role in defining the colour and in

role in defining the colour and in developing organoleptic features
according to their proteolytic and lipolytic abilities.
Pursuant to the current Commission Regulation (EC) of 15
November 2005 as amended on microbiological criteria for foodstuffs
(EC Regulation No. 2073/2005), the hygiene criteria include
only the examination of the number of coagulase-positive staphylococci.
The acceptable limit of these bacteria in food has been
established as 105 cfu/g. The Regulation does not refer to the
occurrence of other Staphylococcus species in food. Food is often a
reservoir of these bacteria, and their common occurrence results
primarily from resistance to unfavourable environmental conditions
during the production processes, food storage and high
adaptation abilities of those micro-organisms (Chaje˛cka-
Wierzchowska et al., 2014).
The spread of resistance to antimicrobial agents in staphylococci
is largely due to the acquisition of plasmids and/or transposons
(Lozanoa et al., 2012). In staphylococci, the conjugative transfer of
resistance determinants is usually mediated by conjugative plasmids
which spread resistance determinants between species and
genera (Malachowa and DeLeo, 2010). Besides transferring the
resistance determinants, they can mobilize nonconjugative plasmids,
recombine with nonconjugative plasmids to form new plasmids,
or acquire and transfer resistance transposons (Khan et al.,
2000).
The resistance mechanism in methicillin resistance CoNS is
related to the presence of mecA gene. The mecA gene is located on a
mobile genetic element called Staphylococcal Cassette Chromosome
mec (SCCmec). Horizontal, interspecies transfer of this
element could be an important factor in the dissemination of
methicillin-resistant S. aureus (MRSA) (Bloemendaal et al., 2010).
Tetracycline resistance coded by a wide variety of determinants in
different staphylococcal species is also frequently encountered (De
Vries et al., 2009; Lim et al., 2012). The spread of antibiotic resistance
among CoNS (harbouring resistance genes) from ready to eat
food may represent a hazard for human health through transfer of
resistance genes between staphylococcal species, and through
direct transmission of resistant pathogens to humans (Walther and
Perreten, 2007).
The aim of this study was to determine phenotypic antimicrobial
resistance profiles of CoNS isolated from food of animal origin,
with emphasis on antibiotics of clinical relevance, i.e. b-lactams,
cefoxitin and macrolideelincosamideestreptogramins (MLS)
compounds; to assess associations between species and resistance
profiles furthermore detection of resistance gene tet(M), tet(K),
tet(L), erm(A), erm(B), erm(C), mrs(A/B) and mecA.
2. Materials and methods
2.1. Bacterial strains
Staphylococci were isolated from 146 samples obtained from
various retail ready-to-eat products from animal origin (cheeses,
cured meats, sausages, smoked fishes) obtained from several local
markets in Olsztyn, Poland. Food samples (10 g) were homogenized
in 90 ml buffered peptone water (Merck, Germany), incubated
overnight at 37 C and streaked on selective plates containing
Mannitol Salt Phenol-red Agar (Merck, Germany). Mannitol (þ)
colonies were differentiated into coagulase-positive and coagulasenegative
with a test detecting the production of a clumping factor
(Staphylase Test Kit, Oxoid, United Kingdom) and production of
coagulase on the RPF medium (Biomerieux, France) with rabbit
blood plasma and fibrinogen. After the initial phenotypic analysis,
coagulase-negative strains were identified at the genus level by the
Multiplex PCR method according to the protocols of Morot-Bizot
et al. (2004). DNA of the strains was isolated from single colonies.
The isolation kit applied was based on selective binding and elution
of nucleic acid on a mini column e Genomic Mini (A&A Biotechnology,
Poland), with previous stage of cell wall digestion (Lysostaphin
10 mg/ml) (A&A Biotechnology, Poland). Amplification was
carried out in a MJ Mini thermal cycler (BIO-RAD, Poland). The
research used starters synthesised in the Laboratory of DNA
Sequencing and Oligonucleotide Synthesis (Institute of Biochemistry
and Biophysics of the Polish Academy of Sciences in Warsaw,
Poland) e Table 1. Electrophoretic separation: 100 V e 5 min; 70 V
e 60 min (Cleaver Scientific, UK)was carried out on 1.5% agarose gel
(Promega, Poland) with the addition of ethidium bromide 0.5 mg/
10 ml (MP Biomedicals, Poland). Positive controls included reference
strains: S. aureus ATCC 43300, S. xylosus ATCC 29971,
S. saprophyticus ATCC 49453 and S. epidermidis ATCC 49461. Strains
identified by the PCR method only at the genus level were identified
using API STAPH (Biomerieux, France).
2.2. Phenotypic antibiotic resistance
Resistance to antibiotics was examined according to the guidelines
of the National Reference Centre for Antimicrobial Susceptibility
and internationally recognized standards of the Clinical and
Laboratory Standards Institute (CLSI, 2010). Determinations were
carried out using the diffusion disk method on Müeller-Hinton agar
(Merck, Germany). The following discs (Oxoid, Poland) were used:
erythromycin (E-15 mg), clindamycin (DA-2 mg), gentamicin (CN-
120 mg), cefoxitin (FOX-30 mg), norfloxacin (NOR-10 mg), ciprofloxacin
(CIP-5 mg), tetracycline (TE-30 mg), rifampicin (RD-5 mg),
nitrofurantoin (F-300 mg), linezolid (LZD-30 mg), chloramphenicol
(C-30 mg), trimetoprim (W-5 mg), trimetoprim/sulfamethoxazole
(SXT-25 mg), quinupristin/dalfopristin (QDA-15 mg), tigecycline
(TGC-1 mg). Escherichia coli ATCC 25922 and S. aureus ATCC 29213
were used as reference strains for antibiotic disc control.
Table 1
Oligonucleotides used in PCR reactions.
Species/gene Primer sequence (5'/3') Amplicon
size (bp)
Source
Staphylococcus
spp.
TIACCATTTCAGTACCTTCTGGTAA 370 Morot-Bizot
GGCCGTGTTGAACGTGGTCAAATCA et al., 2004
S. aureus CGTAATGAGATTTCAGTAG
ATAATACAACA
107
AATCTTTGTCGGTACACGA
TATTCTTCACG
S. xylosus AACGCGCAACAGCAATTACG 539
AACGCGCAACGTGATAAAATTAATG
S. epidermidis CAAAAGAGCGTGGAGAAAAGTATCA 124
ATCAAAAAGTTGGCGAACCTTTTCA
S. saprophyticus ACGGGCGTCCACAAAATCAATAGGA 220
TCAAAAAGTTTTCTAAAAAATTTAC
mecA AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC 533 Barski
AGTTCTGGCACTACCGGATTTGC et al., 1996
tet(L) TGGTGGAATGATAGCCCATT 229 Rizzotti
CAGGAATGACAGCACGCTAA et al., 2005
tet(M) GTGGACAAAGGTACAACGAG 406
CGGTAAAGTTCGTCACACAC
erm(B) TGGTATTCCAAATGCGTAATG 745
CTGTGGTATGGCGGGTAAGT
tet(K) TTATGGTGGTTGTAGCTAGAAA 348 Gevers
AAAGGGTTAGAAACTCTTGAAA et al., 2003
int (Tn916/
Tn1545)
GCGTGATTGTATCTCACT 1028 Doherty
GACGCTCCTGTTGCTTCT et al., 2000
erm(A) TCTAAAAAGCATGTAAAAGAA 645 Sutcliffe
TGATTATTATTTGATAGCTTC et al., 1996
erm(C) TCAAAACATAATATAGATAAA 642
TAACTGCTAAATTTGTTATAATCG
mrs(A/B) GCAAATGGTGTAGGTAAGACAACT 399
TAAAACAAATGTAGTGTACTA

