Total RNA was extracted from the fl

Total RNA was extracted from the flavedo, albedo, segment
membranes, and juice sacs of ‘Anliu’ and ‘Hong Anliu’ fruits
collected at five different development stages according to Liu et al.
(2006). Primer pairs (Table 1) were designed with the Primer
Express software (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) and
following the manufacturer’s guidelines for primer design. Isolated
RNA was treated with DNase I at 37
C for 1 h to remove genomic
DNA contamination, and first-strand cDNA was then synthesized
from the DNase I-treated RNA using the RevertAid M-MuLV
KIT (MBI, Lithuania). Real-time PCR was performed using the
ABI 7500 Real Time System (PE Applied Biosystems, Foster City,
CA, USA). Actin was amplified along with the target gene as an
endogenous control to normalize expression between different
samples. The control primers were: forward 5#-CCAAGCAGCATGAAGATCAA-3#
and reverse 5#-ATCTGCTGGAAGGTGCTGAG-3#.
The primers for the target gene were designed according
to the sequence in GenBank. Specific details of these primers are
shown in Table 1. The primers for the target gene and actin were
diluted in the SYBER GREEN PCR Master Mix (PE Applied
Biosystems) and 15 ll of the reaction mix were added to each well.Reactions were performed by an initial incubation at 50
C for
2 min and at 95
C for 1 min, and then cycled at 95
C for 15 s and
60
C for 1 min for 40 cycles. Output data generated by the
instrument on-board software Sequence Detector Version 1.3.1 (PE
Applied Biosystems) were transferred to a custom-designed Microsoft
Excel macro for analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจาก flavedo, albedo เซ็กสาร และถุงน้ำผลไม้ 'Anliu' และ 'Hong Anliu'เก็บรวบรวมในขั้นตอนพัฒนาแตกต่างกันห้าตามหลิว et al(2006) คู่สีรองพื้น (ตาราง 1) ถูกออกแบบ ด้วยการรองพื้นเอ็กซ์เพรสซอฟต์แวร์ (Biosystems ใช้ ฟอสเตอร์ City, CA, USA) และตามคำแนะนำของผู้ผลิตออกแบบรองพื้น แยกต่างหากอาร์เอ็นเอได้รับ DNase ฉันที่ 37 C สำหรับ h 1 เอา genomicดีเอ็นเอปนเปื้อน และเดอะเฟิร์ส cDNA ถูกแล้วสังเคราะห์จาก DNase ฉันถือว่าอาร์เอ็นเอโดยใช้ RevertAid M-MuLVชุด (MBI ลิทัวเนีย) ทำ PCR แบบเรียลไทม์โดยใช้การระบบเวลาจริง 7500 ABI (PE ใช้ Biosystems ฟอสเตอร์ซิตี้CA, USA) แอกตินถูกขยาย ด้วยยีนเป้าหมายเป็นการควบคุม endogenous ปกตินิพจน์ระหว่างแตกต่างกันตัวอย่างการ ไพรเมอร์ควบคุมได้: ไปข้างหน้า 5#-CCAAGCAGCATGAAGATCAA-3 #และกลับ 5#-ATCTGCTGGAAGGTGCTGAG-3 #ไพรเมอร์สำหรับยีนเป้าหมายถูกออกแบบตามลำดับใน GenBank มีรายละเอียดเฉพาะของไพรเมอร์เหล่านี้แสดงในตารางที่ 1 ไพรเมอร์สำหรับยีนเป้าหมายและแอกตินได้ยกเว้นในผสมกรี SYBER หลัก PCR (PE ใช้Biosystems) และ 15 จะผสมปฏิกิริยาเพิ่มให้ดีละกันดำเนิน โดยคณะทันตแพทยศาสตร์เริ่มต้นที่ 50 C สำหรับปฏิกิริยานาทีที่ 2 และ ที่ C 95 ใน 1 นาที และล้มแล้ว ที่ C 95 15 s และC 60 ใน 1 นาทีสำหรับรอบ 40 แสดงผลข้อมูลที่สร้างขึ้นโดยการเครื่องเหลือเฟือซอฟต์แวร์ลำดับจับเวอร์ชัน 1.3.1 (PEBiosystems ใช้) มีการถ่ายโอนทำมาเองแมโคร Excel สำหรับการวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวมอาร์เอ็นเอเป็นสารสกัดจาก flavedo, อัลเบโด้ส่วน
เยื่อและถุงน้ำผลไม้ของ 'Anliu และผลไม้' Hong Anliu '
เก็บที่ห้าขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกันไปตามหลิว et al.
(2006) คู่ประถมศึกษา (ตารางที่ 1) ได้รับการออกแบบที่มีการศึกษา
ซอฟต์แวร์ด่วน (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี้, CA, USA) และ
ปฏิบัติตามคำแนะนำของผู้ผลิตในการออกแบบไพรเมอร์ แยก
RNA ได้รับการรักษาด้วย DNase ฉันที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อลบจีโนม
การปนเปื้อนดีเอ็นเอและยีนแรกเส้นใยสังเคราะห์แล้ว
จาก RNA DNase ฉันได้รับการรักษาโดยใช้ RevertAid M-MuLV
KIT (MBI, ลิทัวเนีย) real-time PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้
ABI 7500 ระบบเรียลไทม์ (PE Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี้,
CA, USA) โปรตีนถูกขยายพร้อมกับยีนเป้าหมายเป็น
การควบคุมภายนอกที่จะปรับการแสดงออกที่แตกต่างกันระหว่าง
กลุ่มตัวอย่าง ไพรเมอร์ควบคุมคือไปข้างหน้า 5 # -CCAAGCAGCATGAAGATCAA-3 รุ่น
และย้อนกลับ 5 # -ATCTGCTGGAAGGTGCTGAG-3 รุ่น.
ไพรยีนเป้าหมายได้รับการออกแบบตาม
ลำดับใน GenBank รายละเอียดเฉพาะของไพรเมอร์เหล่านี้จะ
แสดงในตารางที่ 1 ไพรยีนเป้าหมายและโปรตีนถูก
เจือจางใน Syber GREEN PCR Master Mix (PE Applied
Biosystems) และ 15 LL ผสมปฏิกิริยาถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ well.Reactions ดำเนินการโดย บ่มเริ่มต้นที่ 50? C เป็นเวลา
2 นาทีและ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและขี่จักรยานแล้วที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 และ
60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 40 รอบ ข้อมูลการส่งออกที่สร้างโดย
ซอฟแวร์ที่ใช้ในการบนกระดานลำดับตรวจจับรุ่น 1.3.1 (PE
Applied Biosystems) ถูกย้ายไปกำหนดเองที่ออกแบบไมโครซอฟท์
แมโคร Excel สำหรับการวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากฟลาเวโดผู้ทรยศ , ส่วน ,
membranes และน้ำผลไม้ ถุง anliu ' ' และ ' ' เก็บผลไม้ใน anliu
5 ขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกันตาม Liu et al .
( 2006 ) ไพรเมอร์คู่ ( ตารางที่ 1 ) โดยออกแบบไพรเมอร์
บริการซอฟต์แวร์ ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) และ
ต่อไปนี้แนวทางของผู้ผลิตเพื่อการออกแบบไพรเมอร์ แยก
ซึ่งได้รับการตรวจหา ADNase ชั้น 37
C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เพื่อกำจัดการปนเปื้อนดีเอ็นเอและยีนเป็นครั้งแรก

