Thirteen Plantago lanceolata (buckh

Thirteen Plantago lanceolata (buckhorn plantain) and 13 Rumex crispus (curly dock) plants were grown from seed in 0.5-
liter pots. Nine plants of both species were needle inoculated at the base of one leaf in each rosette with a 5-day-old culture of E.tracheiphila by the same needle inoculation technique described previously. Four plants of each species were wounded at the same location with a sterile needle as negative controls. Three weeks after inoculation,leaves and stems were harvested,surface sterilized, and ground in 2ml of ELISA sample buffer in mortar and pestles. Two hundred microliters of each of the ground, inoculated, plant samples was immediately pipetted into eight ELISA plate wells coated overnight at 4°C with a 1:100 dilution of anti-E. tracheiphila antibodies (one ELISA plate for each of the two species). Each of the four homogenized control samples of both species was pipetted into duplicate wells in the appropriate ELISA plate. A culture of E. tracheiphila grown on NAP and suspended in 10 ml of sample buffer was pipetted into eight wells of each plate as positive controls.Eight wells were filled with buffer as negative controls. The last eight wells of each plate were filled with equal parts of the suspended E. tracheiphila culture and the homogenized control plants of the appropriate plant species. This was to ensure that the curly dock and buckhorn plantain plant homogenates did not kill the bacteria during isolation. The samples were incubated in the antibody-coated ELISA plates for 1 h at room temperature and then rinsed
three times with PBS. All of the wells were then filled with 200 μl of NBP and incubated at room temperature for 5 days.
The contents of each well were streaked for isolation on NAP. After 5 days of incubation at room temperature the resulting
colonies with colony morphology resembling that of E. tracheiphila were tested with DAS-ELISA and needle inoculated
into cucumber seedlings to verify pathogenicity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สิบสาม Plantago lanceolata (Buckhorn กล้า) และ 13 Rumex Crispus (ท่าเรือหยิก) พืชที่ปลูกจากเมล็ดใน 0.5
หม้อลิตร เก้าพืชทั้งสองชนิดถูกเข็มเชื้อที่ฐานของใบหนึ่งในแต่ละดอกกุหลาบที่มีวัฒนธรรม 5 วันเก่าของ E.tracheiphila โดยใช้เทคนิคการฉีดวัคซีนเข็มเดียวที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ สี่พืชแต่ละชนิดได้รับบาดเจ็บในสถานที่เดียวกันด้วยเข็มผ่านการฆ่าเชื้อเป็นตัวควบคุมเชิงลบ สามสัปดาห์หลังจากฉีดวัคซีนใบและลำต้นผิวฆ่าเชื้อและพื้นดินใน 2ml ของบัฟเฟอร์ตัวอย่างวิธี ELISA ในครกและ pestles สองร้อยไมโครลิตรของแต่ละพื้นเชื้อ, ตัวอย่างพืชที่ได้รับการปิเปตทันทีเป็นแปดหลุม ELISA