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทบาท ในการกำหนดสี และ ในการพัฒนาคุณลักษณะ organolepticตามความสามารถของ proteolytic และ lipolyticตามปัจจุบันคณะกรรมการระเบียบ (EC) 152548 พฤศจิกายนเป็นแก้ไขเกณฑ์ทางจุลชีววิทยาสำหรับอาหารรวมเงื่อนไขสุขอนามัย (EC ระเบียบหมายเลข 2073/2005),เฉพาะการสอบจำนวน staphylococci coagulase เป็นบวกจำนวนแบคทีเรียในอาหารเหล่านี้เป็นที่ยอมรับได้ก่อตั้งขึ้นเป็น 105 cfu/g ข้อบังคับไม่ได้อ้างถึงการเหตุการณ์ชนิด Staphylococcus อื่น ๆ ในอาหาร อาหารมักจะเป็นการอ่างเก็บน้ำของแบคทีเรียเหล่านี้ และผลลัพธ์ของเหตุการณ์ทั่วไปจากความต้านทานต่อสภาพแวดล้อม unfavourableในระหว่างกระบวนการผลิต การจัดเก็บอาหาร และสูงความสามารถในการปรับตัวของบรรดาไมโครสิ่งมีชีวิต (Chaje˛cka-Wierzchowska et al., 2014)การแพร่กระจายของความต้านทานต่อตัวแทนจุลินทรีย์ใน staphylococciส่วนใหญ่เกิดจากการซื้อ plasmids หรือ transposons(Lozanoa et al., 2012) ใน staphylococci ถ่ายโอน conjugativeดีเทอร์มิแนนต์ต้านทานเป็นปกติ mediated โดย conjugative plasmidsซึ่งกระจายดีเทอร์มิแนนต์ต้านทานระหว่างสายพันธุ์ และสกุล (Malachowa และ DeLeo, 2010) นอกจากการถ่ายโอนการต้านทานดีเทอร์มิแนนต์ พวกเขาสามารถระดม nonconjugative plasmidsrecombine กับ plasmids nonconjugative แบบใหม่ plasmidsหรือรับ และโอนย้าย transposons ต้านทาน (Khan et al.,2000)กลไกความต้านทานความต้านทานต่อ methicillin ในข้อด้อยคือที่เกี่ยวข้องกับสถานะของยีน mecA ยีน mecA อยู่เคลื่อนองค์ประกอบทางพันธุกรรมเรียกว่าโครโมโซมเทป Staphylococcalmec (SCCmec) แนวนอน interspecies โอนย้ายนี้องค์ประกอบอาจจะเป็นปัจจัยสำคัญในการเผยแพร่ทนทานต่อ methicillin S. หมอเทศข้างลาย (MRSA) (Bloemendaal et al., 2010)ต้านทานเตตราไซคลีนโดยดีเทอร์มิแนนต์ในหลากหลายสายพันธุ์ staphylococcal ต่าง ๆ ก็พบบ่อย (DeAl. ร้อยเอ็ด Vries, 2009 ริม et al., 2012) การแพร่กระจายของความต้านทานยาปฏิชีวนะระหว่างข้อด้อย (harbouring ยีนต้านทาน) จากพร้อมรับประทานอาหารอาจหมายถึงอันตรายสำหรับสุขภาพของมนุษย์ผ่านทางการโอนย้ายยีนต้านทาน ระหว่างสายพันธุ์ staphylococcal และผ่านส่งทนโรคกับมนุษย์โดยตรง (Walther และPerreten, 2007)จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้คือการ ตรวจสอบจุลินทรีย์ไทป์ค่าความต้านทานของข้อด้อยที่แยกต่างหากจากอาหารของสัตว์โดยเน้นยาปฏิชีวนะความเกี่ยวข้องทางคลินิก เช่น b-lactamscefoxitin และ macrolideelincosamideestreptogramins (เม)สาร เพื่อประเมินความสัมพันธ์ระหว่างชนิดและความต้านทานโปรไฟล์ของความต้านทานนอกจากนี้ยีน tet(M), tet(K)tet(L), erm(A), erm(B), erm(C), mrs(A/B) และ mecA2. วัสดุและวิธีการ2.1. แบคทีเรียสายพันธุ์Staphylococci ถูกแยกต่างหากจาก 146 ตัวอย่างได้จากขายปลีกพร้อมกินผลิตภัณฑ์ต่าง ๆ จากจุดเริ่มต้นของสัตว์ (เนยแข็งเนื้อสัตว์หาย ไส้กรอก ปลารมควัน) ได้รับจากท้องถิ่นต่าง ๆตลาดใน Olsztyn ประเทศโปแลนด์ ตัวอย่างอาหาร (10 g) ถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 90 ml buffered น้ำ peptone (เมอร์ค เยอรมนี), incubatedค้างคืนที่ 37 C และลายบนแผ่นงานที่ประกอบด้วยMannitol เกลือวางแดง Agar (เมอร์ค เยอรมนี) Mannitol (þ)อาณานิคมแตกต่างกัน coagulasenegative และ coagulase เป็นบวกกับการทดสอบตรวจสอบการผลิตปัจจัย clumping(ชุดทดสอบ Staphylase, Oxoid สหราชอาณาจักร) และการผลิตcoagulase บนสื่อกลาง RPF (Biomerieux ฝรั่งเศส) กับกระต่ายเลือดและไฟบริโนเจน