EXPERIMENTALMaterials and methodsAl

EXPERIMENTAL
Materials and methods
All the research work was carried out in the Microbiology Laboratory of the
Department of Zoology, Molecular Biology & Genetics, Presidency University, Kolkata,
India.
Collection of samples
Samples of dahi, waste juices of apple, pineapple, mango, musambi, grape,
sugarcane, orange and jaggery were collected randomly from local markets of different areas
of Kolkata in sterile bottles and kept at 4°C. These samples were screened for isolation of
the yeast strains.
Isolation of yeast strains
The samples were serially diluted, plated on a selective medium, Martins Rose
Bengal agar Medium (33.6 gm /liter) and were incubated at 28°C for 48 hours. The colonies
appeared were further purified. Pure colonies were isolated and tested for further
characterization.
Morphological characterization
The strains were stained by lactophenol-cotton blue, carbol fuchsin and seen under
phase contrast microscope. The colonies were checked for their colour, outline and other
features.
Determination of enzyme synthesizing ability
To detect their ability to assimilate various polysaccharides, the strains were grown
Int. J. Chem. Sci.: 9(2), 2011 649
in basal medium composed of (gL-1): peptone 0.9; (NH4)2HPO4 0.4; KCl 0.1;
MgSO4.7H2O (pH 7) at 28°C for 18 hours, supplemented with starch, carboxy methyl
cellulose, xylan and pectin (0.5) respectively. For in situ detection of amylase and cellulase
& xylanase activities, plates were flooded with iodine solution (I2 + KI) and congo red
solution respectively. The catalase activity was checked by dropping few drops of H2O2 on
the culture. The quantitative assay of cellulase, amylase, xylanase and pectinase was done by
dinitrosalicylic acid method12. For checking the efficacy of the strains to grow and produce
alcohol, each strain was cultivated in basal medium supplemented with various sugars and
organic and inorganic nitrogen sources.
Determination of alcohol producing ability
To detect their alcohol producing ability, quantitative estimation of ethanol by
potassium dichromate method13 was followed. The supernatant (1 mL) of centrifuged culture
broth of glucose-grown yeast strain was made up the volume to 5 mL with distilled water.
Then 1 mL of Potassium dichromate reagent was added. All the test tubes were kept in ice
water and 4 mL of conc. sulfuric acid added to each tube gently through the walls. Then the
optical density was measured at 660 nm. Alcohol standard was prepared by dissolving
absolute ethanol in water to get 10 mg/mL concentration.K2Cr2O7 solution was prepared by
dissolving 10 gm of K2Cr2O7 in distilled water in a 100 ml standard flask and make up the
volume to mark.
RESULTS AND DISCUSSION
Fourteen samples of dahi, jaggery and fruit juices were screened from where thirty
three yeast strains were isolated and purified (Table 1). Maximum yeast strains were isolated
from dahi samples, followed by sugarcane juice. Most of the isolated colonies exhibited
smooth surfaces with circular margins. The colour of the colonies showed a wide variation
of creamy white and pinkish. The cells were found to be of various shapes such as round;
oval, spherical and ellipsoidal (Table 2).
Table 1: Total number of isolates from dahi, various fruit juices and jaggery
Sources tested No. of samples
isolated
No. of strains
isolated
Alcohol
production
Dahi 6 12 ++
Apple juice 1 2 +
Cont…