แผ่นเคลือบค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียสกับ 1: 100 ลดสัดส่วนของการต่อต้าน-E แอนติบอดี tracheiphila (หนึ่งในจาน ELISA สำหรับแต่ละของทั้งสองสายพันธุ์) แต่ละแห่งที่สี่ตัวอย่างควบคุมหดหายของทั้งสองสายพันธุ์ที่ได้รับการปิเปตลงไปในหลุมที่ซ้ำกันในจาน ELISA ที่เหมาะสม วัฒนธรรมของอี tracheiphila ปลูกใน NAP และระงับใน 10 มล. ของบัฟเฟอร์ตัวอย่างปิเปตเป็นแปดหลุมของแต่ละจานเป็นหลุม controls.Eight บวกเต็มไปด้วยบัฟเฟอร์ควบคุมเชิงลบ ที่ผ่านมาแปดหลุมของแต่ละจานที่เต็มไปด้วยส่วนเท่า ๆ กันของวัฒนธรรม tracheiphila อีระงับและพืชควบคุมหดหายของพันธุ์พืชที่เหมาะสม นี่คือเพื่อให้แน่ใจว่าหยิกท่าเรือและโรงงาน Buckhorn กล้า homogenates ไม่ได้ฆ่าเชื้อแบคทีเรียในระหว่างการแยก
กลุ่มตัวอย่างที่ถูกบ่มในแอนติบอดีเคลือบแผ่น ELISA เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องแล้วล้าง สามครั้งกับพีบีเอส ทุกหลุมเต็มไปแล้วกับ 200 ไมโครลิตรของ NBP และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 วัน
เนื้อหาของแต่ละดีถูกลายแยกบน NAP หลังวันที่ 5 ของการบ่มที่อุณหภูมิห้องที่เกิด
อาณานิคมกับอาณานิคมสัณฐานคล้ายอี tracheiphila ถูกนำมาทดสอบกับ DAS-ELISA และเข็มเชื้อ
เข้าสู่ต้นกล้าแตงกวาเพื่อตรวจสอบการเกิดโรค

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สิบสามแพลนตาโก lanceolata ( บักฮอร์นหน้าวัว ) และ 13 rumex Crispus ( หลั่งน้ำพระพุทธมนต์ ) พืชที่ปลูกจากเมล็ดใน 0.5 -ลิตรหม้อ เก้า พืชทั้งสองชนิดมีเข็ม หัวเชื้อที่ฐานของใบในแต่ละดอกกุหลาบกับ 5-day-old วัฒนธรรมของ e.tracheiphila โดยเดียวกันเข็มฉีดเทคนิคอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 4 พืชแต่ละชนิดได้รับบาดเจ็บ ณสถานที่เดียวกันกับเข็มปลอดเชื้อเป็นตัวควบคุมลบ สามสัปดาห์หลังจากที่ได้รับใบและลำต้นถูก harvested ฆ่าเชื้อที่ผิวและพื้นดินใน 2ml ของ Elisa ตัวอย่างบัฟเฟอร์ในครกและ pestles . 2 . ตัวเลขของแต่ละพื้นที่ปลูกพืชได้ทันที ตัวอย่าง pipetted เป็นแปดวิธีเคลือบแผ่นบ่อค้างคืนที่ 4 ° C กับ 100 เจือจาง anti-e. tracheiphila แอนติบอดี ( 1 ) แผ่นสำหรับแต่ละของทั้งสองชนิด ) แต่ละสี่บดควบคุมตัวอย่างทั้งสองชนิดคือ pipetted ลงในหลุมซ้ำในที่เหมาะสม + จาน วัฒนธรรมของ E . tracheiphila ปลูกบนนอน และแขวนลอยใน 10 มิลลิลิตร ลงในบัฟเฟอร์ pipetted ตัวอย่าง 8 บ่อแต่ละจานเป็นตัวควบคุมบวก แปดหลุมที่เต็มไปด้วยเฟอร์เป็นตัวควบคุมลบ ในช่วงแปดหลุมของแต่ละจานก็เท่ากับส่วนของถูก . tracheiphila วัฒนธรรมและบดการควบคุมของพืช ชนิดพืชที่เหมาะสม นี้คือเพื่อให้แน่ใจว่า ท่าเรือหยิกและบักฮอร์นต้นไม้พืช homogenates ไม่ได้ฆ่าแบคทีเรียในการแยก . ตัวอย่างที่บ่มในแผ่นเคลือบแอนติบอดี ( 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง แล้วล้างครั้งที่สามกับ PBS ทั้งหมดของบ่อ จึงเต็มไปด้วยμ 200 ลิตร NBP บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 วันเนื้อหาของแต่ละลายได้ดีในการนอนหลับ หลังจาก 5 วันของการบ่มที่อุณหภูมิห้องผลอาณานิคมอาณานิคมสัณฐานคล้ายของ E . tracheiphila มาทดสอบกับเชื้อ das-elisa และเข็มในต้นกล้าแตงกวาเพื่อตรวจสอบการ .