หลังจากเริ่มต้นวิเคราะห์ไทป์ระบุสายพันธุ์ coagulase ลบระดับสกุลโดยวิธีการ multiplex PCR ตามโปรโตคอลของ Morot-Bizotal. ร้อยเอ็ด (2004) ดีเอ็นเอของสายพันธุ์ถูกแยกจากอาณานิคมเดียวชุดแยกใช้เป็นไปตามมาตรการผูกและ elutionของกรดนิวคลีอิกในอีคอลัมน์มินิมินิ Genomic (A และ A เทคโนโลยีชีวภาพโปแลนด์), กับระยะก่อนหน้านี้ของผนังเซลล์ย่อยอาหาร (Lysostaphin10 mg/ml) (และเป็นเทคโนโลยีชีวภาพ โปแลนด์) ขยายได้ดำเนินในแบบมินิ MJ ร้อน cycler (BIO RAD โปแลนด์) ที่synthesised อย่าใช้การวิจัยในห้องปฏิบัติการดีเอ็นเอจัดลำดับและการสังเคราะห์ Oligonucleotide (สถาบันของชีวเคมีและชีวฟิสิกส์ได้โปแลนด์ออสการ์ของศาสตร์วอร์ซอว์โปแลนด์) อีตาราง 1 แยกด้วย: 100 V e 5 นาที 70 Ve 60 นาที (ย่อมเยาว์เช่นวิทยาศาสตร์ สหราชอาณาจักร) ได้ดำเนินการกับ 1.5% agarose เจล(Promega โปแลนด์) แห่งโบรไมด์ ethidium 0.5 มิลลิกรัม /10 ml (MP Biomedicals โปแลนด์) ควบคุมบวกรวมอ้างอิงสายพันธุ์: หมอเทศข้างลาย S. ATCC 43300, S. xylosus ATCC 29971Saprophyticus S. ATCC 49453 และ S. epidermidis ATCC 49461 สายพันธุ์ระบุ โดยวิธี PCR ที่ตระกูลนี้ ระบุระดับใช้ API STAPH (Biomerieux ฝรั่งเศส)2.2. ต้านทานยาปฏิชีวนะไทป์มีการตรวจสอบความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะตามแนวทางของศูนย์แห่งชาติอ้างอิงสำหรับจุลินทรีย์ภูมิไวรับและมาตรฐานของ Clinical ที่รู้จักในระดับสากล และห้องปฏิบัติการมาตรฐาน สถาบัน (CLSI, 2010) Determinations ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีแพร่ดิสก์บน Müeller Hinton agar(เมอร์ค เยอรมนี) ใช้ดิสก์ต่อไปนี้ (Oxoid โปแลนด์):(E 15 mg) erythromycin, clindamycin (ดา-2 mg) gentamicin (CN-120 mg), cefoxitin (FOX 30 mg), norfloxacin (NOR-10 mg), ciprofloxacin(CIP 5 mg), เตตราไซคลีน (TE-30 mg) rifampicin (ถนน 5 mg),nitrofurantoin (F-300 มิลลิกรัม), linezolid (LZD 30 mg) chloramphenicol(C-30 mg), trimetoprim (W-5 mg), trimetoprim/ซัลฟา เมโทซาโซล(SXT 25 มิลลิกรัม), quinupristin/dalfopristin (QDA 15 mg) tigecycline(TGC-1 มิลลิกรัม) Escherichia coli ATCC 25922 และ s ได้หมอเทศข้างลาย ATCC 29213ใช้เป็นสายพันธุ์อ้างอิงสำหรับการควบคุมยาปฏิชีวนะดิสก์ตารางที่ 1Oligonucleotides ที่ใช้ในปฏิกิริยา PCRลำดับรองพื้นชนิด/ยีน (5' / 3') Ampliconขนาด (bp)แหล่งที่มาStaphylococcusโอTIACCATTTCAGTACCTTCTGGTAA 370 Morot-BizotGGCCGTGTTGAACGTGGTCAAATCA et al., 2004หมอเทศข้างลาย S. CGTAATGAGATTTCAGTAGATAATACAACA107AATCTTTGTCGGTACACGATATTCTTCACGXylosus S. AACGCGCAACAGCAATTACG 539AACGCGCAACGTGATAAAATTAATGS. epidermidis CAAAAGAGCGTGGAGAAAAGTATCA 124ATCAAAAAGTTGGCGAACCTTTTCASaprophyticus S. ACGGGCGTCCACAAAATCAATAGGA 220TCAAAAAGTTTTCTAAAAAATTTACmecA AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC 533 BarskiAGTTCTGGCACTACCGGATTTGC et al., 1996tet(L) TGGTGGAATGATAGCCCATT 229 RizzottiCAGGAATGACAGCACGCTAA et al., 2005tet(M) GTGGACAAAGGTACAACGAG 406CGGTAAAGTTCGTCACACACerm(B) TGGTATTCCAAATGCGTAATG 745CTGTGGTATGGCGGGTAAGTtet(K) TTATGGTGGTTGTAGCTAGAAA 348 GeversAAAGGGTTAGAAACTCTTGAAA และ al., 2003int (Tn916 /Tn1545)โดเฮอร์ตี 1028 GCGTGATTGTATCTCACTGACGCTCCTGTTGCTTCT และ al., 2000erm(A) TCTAAAAAGCATGTAAAAGAA 645 SutcliffeTGATTATTATTTGATAGCTTC et al., 1996erm(C) TCAAAACATAATATAGATAAA 642TAACTGCTAAATTTGTTATAATCGmrs(A/B) GCAAATGGTGTAGGTAAGACAACT 399TAAAACAAATGTAGTGTACTA

