Protein hydrolysis was estimated by

Protein hydrolysis was estimated by measuring free amino
group content with ortho-phthaldialdehyde (OPA) according to
the method described by Nielsen, Petersen, and Dambmann
(2001).The OPA index indicates the concentration of serine corresponding
to standard curve. Cells from fermented milk sample
were collected by centrifugation at 4 °C (6000 × g, 15 min) and
washed twice with distilled water.The washed cells were suspended
in 50 mM Tris–HCl buffer (pH 7.5) and crushed by
ultrasonic treatment (300 W) at 30 s intervals for 20 min in an
ice bath. The crude homogenate was centrifuged at 1000 × g
for 20 min at 4 °C. The supernatant was used as a soluble cellfree
extract. Aminopeptidase and carboxypeptidase activities
were assayed with L-Lysine p-nitroanilide dihydrobromide (Lys–
pNA) and N-benzoyl-L-tyrosine-p-nitroanilide (NBTpNA) as
substrates, respectively. The solution (20 mM) of the two
substrates NBTpNA and Lys-pNA was prepared in N,Ndimethylformamide
and distilled water, respectively.The assay
was carried out with a total volume of 1 mL mixture containing
50 L of 20 mM substrate, 850 L of 100 mMTris–HCl buffer
(pH 7.5) and 100 L of cell-free extract. The mixture was incubated
at 37 °C for 10 min. The reaction was stopped by the
addition of 0.5 mL 1M HCl and then centrifuged at 8000 × g for
10 min. The absorbance of the liberated p-nitroaniline in the
supernatant was measured at 410 nm using Bio-rad xMark™
microplate reader (Bio-Rad Inc., Hercules, CA, USA). One unit
of peptidase activity corresponded to the amount of enzyme
that liberates 1 mol of p-nitroaniline per minute under standard
assay conditions. Endoproteinase activity was measured
by using Azocasein as a substrate. The reaction system consisted
of 1.25% (w/v) Azocasein dissolved in 400 L of 100mM
phosphate buffer (pH 7.0) and 100 L of cell-free extract. Distilled
water was used as a control instead of cell-free extract.
After incubation at 37 °C for 60 min, 500 L 10% (w/v) trichloroacetic
acid was added to stop the reaction. After centrifugation
at 8000 × g for 10 min, the absorbance of the supernatant was
measured at 440 nm. One unit of endoproteinase activity was
defined as the amount of enzyme that resulted in an increase
of 0.1 unit of absorbance, compared to that of control,
per minute at 37 °C. The effect of OPA index, aminopeptidase,
carboxypeptidase and endoproteinase activity on ACEinhibitory
activity was tested by the Spearman’s rank correlation
test with SPSS software (version 20, SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไฮโตรไลซ์โปรตีนถูกประเมิน โดยการวัดฟรีอะมิโนกลุ่มเนื้อหากับ ortho-phthaldialdehyde (OPA) ตามวิธีการอธิบาย โดยนีล Petersen, Dambmann(2001) OPA ดัชนีบ่งชี้ความเข้มข้นของแถตรงการโค้งมาตรฐาน เซลล์จากร้านมอย่างถูกรวบรวม โดย centrifugation ที่ 4 ° C (6000 × g, 15 นาที) และล้าง ด้วยน้ำกลั่นครั้ง เซลล์หินถูกหยุดชั่วคราวใน 50 มม. ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.5) และบดด้วยบำบัดอัลตราโซนิก (300 วัตต์) ที่ 30 s ช่วง 20 นาทีในการบาทน้ำแข็ง Homogenate น้ำมันถูก centrifuged ที่ 1000 × gสำหรับ 20 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatant ถูกใช้เป็น cellfree ละลายแยก กิจกรรม Aminopeptidase และ carboxypeptidaseมี assayed กับ L-ไลซีน p nitroanilide dihydrobromide (Lys –pNA) และ N-benzoyl-L-tyrosine-p-nitroanilide (NBTpNA) เป็นพื้นผิว ตามลำดับ การแก้ปัญหา (20 mM) ของทั้งสองมีเตรียมพื้นผิว NBTpNA และ Lys pNA ใน N, Ndimethylformamideและกลั่นน้ำ ตามลำดับ การทดสอบได้ดำเนินการ ด้วยรวม 1 mL ประกอบด้วยส่วนผสมพื้นผิว 20 mM, L 850 บัฟเฟอร์ mMTris – HCl 100 50 L(pH 7.5) และสารสกัดจากเซลล์ฟรี 100 L ส่วนผสมคือ incubatedที่ 37 ° C สำหรับ 10 นาที หยุดปฏิกิริยาโดยการเพิ่ม 0.5 mL 1M HCl และ centrifuged แล้ว ที่ 8000 ซื้อ g สำหรับ10 นาที Absorbance ของ p-nitroaniline liberated ในการsupernatant ถูกวัดที่ 410 nm ใช้ xMark Bio rad ™microplate reader (Bio Rad Inc. เฮอร์คิวลิส CA, USA) หนึ่งหน่วยกิจกรรม peptidase corresponded จำนวนเอนไซม์ที่ liberates 1 โมลของ p-nitroaniline ต่อนาทีภายใต้มาตรฐานวิเคราะห์สภาพ Endoproteinase กิจกรรมที่วัดโดยใช้ Azocasein เป็นพื้นผิว ระบบปฏิกิริยาประกอบด้วย1.25% (w/v) Azocasein ละลายใน 100 มม. 400 Lฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และสารสกัดจากเซลล์ฟรี 100 L กลั่นมีใช้น้ำเป็นตัวควบคุมแทนที่จะแยกเซลล์ฟรีหลังจากบ่มที่ 37 ° C สำหรับ 60 นาที trichloroacetic 500 L 10% (w/v)มีเพิ่มกรดเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลังจาก centrifugationที่ g ระดับ 8000 ซื้อใน 10 นาที absorbance ของ supernatant ถูกวัดที่ 440 nm เป็นหน่วยหนึ่งของกิจกรรม endoproteinaseกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นหน่วย absorbance 0.1 เปรียบเทียบกับการควบคุมต่อนาทีที่ 37 องศาเซลเซียส ผลของดัชนี OPA, aminopeptidaseกิจกรรม carboxypeptidase และ endoproteinase ACEinhibitoryกิจกรรมทดสอบ โดยความสัมพันธ์แบบลำดับขั้นของ Spearmanทดสอบกับโปรแกรมซอฟต์แวร์ (รุ่น 20 โปรแกรม Inc. ชิคาโก IL สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การย่อยสลายโปรตีนเป็นที่คาดกันโดยการวัดอะมิโนอิสระเนื้อหากลุ่มที่มีออร์โธ-phthaldialdehyde (OPA) ตามวิธีการที่อธิบายโดยนีลเซ่น, ปีเตอร์และ Dambmann (2001) ดัชนีได้โดยเริ่มต้น OPA บ่งชี้ความเข้มข้นของซีรีนที่เกี่ยวข้องโค้งมาตรฐาน เซลล์จากตัวอย่างนมหมักที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4 ° C (6000 ×กรัม 15 นาที) และล้างครั้งที่สองกับwater.The กลั่นล้างเซลล์ถูกระงับใน50 มิลลิบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 7.5) และบดโดยรักษาล้ำ( 300 W) ในช่วงเวลา 30 วินาทีเป็นเวลา 20 นาทีในห้องอาบน้ำน้ำแข็ง homogenate น้ำมันดิบถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ° C สารละลายที่ใช้เป็น cellfree ที่ละลายน้ำได้สารสกัดจาก aminopeptidase และกิจกรรม carboxypeptidase ถูก assayed กับ L-Lysine พี nitroanilide dihydrobromide (Lys- PNA) และ N-ออกไซด์-L-tyrosine-P-nitroanilide (NBTpNA) ในขณะที่พื้นผิวตามลำดับ วิธีการแก้ปัญหา (20 มิลลิเมตร) ของทั้งสองพื้นผิวNBTpNA และ Lys-PNA ถูกจัดทำขึ้นใน N, Ndimethylformamide และน้ำกลั่นทดสอบตามลำดับได้รับการดำเนินการที่มีปริมาณรวมของส่วนผสมมิลลิลิตร 1 มี 50 L ของพื้นผิว 20 มิลลิ, 850 ? L 100 บัฟเฟอร์ mMTris-HCl (pH 7.5) และ 100 L ของสารสกัดจากเซลล์ฟรี ส่วนผสมที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ปฏิกิริยาจะถูกหยุดโดยนอกเหนือจาก 0.5 มิลลิลิตร 1M HCl และปั่นแล้วที่ 8000 ×กรัมสำหรับ 10 นาที การดูดกลืนแสงของไทพี nitroaniline ในที่ใสวัดที่410 นาโนเมตรโดยใช้ Bio-ล้อ xMark ™อ่านmicroplate (Bio-Rad อิงค์ Hercules, CA, USA) หนึ่งหน่วยของกิจกรรม peptidase ตรงกับปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อย1 โมลของพี nitroaniline ต่อนาทีมาตรฐานภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรม Endoproteinase วัดโดยใช้Azocasein