายพันธุ์ เช่น m13mp18 / 19 แล้วแปลงเป็น E . coli สายพันธุ์ขาดสองเอนไซม์ dutpase ( ในการสั่งซื้อ ) และยูราซิล deglycosidase ( อัง )เอนไซม์ทั้งสองเป็นส่วนหนึ่งของดีเอ็นเอซ่อมแซมเส้นทางที่ปกป้องโครโมโซมแบคทีเรียจากการกลายพันธุ์โดยดีโดยธรรมชาติของ dctp ที่จะได้ . การ dutpase ขาดป้องกันการสลายของได้ผลในระดับสูงได้ในเซลล์ และยูราซิล deglycosidase ขาดป้องกันกำจัด Name ใหม่จากการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ เป็นคู่ที่กลายพันธุ์ .( แบบว่า ดีเอ็นเอ ของเอนไซม์เครื่องจักรอาจ ดังนั้น misincorporate ได้แทน dttp ผลดีเอ็นเอเส้นเดียวที่ประกอบด้วย uracils ( ssudna ) การ ssudna สกัดจากโรงพยาบาลที่ถูกปล่อยลงในสื่อ และใช้เป็นแม่แบบสำหรับการ . การ ซึ่งประกอบด้วยการใช้ไพรเมอร์ที่ต้องการขยายการ heteroduplex ดีเอ็นเอ ว่ารูปแบบ ประกอบด้วยผู้ปกครองไม่กลายพันธุ์ที่มีสาระและสาระได้กลายพันธุ์ที่มี dttp . ดีเอ็นเอแล้วแปลงเป็น E . coli สายพันธุ์แบก wildtype ในการสั่งซื้อและการใช้ยีน ที่นี่ , ยูราซิลที่มีเกลียวดีเอ็นเอผู้ปกครองคือการสลายตัวเพื่อให้เกือบทั้งหมดของผลดีเอ็นเอ ประกอบด้วย 9 กลุ่ม ดังนั้น การจะเกิด