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทบาทในการกำหนดสีและคุณสมบัติในการพัฒนาประสาทสัมผัสตามโปรตีนและความสามารถของพวกเขา lipolytic. ตามที่สำนักงานคณะกรรมการกำกับกฎระเบียบในปัจจุบัน (EC) วันที่ 15 เดือนพฤศจิกายนปี 2005 เป็นการแก้ไขเกณฑ์ที่ทางจุลชีววิทยาสำหรับอาหาร(EC กฎกระทรวงฉบับที่ 2073/2005) สุขอนามัย เกณฑ์ที่รวมเพียงการตรวจสอบจำนวนของเชื้อcoagulase บวก. ขีด จำกัด ที่ยอมรับได้ของเชื้อแบคทีเรียเหล่านี้ในอาหารที่ได้รับการก่อตั้งขึ้นเป็น105 cfu / g ระเบียบไม่ได้หมายถึงการเกิดขึ้นของสายพันธุ์เชื้อ Staphylococcus อื่น ๆ ในอาหาร อาหารมักจะเป็นอ่างเก็บน้ำของเชื้อแบคทีเรียเหล่านี้และเกิดขึ้นร่วมกันของพวกเขาส่งผลให้ส่วนใหญ่มาจากความต้านทานต่อสภาพแวดล้อมที่ไม่เอื้ออำนวยในช่วงกระบวนการผลิตการเก็บรักษาอาหารสูงและความสามารถในการปรับตัวของผู้จุลินทรีย์(Chaje˛cka- Wierzchowska et al., 2014) การแพร่กระจายของความต้านทานต่อยาต้านจุลชีพในเชื้อเป็นส่วนใหญ่เนื่องจากการซื้อกิจการของพลาสมิดและ / หรือ transposons (Lozanoa et al., 2012) ในเชื้อ, การถ่ายโอน conjugative ของปัจจัยต้านทานเป็นผู้ไกล่เกลี่ยโดยปกติพลาสมิดconjugative ซึ่งแผ่กระจายปัจจัยต้านทานระหว่างชนิดและจำพวก (Malachowa และ DeLeo 2010) นอกจากนี้การถ่ายโอนปัจจัยต้านทานพวกเขาสามารถระดมพลาสมิด nonconjugative, recombine ที่มีพลาสมิด nonconjugative ในรูปแบบพลาสมิดใหม่หรือได้รับและโอนtransposons ต้านทาน (Khan et al., 2000). กลไกการต้านทานในข้อเสียต้านทาน methicillin จะเกี่ยวข้องกับการปรากฏตัวของMeca ยีน. ยีน Meca ตั้งอยู่บนองค์ประกอบทางพันธุกรรมที่เรียกว่ามือถือจากเชื้อเทปโครโมโซมMEC (SCCmec) แนวนอน, การถ่ายโอน interspecies นี้องค์ประกอบอาจจะเป็นปัจจัยที่สำคัญในการเผยแพร่ของmethicillin ทนเชื้อ S. aureus (MRSA) (Bloemendaal et al., 2010). ต้านทาน Tetracycline เขียนโดยความหลากหลายของปัจจัยในสายพันธุ์ที่แตกต่างกันstaphylococcal ยังเป็นบ่อย พบ (De Vries et al, 2009;.. ลิม et al, 2012) การแพร่กระจายของความต้านทานยาปฏิชีวนะในหมู่ข้อเสีย (เก็บงำยีนต้านทาน) จากพร้อมที่จะกินอาหารที่อาจจะเป็นอันตรายต่อสุขภาพของมนุษย์โดยโอนผ่านของยีนต้านทานระหว่างสายพันธุ์staphylococcal และผ่านการส่งผ่านโดยตรงของโรคที่ดื้อต่อมนุษย์(วอลเธอร์และPerreten 2007) จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้เพื่อตรวจสอบยาต้านจุลชีพฟีโนไทป์โปรไฟล์ความต้านทานของข้อเสียที่แยกได้จากอาหารที่ได้จากสัตว์ที่มีความสำคัญในการใช้ยาปฏิชีวนะของความเกี่ยวข้องทางคลินิกคือB-lactams, cefoxitin และ macrolideelincosamideestreptogramins (MLS) สาร; เพื่อประเมินความสัมพันธ์ระหว่างชนิดและความต้านทานโปรไฟล์นอกจากนี้การตรวจสอบของยีนต้านทานเทต (M), เทต (K) เทต (L), ERM (A), ERM (B), ERM (C) นาง (A / B) และ Meca. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 สายพันธุ์แบคทีเรียเชื้อที่แยกได้จาก 146 ตัวอย่างที่ได้จากการต่างๆค้าปลีกพร้อมที่จะกินผลิตภัณฑ์จากสัตว์(เนยแข็งเนื้อสัตว์หายไส้กรอกปลารมควัน) ที่ได้รับจากประเทศหลายตลาดในOlsztyn, โปแลนด์ ตัวอย่างอาหาร (10 กรัม) กำลังหดหาย90 มล. น้ำเปปโตนบัฟเฟอร์ (เมอร์ค, เยอรมนี) บ่มค้างคืนที่37 องศาเซลเซียสและลายบนจานที่มีการคัดเลือกแมนนิทอลซอลฟีนอลสีแดงวุ้น(เมอร์ค, เยอรมนี) แมนนิทอล (TH) อาณานิคมแตกต่างออกเป็น coagulase บวกและ coagulasenegative กับการทดสอบการตรวจสอบการผลิตเป็นปัจจัย clumping (Staphylase ชุดทดสอบ Oxoid สหราชอาณาจักร) และการผลิตของcoagulase ในสื่อ RPF (Biomerieux ฝรั่งเศส) กับกระต่ายเลือดและ fibrinogen หลังจากที่เริ่มต้นการวิเคราะห์ฟีโนไทป์, สายพันธุ์ coagulase ลบถูกระบุว่าอยู่ในระดับที่พืชและสัตว์โดยวิธีPCR Multiplex ตามโปรโตคอลของ Morot-Bizot et al, (2004) ดีเอ็นเอของสายพันธุ์ที่แยกได้จากโคโลนีที่เดียว. ชุดแยกนำไปใช้ก็ขึ้นอยู่กับผูกพันและชะเลือกของกรดนิวคลีอิกในคอลัมน์มินิอีจีโนมมินิ (A & A เทคโนโลยีชีวภาพโปแลนด์) มีขั้นตอนก่อนหน้าของการย่อยผนังเซลล์ (Lysostaphin 10 มิลลิกรัม / มล.) (A & A เทคโนโลยีชีวภาพโปแลนด์) ขยายได้รับการดำเนินการในการระบายความร้อน Cycler MJ มินิ (BIO-RAD โปแลนด์) วิจัยใช้การเริ่มสังเคราะห์ในห้องปฏิบัติการดีเอ็นเอลำดับและ Oligonucleotide สังเคราะห์ (สถาบันชีวเคมีและชีวฟิสิกส์ของโปแลนด์Academy of Sciences ในวอร์ซอ, โปแลนด์) จตารางที่ 1 การแยก Electrophoretic: 100 V อี 5 นาที; 70 วีอี60 นาที (ตวิทยาศาสตร์สหราชอาณาจักร) ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับ 1.5% agarose เจล(Promega, โปแลนด์) ด้วยนอกเหนือจากโบรไมด์ ethidium 0.5 มก. / 10 มล. (MP Biomedicals โปแลนด์) การควบคุมเชิงบวกรวมถึงการอ้างอิงสายพันธุ์: aureus ATCC เอส 43300 เอส xylosus ATCC 29971, เอส saprophyticus ATCC 49453 และ S. epidermidis ATCC 49461. สายพันธุ์ระบุโดยวิธีPCR เพียงในระดับสกุลที่ถูกระบุโดยใช้API Staph (Biomerieux ฝรั่งเศส). 2.2 ต้านทานยาปฏิชีวนะฟีโนไทป์ต้านทานต่อยาปฏิชีวนะที่ถูกตรวจสอบตามแนวทางของศูนย์แห่งชาติเพื่อการอ้างอิงไวต่อยาต้านจุลชีพและมาตรฐานการยอมรับในระดับสากลของคลินิกและมาตรฐานห้องปฏิบัติการสถาบัน(CLSI 2010) หาความถูกดำเนินการโดยใช้วิธีการแพร่กระจายดิสก์บน Mueller-Hinton agar (เมอร์ค, เยอรมนี) แผ่นดังต่อไปนี้ (Oxoid โปแลนด์) ถูกนำมาใช้: erythromycin (E-15 mg), clindamycin (DA-2 มิลลิกรัม) gentamicin (CN- 120 มก.) cefoxitin (FOX-30 mg), norfloxacin (NOR-10 mg) เสริมแรง(CIP-5 มก.) tetracycline (TE-30 mg), rifampicin (RD-5 มิลลิกรัม) nitrofurantoin (F-300 มก.) linezolid (LZD-30 mg), chloramphenicol (C-30 mg) trimetoprim (W-5 มิลลิกรัม) trimetoprim / sulfamethoxazole (SXT-25 mg) quinupristin / dalfopristin (QDA-15 mg) tigecycline (TGC-1 มก.) อีโค ATCC 25922 และ S. aureus ATCC 29213 ถูกนำมาใช้เป็นสายพันธุ์อ้างอิงสำหรับการควบคุมแผ่นยาปฏิชีวนะ. ตารางที่ 1 oligonucleotides ใช้ในปฏิกิริยา PCR. สายพันธุ์ / ยีนลำดับไพรเมอร์ (5/3 ') Amplicon ขนาด (bp) แหล่งที่มาของเชื้อ Staphylococcus spp. TIACCATTTCAGTACCTTCTGGTAA 370 Morot-Bizot GGCCGTGTTGAACGTGGTCAAATCA et al., 2004 เอส aureus CGTAATGAGATTTCAGTAG ATAATACAACA 107 AATCTTTGTCGGTACACGA TATTCTTCACG เอส xylosus AACGCGCAACAGCAATTACG 539 AACGCGCAACGTGATAAAATTAATG เอส epidermidis CAAAAGAGCGTGGAGAAAAGTATCA 124 ATCAAAAAGTTGGCGAACCTTTTCA เอส saprophyticus ACGGGCGTCCACAAAATCAATAGGA 220 TCAAAAAGTTTTCTAAAAAATTTAC Meca AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC 533 Barski AGTTCTGGCACTACCGGATTTGC et al., 1996 เทต (L) TGGTGGAATGATAGCCCATT 229 Rizzotti CAGGAATGACAGCACGCTAA et al., 2005 เทต (M) GTGGACAAAGGTACAACGAG 406 CGGTAAAGTTCGTCACACAC ERM (B) TGGTATTCCAAATGCGTAATG 745 CTGTGGTATGGCGGGTAAGT เทต (K) TTATGGTGGTTGTAGCTAGAAA 348 Gevers AAAGGGTTAGAAACTCTTGAAA et al., 2003 int (Tn916 / Tn1545) GCGTGATTGTATCTCACT 1028 โดเฮอร์ตี้GACGCTCCTGTTGCTTCT et al., 2000 ERM (A) TCTAAAAAGCATGTAAAAGAA 645 Sutcliffe TGATTATTATTTGATAGCTTC et al., 1996 ERM (C) TCAAAACATAATATAGATAAA 642 TAACTGCTAAATTTGTTATAATCG นาง (A / B) GCAAATGGTGTAGGTAAGACAACT 399 TAAAACAAATGTAGTGTACTA