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดลอง
วัสดุและวิธีการ
งานวิจัยทั้งหมดถูกทำในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาของการ
ภาควิชาสัตววิทยา อณูชีววิทยา&พันธุศาสตร์ มหาวิทยาลัยประธานาธิบดี กัลกัตตา,
อินเดีย
คอลเลกชันของตัวอย่าง
ของ dahi เสียน้ำแอปเปิ้ล สับปะรด มะม่วง musambi องุ่น,
อ้อย ส้ม และ jaggery ถูกเก็บรวบรวมได้จากตลาดท้องถิ่นของพื้นที่ต่าง ๆ
ของโคลคัตตาในขวดผ่านการฆ่าเชื้อ และเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ตัวอย่างเหล่านี้ถูกฉายสำหรับแยก
สายพันธุ์ยีสต์
แยกยีสต์
ตัวอย่างถูก serially ผสม ชุบบนกลางงาน โรส Martins
agar เบงกอลปานกลาง (33.6 กรัม/ลิตร) และ incubated ที่ 28° C ภายใน 48 ชั่วโมง อาณานิคม
ปรากฏบริสุทธิ์ได้อีกด้วย อาณานิคมที่บริสุทธิ์แยกต่างหาก และทดสอบต่อไป
จำแนก
จำแนกสัณฐาน
สายพันธุ์มีสี โดยสีฟ้าผ้าฝ้าย lactophenol, carbol fuchsin และเห็นใต้
กล้องจุลทรรศน์ระยะความคมชัด อาณานิคมถูกตรวจสอบสี เค้าร่าง และอื่น ๆ
คุณลักษณะ
เอนไซม์สังเคราะห์สามารถกำหนด
เพื่อตรวจสอบความสามารถในการสะท้อน polysaccharides ต่าง ๆ สายพันธุ์มีปลูก
อินต์ J. Chem. Sci.: 9(2), 2011 649
ในโรคประกอบด้วย (gL-1): peptone 0.9 (NH4) 2HPO4 0.4 KCl 0.1;
MgSO4.7H2O (pH 7) ที่ 28 ° C 18 ชั่วโมง เสริม ด้วยแป้ง carboxy methyl
เซลลูโลส xylan และเพกทิน (0.5) ตามลำดับ ตรวจใน situ amylase และ cellulase
&กิจกรรมไซลาเนส แผ่นถูกน้ำท่วม ด้วยโซลูชันไอโอดีน (I2 กี่) และสาธารณรัฐคองโกแดง
โซลูชั่นตามลำดับ มีการตรวจสอบกิจกรรม catalase โดยหยดของ H2O2 ใน
วัฒนธรรม ทำโดยการวิเคราะห์เชิงปริมาณของ cellulase, amylase ไซลาเนส และ pectinase
dinitrosalicylic method12 กรด สำหรับการตรวจสอบประสิทธิภาพของสายพันธุ์การปลูก และผลิต
แอลกอฮอล์ ต้องใช้แต่ละถูกปลูกในโรคกลางเสริม ด้วยน้ำตาลต่าง ๆ และ
แหล่งไนโตรเจนอินทรีย์ และอนินทรีย์
กำหนดความสามารถในการผลิตแอลกอฮอล์
สืบของพวกเขาสามารถผลิตเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ การประเมินเชิงปริมาณของเอทานอลโดย
method13 dichromate โพแทสเซียมถูกตาม Supernatant (1 mL) วัฒนธรรม centrifuged
ซุปต้องใช้ยีสต์เติบโตน้ำตาลในจะค่าปริมาตร 5 mL ด้วยน้ำกลั่น
แล้วเพิ่ม 1 mL ของรีเอเจนต์ dichromate โพแทสเซียม หลอดทดสอบทั้งหมดถูกเก็บไว้ในน้ำแข็ง
น้ำและ 4 มิลลิลิตรของกรดซัลฟิวริก conc. เพิ่มแต่ละหลอดเบา ๆ ผ่านผนัง นั้น
ถูกวัดความหนาแน่นออปติคัลที่ 660 nm มาตรฐานสุราถูกเตรียม โดยยุบ
เอทานอลนอนในน้ำจะได้รับความเข้มข้น 10 mg/mLโซลูชัน K2Cr2O7 ที่เตรียมโดย
ยุบ 10 กรัมของ K2Cr2O7 ในน้ำกลั่นในหนาวมาตรฐาน 100 ml และแต่ง
ปริมาตรเพื่อหมาย
ผลลัพธ์และสนทนา
สิบสี่ตัวอย่าง dahi, jaggery และผลไม้การทำนายถูกฉายจาก 30
3 ยีสต์ที่แยก และบริสุทธิ์ (ตารางที่ 1) ยีสต์สูงสุดถูกแยก
จากตัวอย่าง dahi ตาม ด้วยน้ำอ้อย จัดแสดงส่วนใหญ่ของอาณานิคมแยก
เรียบพื้นผิวกับขอบวงกลม สีของอาณานิคมแสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงที่กว้าง
สีขาวครีมและบัวโรย พบเซลล์ที่ มีรูปร่างต่าง ๆ เช่นกลม;
วงรี ทรงกลม และ ellipsoidal (ตารางที่ 2) .
ตาราง 1: จำนวนแยกจาก dahi ผลไม้ และต่าง ๆ jaggery
แหล่งทดสอบหมายเลข ตัวอย่าง
แยก
ไม่ ของสายพันธุ์
แยก
แอลกอฮอล์
ผลิต
Dahi 6 12
น้ำแอปเปิ้ล 1 2
Cont ...

