7. Immunofluorescence analysis of c

7. Immunofluorescence analysis of cells
Cells were fixed for 20–30 min at room temperature with either 4% paraformaldehyde in phosphate-buffered saline (PBS), permeabilized, and blocked in blocking buffer (5% nonfat dry milk [Nestle], 0.3% Triton X-100 [Sigma], and PBS) for 30 min at room temperature. Primary antibodies were diluted in the blocking buffer and incubated overnight at 4o c in humidified conditions. Secondary antibodies were diluted in PBS and incubated for 1 h at room temperature. For nuclear staining, DAPI (Molecular Probes) was used at 0.1 μg/mL in water. Photographs were taken with a Nikon fluorescence microscope. The antibodies used were anti-VP16 (1:1000; Santa Cruz Biotech), anti-IIItubulin (1:10000; Santa Cruz Biotech), anti-synaptophysin I (1:200; Chemicon, catalog no. mab368), Alexaflor fluorescein anti-rabbit IgG and anti-mouse IgG (1:250; Molecular probe)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

7. วิเคราะห์ immunofluorescence ของเซลล์ เซลล์ที่ถาวรสำหรับ 20 – 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องมี paraformaldehyde 4% ทั้งใน buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS), permeabilized และบล็อกในบัฟเฟอร์บล็อก (5% nonfat แห้งนม [Nestle], 0.3% ไตรตั้น X-100 [ซิก], และ PBS) สำหรับ 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แอนตี้หลักถูกผสมในบัฟเฟอร์บล็อก และ incubated ค้างคืนที่ 4o c สภาพ humidified แอนตี้รองถูกทำให้เจือจางใน PBS และ incubated สำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง การย้อมสีนิวเคลียร์ DAPI (Probes โมเลกุล) ถูกใช้ใน μg 0.1 มล.ในน้ำ รูปถ่ายที่ถ่าย ด้วยกล้องจุลทรรศน์ fluorescence Nikon แอนตี้ที่ใช้ถูกต่อต้าน-VP16 (1:1000 ซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ), ต่อต้าน-IIItubulin (1:10000 ซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ), ต่อต้าน synaptophysin ฉัน (1: 200 Chemicon แค็ตตาล็อกไม่ mab368), Alexaflor fluorescein ป้องกันกระต่าย IgG และ IgG ป้องกันเมาส์ (1:250 โพรบระดับโมเลกุล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

7. การวิเคราะห์ Immunofluorescence ของเซลล์
เซลล์ได้รับการแก้ไขประมาณ 20-30 นาทีที่อุณหภูมิห้องมีทั้ง paraformaldehyde 4% ในสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส), permeabilized และบล็อกในการปิดกั้นกันชน (5% ไม่มีน้ำมันนมแห้ง [เนสท์เล่] 0.3% Triton X-100 [Sigma] และพีบีเอส) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แอนติบอดีหลักถูกเจือจางในบัฟเฟอร์การปิดกั้นและบ่มค้างคืนที่ 4o คในสภาพความชื้น แอนติบอดีรองถูกเจือจางในพีบีเอสและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง สำหรับการย้อมสีนิวเคลียร์ DAPI (วัดระดับโมเลกุล) ถูกนำมาใช้ที่ 0.1 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในน้ำ ภาพถูกถ่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง Nikon แอนติบอดีที่ใช้ ได้แก่ การต่อต้าน VP16 (1: 1000; ซานตาครูซไบโอเทค), การป้องกัน IIItubulin (1: 10000; ซานตาครูซไบโอเทค), การป้องกัน synaptophysin ฉัน (1:. 200; Chemicon, แคตตาล็อกไม่มี mab368) Alexaflor fluorescein ป้องกัน -rabbit IgG และ IgG ต่อต้านเมาส์ (1: 250; สอบสวนโมเลกุล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

7 . การวิเคราะห์วิธีเซลล์
เซลล์ถูกกำหนด 20 – 30 นาที ที่อุณหภูมิห้องด้วย 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ ( PBS ) , permeabilized และบล็อกในบล็อกบัฟเฟอร์ ( 5 % ไขมันต่ำนมแห้ง [ หลัก ] , 0.3% Triton X-100 [ SIGMA ] และ PBS ) เป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิห้องแอนติบอดีหลักถูกเจือจางในบล็อกบัฟเฟอร์ และบ่มค้างคืนที่ 4o C humidified เงื่อนไข แอนติบอดีทุติยภูมิได้เจือจางใน PBS บ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง นิวเคลียร์ staining dapi ( โมเลกุลโพรบ ) ถูกใช้ในμ 0.1 g / ml ในน้ำ ถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ Nikon . แอนติบอดีที่ใช้ anti-vp16 ( 000 ;ซานตา ครูซ ไบโอเทค ) , ต่อต้าน iiitubulin ( 1:10000 ; ซานตา ครูซ ไบโอเทค ) ต่อต้านซินแนปโตไฟซินผม ( 1:200 ; chemicon แคตตาล็อกไม่ mab368 ) alexaflor IgG และ IgG anti anti ี่กระต่ายเมาส์ ( 1:250 ; โมเลกุลโพรบ )