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บทบาทในการกำหนดสี และในการพัฒนาคุณลักษณะทางประสาทสัมผัส
ตามความสามารถและความสามารถในกับพวกเขา ตาม ระเบียบที่คณะกรรมการปัจจุบัน

( EC ) 15 พฤศจิกายน 2005 แก้ไขเพิ่มเติมในเกณฑ์ทางจุลชีววิทยาสำหรับของกิน
( ระเบียบ EC หมายเลข 2073 / 2005 ) , สุขอนามัยหลักเกณฑ์รวม
เพียงการตรวจสอบหมายเลขของโคกูเลส
กลุ่มบวกการยอมรับขีด จำกัด ของแบคทีเรียเหล่านี้ในอาหารที่ได้รับ
ก่อตั้งขึ้นเป็น 105 CFU / กรัม ระเบียบไม่ได้อ้างถึง
เกิดแบคทีเรียชนิดอื่น ๆ ในอาหาร อาหารมัก
แหล่งสะสมของแบคทีเรียเหล่านี้ และผลที่เกิดขึ้นทั่วไปของพวกเขา
หลักจากความต้านทานปรับสภาพสิ่งแวดล้อม
ในระหว่างกระบวนการผลิต การเก็บรักษาอาหารและสูง
ความสามารถในการปรับตัวของจุลินทรีย์เหล่านั้น ( chaje ˛ cka -
wierzchowska et al . , 2010 ) .
แพร่กระจายของความต้านทานต่อยาต้านจุลชีพในกลุ่ม
เป็นส่วนใหญ่เนื่องจากการเข้าซื้อกิจการของพลาสมิดและ / หรือ transposons
( lozanoa et al . , 2012 ) ในความแตกต่างของปัจจัยการโอน conjugative
ต้านทานมักจะโดย conjugative พลาส
โดยซึ่งกระจายปัจจัยต้านทานระหว่างชนิดและสกุล (
malachowa และเดลีโอ้ , 2010 ) นอกจากนี้การถ่ายโอน
ต้านทานปัจจัย พวกเขาสามารถระดม nonconjugative เพื่อ
แขกกับ nonconjugative พลาสมิดในรูปแบบพลาสมิดใหม่
หรือได้รับโอน transposons และความต้านทาน ( ข่าน et al . ,
2 )
ต่อต้านกลไกต้านทานเมทิซิลลิน
ข้อเสียคือที่เกี่ยวข้องกับการปรากฏตัวของยีน MECA . โดย MECA ยีนตั้งอยู่บน
มือถือเรียก staphylococcal เทปองค์ประกอบพันธุกรรมโครโมโซม
MEC ( sccmec ) แนวนอน , interspecies โอนองค์ประกอบนี้
อาจเป็นปัจจัยสําคัญในการเผยแพร่
methicillin-resistant S . aureus ( MRSA ) ( โบลเม็นดาล et al . , 2010 ) .
tetracycline ต้านทานรหัสโดยความหลากหลายของปัจจัยใน
ชนิดที่แตกต่างกัน staphylococcal ยังพบบ่อย ( de
เศรษฐศาสตร์ et al . , 2009 ; ลิม et al . , 2012 ) การกระจายของ
ต้านทานยาปฏิชีวนะในข้อเสีย ( กับยีนต้านทาน ) พร้อมที่จะกิน
อาหารอาจหมายถึงอันตรายต่อสุขภาพของมนุษย์ผ่านการถ่ายโอนยีนต้านทานระหว่าง staphylococcal