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทดลอง
วัสดุและวิธีการ
ทั้งหมดงานวิจัยได้ดำเนินการในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาของ
ภาควิชาสัตววิทยาอณูชีววิทยาและพันธุศาสตร์ประธานมหาวิทยาลัยโกลกาตา,
อินเดีย
เก็บตัวอย่าง
ตัวอย่างซอู, น้ำผลไม้แอปเปิ้ลเสียสับปะรดมะม่วง musambi , องุ่น,
อ้อย, สีส้มและน้ำตาลโตนดสุ่มเก็บจากตลาดท้องถิ่นในพื้นที่ที่แตกต่างกัน
ของโกลกาตาในขวดผ่านการฆ่าเชื้อและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ตัวอย่างเหล่านี้ได้รับการคัดกรองแยก
ยีสต์สายพันธุ์
แยกยีสต์สายพันธุ์
ตัวอย่างถูกเจือจางลำดับชุบในสื่อเลือกมาร์ตินโรส
เบงกอลวุ้นกลาง (33.6 กรัม / ลิตร) และได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 28 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง โคโลนีที่
ปรากฏถูกที่บริสุทธิ์ต่อไป อาณานิคมบริสุทธิ์ที่แยกได้และการทดสอบเพิ่มเติม
ตัวละคร
ลักษณะทางสัณฐานวิทยา
สายพันธุ์มีการย้อมด้วยสีฟ้า lactophenol ฝ้ายฟุ carbol และเห็นภายใต้
กล้องจุลทรรศน์ระยะทางตรงกันข้าม โคโลนีที่ได้รับการตรวจสอบโครงร่างสีและอื่น ๆ ของพวกเขา
มี
การตรวจสอบความสามารถในการสังเคราะห์เอนไซม์
ในการตรวจสอบความสามารถในการดูดซึม polysaccharides ต่างสายพันธุ์ที่ได้รับการปลูก
Int เจ Chem Sci .: 9 (2), 2011 649
ในสื่อพื้นฐานประกอบด้วย (GL-1): เปปโตน 0.9; (NH4) 2HPO4 0.4; โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.1
MgSO4.7H2O (pH 7) วันที่ 28 ° C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง, เสริมด้วยแป้งเมธิล Carboxy
เซลลูโลสเพคตินและไซแลน (0.5) ตามลำดับ สำหรับในการตรวจสอบแหล่งกำเนิดของอะไมเลสและเซลลูเลส
และไซลาเนสกิจกรรมจานถูกน้ำท่วมด้วยสารละลายไอโอดีน (I2 + KI) และคองโกสีแดง
แก้ปัญหาตามลำดับ กิจกรรม catalase ถูกตรวจสอบโดยวางไม่กี่หยดของ H2O2 ใน