สาระแล้วสังเคราะห์จากตรวจหา ADNase i-treated RNA โดยใช้ชุด m-mulv
revertaid ( 2 , ลิทัวเนีย ) เวลาจริงโดยการใช้
ABI 7500 เวลาจริงระบบ ( PE Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ ,
CA , USA ) แอกทินถูกขยายพร้อมกับยีนเป้าหมายเป็น
ในการควบคุมปรับการแสดงออกระหว่างตัวอย่างที่แตกต่าง

ไพรเมอร์จำนวน 5 # -
: ไปข้างหน้าและย้อนกลับ# ccaagcagcatgaagatcaa-3 5 # - atctgctggaaggtgctgag-3 # .
ไพรเมอร์สำหรับยีนเป้าหมายถูกออกแบบตาม
ลําดับบริเวณ รายละเอียดเจาะจงของไพรเมอร์เหล่านี้
แสดงดังตารางที่ 1 ไพรเมอร์สำหรับเป้าหมายของยีนและแอกทิน (
เจือจางใน Syber สีเขียว PCR Master Mix ( PE ใช้
Biosystems ) และ 15 จะเพิ่มปฏิกิริยาผสมกัน ปฏิกิริยาที่แสดงโดยการบ่มเริ่มต้นที่ 50
C
2 นาทีที่ 95
องศาเซลเซียสนาน 1 นาที แล้วปล่อยที่ 95
C 15 s
60
องศาเซลเซียสนาน 1 นาที 40 รอบ ส่งออกข้อมูลที่สร้างขึ้นโดยซอฟต์แวร์ตรวจจับอุปกรณ์ on-board ลำดับ

( PE รุ่น :Applied Biosystems ) ถูกย้ายไปที่ออกแบบเอง Microsoft
แมโคร Excel สำหรับการวิเคราะห์