ส่งตรงผ่านชนิดและป้องกันเชื้อโรคกับมนุษย์และ
( วอลเตอร์perreten , 2007 ) .
วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือ เพื่อศึกษาสภาพต้านทานจุลชีพ
ฟีโนไทป์ของข้อเสียที่แยกได้จากอาหารที่มาจากสัตว์
เน้นยาปฏิชีวนะของคลินิกที่เกี่ยวข้อง เช่น b-lactams มาต macrolideelincosamideestreptogramins
,
( MLS ) สารประกอบเพื่อประเมินความสัมพันธ์ระหว่างชนิดและต้านทาน
โปรไฟล์นอกจากนี้การตรวจหายีนต้านทาน เทต ( M )เทต ( k )
เทต ( L ) . ( ) . . . เอ่อ . . . เอ่อ ( B ) ( C ) , นาง ( A / B ) และ MECA .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . กลุ่มแบคทีเรียที่แยกได้จากตัวอย่าง

ต่าง ๆได้จาก 146 ขายปลีกพร้อมที่จะกินผลิตภัณฑ์จากสัตว์ ( ชีส , ไส้กรอกรมควัน ,
รักษาเนื้อ ปลาที่ได้จากตลาดท้องถิ่น
หลายใน Olsztyn , โปแลนด์ ตัวอย่างอาหาร ( 10 กรัม ) เป็นโฮโม
ในเปปโตนน้ำ 90 ml 2 ( Merck , เยอรมัน ) , บ่ม
ค้างคืนที่ 37  C และลายบนแผ่นงานที่มีแมนนิทอลโล
เกลือวุ้นสีแดง ( Merck , เยอรมัน ) 5 ( þ )
อาณานิคมที่แตกต่างกัน เป็นลูกเมียเป็นบวก และ coagulasenegative
ด้วยการทดสอบการตรวจสอบการผลิตของ clumping ปัจจัย
( staphylase ชุดทดสอบ oxoid , สหราชอาณาจักร ) และการผลิต
ลูกเมียใน rpf ขนาดกลาง ( biomerieux , ฝรั่งเศส ) กับเลือดและกระต่าย
เกร็ด . หลังจากการวิเคราะห์คุณสมบัติเบื้องต้น
ลูกเมียสายพันธุ์ลบถูกระบุในระดับสกุล โดยวิธี multiplex PCR
ตามระบบของ morot bizot
et al . ( 2004 ) ดีเอ็นเอของสายพันธุ์ที่แยกได้จากโคโลนีเดี่ยว แยกชุด
ใช้ ขึ้นอยู่กับการเลือกใช้
กรดนิวคลีอิกในมินิคอลัมน์ E ที่มีขนาดเล็ก ( &เป็นเทคโนโลยีชีวภาพ
โปแลนด์ ) กับขั้นตอนก่อนหน้าของผนังเซลล์การย่อยอาหาร ( ไลโซ ตฟิน
10 mg / ml ) ( &เทคโนโลยีชีวภาพ , โปแลนด์ ) ( คือ
ทำใน MJ Mini Thermal cycler ( Bio-rad , โปแลนด์ )
ใช้เริ่มวิจัยสังเคราะห์ในห้องปฏิบัติการ ซึ่งการสังเคราะห์และการจัดลำดับดีเอ็นเอ