วัฒนธรรม การวิเคราะห์เชิงปริมาณของเซลลูเลส, ไซลาเนสอะไมเลสและเพคติเนสทำโดย
method12 กรด dinitrosalicylic สำหรับการตรวจสอบประสิทธิภาพของสายพันธุ์ที่จะเติบโตและการผลิต
เครื่องดื่มแอลกอฮอล์แต่ละสายพันธุ์ที่ได้รับการปลูกฝังในสื่อฐานเสริมด้วยน้ำตาลต่างๆและ
อินทรีย์และอนินทรีแหล่งไนโตรเจน
การกำหนดความสามารถในการผลิตเครื่องดื่มแอลกอฮอล์
เพื่อตรวจหาแอลกอฮอล์ในการผลิตความสามารถในการประเมินเชิงปริมาณของเอทานอลของพวกเขาโดย
โพแทสเซียมไดโครเม method13 ตามมา ใส (1 มิลลิลิตร) ของวัฒนธรรมปั่น
น้ำซุปของยีสต์กลูโคสปลูกถูกสร้างขึ้นปริมาณ 5 มิลลิลิตรด้วยน้ำกลั่น
แล้ว 1 มิลลิลิตรของโพแทสเซียมไดโครเมสารถูกเพิ่มเข้ามา ทุกหลอดทดลองถูกเก็บไว้ในน้ำแข็ง
น้ำและ 4 มิลลิลิตรเข้มข้น กรดกำมะถันเพิ่มในแต่ละหลอดเบา ๆ ผ่านผนัง จากนั้น
ความหนาแน่นของแสงวัดที่ 660 นาโนเมตร มาตรฐานเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ได้รับการจัดเตรียมโดยการละลาย
เอทานอลแน่นอนในน้ำที่จะได้รับ 10 mg / mL concentration.K2Cr2O7 การแก้ปัญหาที่ถูกจัดทำขึ้นโดย
การละลาย 10 กรัม K2Cr2O7 ในน้ำกลั่นใน 100 ml ขวดมาตรฐานและทำให้
ปริมาณที่จะทำเครื่องหมาย
ผลลัพธ์และการอภิปราย
สิบสี่ตัวอย่าง ของซอู, น้ำตาลโตนดและน้ำผลไม้ได้รับการคัดเลือกจากที่สามสิบ
สามสายพันธุ์ยีสต์ถูกแยกและทำให้บริสุทธิ์ (ตารางที่ 1) ยีสต์สูงสุดที่แยกได้
จากตัวอย่างซอูตามด้วยน้ำผลไม้อ้อย ส่วนใหญ่ของอาณานิคมแยกแสดง
พื้นผิวเรียบกับขอบวงกลม สีของโคโลนีที่แสดงให้เห็นความหลากหลาย
ของสีขาวครีมและสีชมพู เซลล์ที่พบว่ามีของรูปทรงต่างๆเช่นรอบ
รูปไข่ทรงกลมและรูปวงรี (ตารางที่ 2)
ตารางที่ 1: จำนวนของเชื้อจากซอู, น้ำผลไม้ต่างๆและน้ำตาลโตนด
แหล่งที่มาทดสอบจำนวนตัวอย่าง
แยก
ที่ สายพันธุ์
ที่แยก
แอลกอฮอล์
ผลิต
ซอู 6 12 ++
แอปเปิ้ลน้ำผลไม้ 1 2 +
ต่อ ...