เป็นสารตั้งต้น ระบบปฏิกิริยาประกอบด้วย1.25% (w / v) Azocasein ละลายใน 400? ลิตร 100 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์(pH 7.0) และ 100 L ของสารสกัดจากเซลล์ฟรี กลั่นน้ำถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมแทนของสารสกัดจากเซลล์ฟรี. หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที, 500? L 10% (w / v) ไตรคลอโรกรดถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 8000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที, การดูดกลืนแสงของสารละลายที่ถูกวัดที่440 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของกิจกรรม endoproteinase ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่มีผลในการเพิ่มขึ้น0.1 หน่วยของการดูดกลืนแสงเมื่อเทียบกับที่ของการควบคุมต่อนาทีที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียส ผลของดัชนี OPA, aminopeptidase, carboxypeptidase และกิจกรรม endoproteinase ใน ACEinhibitory กิจกรรมได้รับการทดสอบความสัมพันธ์โดยการจัดอันดับของสเปียร์แมนทดสอบกับซอฟต์แวร์โปรแกรม SPSS (รุ่น 20, SPSS อิงค์, Chicago, IL, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การย่อยโปรตีนโดยประมาณ วัดกลุ่มอะมิโน
ฟรีที่มีเนื้อหาตรงตาม phthaldialdehyde ( OPA )

วิธีอธิบายโดยนีลเส็น ปีเตอร์สัน และ dambmann
( 2001 ) ดัชนีบ่งชี้ว่า ความเข้มข้นของเอนไซม์ที่โอปา
โค้งมาตรฐาน เซลล์จากนมหมักตัวอย่าง
มีจำนวน 3 ใน 4 ° C ( 6 , 000 × G , 15 นาที ) และ
ล้างด้วยน้ำกลั่น 2 ครั้งการล้างเซลล์ถูกระงับใน 50 มม. โดย–
HCl บัฟเฟอร์ pH 7.5 ) และบดโดย
เครื่องบำบัด ( 300 W ) ในช่วงเวลา 30 วินาทีนาน 20 นาทีใน
ไอซ์อาบ การแยกน้ำมันดิบคือระดับที่ 1000 × g
20 นาทีที่ 4 ° C สูงถูกใช้เป็นตัวละลาย cellfree
สารสกัด และกิจกรรมเอนไซม์คาร์บอกซีเปปติเดสบางหน
) กับ แอล - ไลซีน ( p-nitroanilide dihydrobromide )
.พีเอ็นเอ ) และ n-benzoyl-l-tyrosine-p-nitroanilide ( nbtpna )
) ตามลำดับ โซลูชั่น ( 20 มม. ) 2
nbtpna . เตรียมพื้นผิวและ PNA ใน N ndimethylformamide
และน้ำกลั่นตามลำดับ วิเคราะห์
ถูกหามออกจากกับปริมาณ 1 ml ผสมที่ประกอบด้วย
50  L ( 20 มม. , 850  L 100 mmtris – HCl บัฟเฟอร์
( อ 7.5 ) และ 100  L ของการสังเคราะห์สารสกัดส่วนผสมจะถูกบ่ม
37 ° C 10 นาทีปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดย
เพิ่ม 0.5 ml 1M HCl และระดับที่ 8 × g
10 นาทีค่าเป็น p-nitroaniline ใน
น่านวัดที่ 410 nm ใช้ไบโอ ราด xmark ™
พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน ( ไบโอ ราด ) Hercules , CA , USA )
หน่วยหนึ่งของกิจกรรมลูกเต้าตรงกับปริมาณเอนไซม์
ที่ปล่อย 1  โมลของ p-nitroaniline ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน

กิจกรรม endoproteinase วัด
โดยใช้ azocasein เป็นสับสเตรท ระบบปฏิกิริยาประกอบด้วย
1.25 % ( w / v ) azocasein ละลายใน 400  l ,
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และ 100  L ของการสังเคราะห์สารสกัด กลั่น
น้ำถูกใช้เป็นตัวควบคุมแทน
การสังเคราะห์สารสกัดหลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศา C นาน 60 นาที , 500  L 10 % ( w / v )
กรด trichloroacetic เพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลังการปั่นเหวี่ยง
ที่ 8 × G สำหรับ 10 นาที , การดูดกลืนแสงของน่านคือ
วัดที่ nm 440 หน่วยหนึ่งของกิจกรรม endoproteinase คือ
นิยามว่าปริมาณของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นของค่า
0.1 หน่วย เมื่อเทียบกับที่ของการควบคุม
ต่อนาทีที่ 37 องศาผลของโอปาดัชนี บางหน
คาร์บอกซีเปปติเดส endoproteinase , และกิจกรรมกิจกรรม aceinhibitory
ถูกทดสอบโดยของ Spearman Rank Correlation
ทดสอบด้วยโปรแกรม SPSS ( รุ่น 20 , SPSS Inc , ชิคาโก , IL , USA )