( สถาบันชีวเคมีและ ฟิสิกส์ของโปแลนด์ Academy of Sciences ใน วอร์ซอ , โปแลนด์ ) e
โต๊ะ 1 รูปแบบการแยก : 100 V E 5 นาที 70 V
E 60 นาที ( เครื่องมือทางวิทยาศาสตร์ , UK ) ได้ดำเนินการบน 1.5 % เจล
( promega , โปแลนด์ ) ด้วยการเพิ่มคู่ bromide 0.5 mg /
10 ml ( MP biomedicals , โปแลนด์ ) การควบคุมบวกรวมสายพันธุ์อ้างอิง
: S . aureus ATCC ทาง เอส xylosus ATCC 29971
, Ssaprophyticus ATCC 49453 และ อาหารและ 49461 . สายพันธุ์
ระบุโดยวิธีพีซีอาร์เฉพาะในระดับสกุล พบการใช้ API 10
( biomerieux , ฝรั่งเศส ) .
2.2 . คุณสมบัติต้านทานยาปฏิชีวนะต้านทานยาปฏิชีวนะเป็น

ตรวจสอบตามแนวทางของศูนย์แห่งชาติสำหรับการอ้างอิงบันทึก
ได้รับการยอมรับในระดับสากลและมาตรฐานของทางคลินิก และทางห้องปฏิบัติการ
สถาบันมาตรฐาน ( ต่างๆ , 2010 ) รวมทั้งมีการใช้วิธี
ดิสก์กระจายอยู่บน M üหรือ ฮินตัน วุ้น
( Merck , เยอรมัน ) ดิสก์ต่อไปนี้ ( oxoid , โปแลนด์ ) จำนวน :
อีริโทรมัยซิน ( e-15 มิลลิกรัม ) คลินดามัยซิน ( da-2 มิลลิกรัม ) เจนตาไมซิน ( CN -
120 มิลลิกรัม ) เซโฟซิติน ( fox-30 มิลลิกรัม ) , norfloxacin ( nor-10 มิลลิกรัม ) , ซิโปรฟลอกซาซิน
( cip-5 มิลลิกรัม ) เตตราไซคลีน ( te-30 มิลลิกรัม ) , rifampicin ( rd-5 มิลลิกรัม )
ไน ( f-300 มิลลิกรัม ) ไลนิโซลิด ( lzd-30 มิลลิกรัม ) , chloramphenicol
( c-30 มิลลิกรัม ) trimetoprim ( w-5 มิลลิกรัม ) trimetoprim / ซัลฟาเมโทซาโซล
( sxt-25 มิลลิกรัม ) quinupristin / dalfopristin ( qda-15 มิลลิกรัม )
( tgc-1 ไทกีไซไคลน์มิลลิกรัม ) Escherichia coli ATCC 25922 และ S . aureus ATCC พบว่า L
ถูกใช้เป็นสายพันธุ์อ้างอิงสำหรับการควบคุมดิสก์ตารางที่ 1

ยาปฏิชีวนะโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR ไพรเมอร์ /
ชนิดลำดับยีน ( 5 ' 3 ' ) และขนาด ( BP )




tiaccatttcagtaccttctggtaa แหล่งเชื้อ Staphylococcus spp . 370 morot bizot
ggccgtgttgaacgtggtcaaatca et al . 2004
S . aureus cgtaatgagatttcagtag



ataatacaaca 107 aatctttgtcggtacacga tattcttcacg
s

s aacgcgcaacgtgataaaattaatg xylosus aacgcgcaacagcaattacg 539 อาหาร caaaagagcgtggagaaaagtatca 124
atcaaaaagttggcgaaccttttca
s

saprophyticus acgggcgtccacaaaatcaatagga 220 tcaaaaagttttctaaaaaatttac MECA aaaatcgatggtaaaggttggc 533 barski
agttctggcactaccggatttgc et al . , 1996
เทต ( L ) tggtggaatgatagcccatt 229 ริซซ ติ
caggaatgacagcacgctaa et al . , 2005
เทต ( M )

. . . gtggacaaaggtacaacgag 406 cggtaaagttcgtcacacac ( B ) tggtattccaaatgcgtaatg จัง

ctgtggtatggcgggtaagt เทต ( K ) ttatggtggttgtagctagaaa 348 gevers
aaagggttagaaactcttgaaa et al . , 2003
INT ( tn916 /
tn1545 )

gcgtgattgtatctcact 1028 มือที่ gacgctcctgttgcttct et al . , 2000 . . . (

) tctaaaaagcatgtaaaagaa 645 ซัตคลิฟ tgattattatttgatagcttc et al . , 2539 . ( C )


tcaaaacataatatagataaa 642 taactgctaaatttgttataatcg คุณนาย ( A / B ) gcaaatggtgtaggtaagacaact 399
taaaacaaatgtagtgtacta