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการทดลอง

ทุกงานวิจัยนี้เป็นการทดลองในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาของ
ภาควิชาสัตววิทยา ชีววิทยาระดับโมเลกุล&พันธุศาสตร์ ประธานมหาวิทยาลัยกัลกัตตา , อินเดีย ,
.

ตัวอย่างของคอลเลกชันของตัวอย่าง ดะฮีกากผลไม้ แอปเปิ้ล สับปะรด มะม่วง musambi , องุ่น ,
อ้อย ส้ม และ เลียบค่ายครั้งนี้สุ่มจากตลาดท้องถิ่นของพื้นที่แตกต่างกัน
ของโกลกาตาในขวดฆ่าเชื้อและเก็บที่อุณหภูมิ 4 องศา กลุ่มตัวอย่างเหล่านี้คัดกรองแยก

การแยกยีสต์สายพันธุ์ สายพันธุ์ยีสต์
จำนวนอนุกรมเจือจางชุบบนสื่อที่เลือก เบงกอลกลางวุ้นกุหลาบ
มาร์ติน ( 33.6 กรัม / ลิตร ) และอุณหภูมิ 28 องศา C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง อาณานิคม
ปรากฏได้บริสุทธิ์ อาณานิคมแยกบริสุทธิ์และทดสอบเพิ่มเติม
การศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยา
.
~ i สายพันธุ์ เปรอะเปื้อน ด้วยผ้าฝ้ายสีฟ้าแลคโตฟีนอลเท่า carbol , และเห็นภายใต้กล้องจุลทรรศน์ตรงกันข้าม
เฟส อาณานิคมถูกตรวจสอบสีของพวกเขา , ร่างและคุณสมบัติอื่น ๆ
.
หาเอนไซม์สังเคราะห์ความสามารถในการตรวจสอบความสามารถในการดูดซึม
polysaccharides ต่างๆ สายพันธุ์ ปลูก
Int . J . Chem . วิทย์ : 9 ( 2 ) 2011 649
ปานกลาง แรกเริ่มประกอบด้วย ( gl-1 ) : เปปโตน 0.9 ; ( NH4 ) 2hpo4 0.1 0.4 ; การเจริญเติบโต ;
mgso4.7h2o ( pH 7 ) ที่อุณหภูมิ 28 องศา C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง เสริมด้วยแป้งคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลสและเพกตินเนส
, ( 0.5 ) ตามลำดับ สำหรับในประเทศไทยการตรวจหาเอนไซม์อะไมเลสและเซลลูเลส
&เนสกิจกรรม , จานเต็มไปด้วยสารละลายไอโอดีน ( I2 กิ ) และคองโกเรด
แก้ปัญหาตามลำดับกิจกรรมที่สามารถถูกตรวจสอบโดยวางไม่กี่หยด H2O2 ใน
วัฒนธรรม วิเคราะห์เชิงปริมาณของเอนไซม์อะไมเลส และเอนไซม์ไซแลนเนส , า
dinitrosalicylic กรด method12 . สำหรับการตรวจสอบประสิทธิภาพของสายพันธุ์ที่ปลูกและผลิต
เหล้าแต่ละสายพันธุ์ที่ปลูกในแรกเริ่มเติมน้ำตาลต่าง ๆและ

แหล่งอินทรีย์และอนินทรีย์ไนโตรเจนการวิเคราะห์ความสามารถในการผลิตแอลกอฮอล์ของเหล้า
เพื่อตรวจสอบความสามารถในการผลิตเอทานอล โดยการประเมินเชิงปริมาณของโพแทสเซียมไดโครเมต
method13 ได้ตาม และน่าน ( 1 มล. ) ของระดับวัฒนธรรม
ซุปของกลูโคสยีสต์สายพันธุ์ที่ปลูก พบว่า ปริมาณ 5 ml ด้วยน้ำกลั่น .
แล้ว 1 มิลลิลิตร โพแทสเซียมไดโครเมตต์ถูกเพิ่มเข้ามา หลอดทดสอบทั้งหมดถูกเก็บไว้ในน้ำแข็ง
น้ำและ 4 ml เข้มข้น . กรดกำมะถันเพิ่มหลอดแต่ละเบา ๆผ่านผนัง จากนั้น
ซิกแซ็กถูกวัดที่ 660 นาโนเมตร มาตรฐานเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ถูกเตรียมโดยละลายในน้ำเอทานอล
แน่นอน 10 mg / ml ในสารละลายที่เตรียมโดย concentration.k2cr2o7
การละลายของ k2cr2o7 น้ำกลั่นใน 100 ml ขวดมาตรฐาน 10 กรัมและให้ขึ้น

และปริมาณผลการอภิปราย
มาร์ค14 ตัวอย่าง ดะฮี jaggery และน้ำผลไม้จากจากที่ 30
3 สายพันธุ์ยีสต์ที่แยกได้บริสุทธิ์ ( ตารางที่ 1 ) สายพันธุ์ยีสต์ที่แยกได้จากตัวอย่าง ดะฮี
สูงสุด รองลงมาคือ น้ำอ้อย ที่สุดของกาเวียน )
ผิวเรียบกับขอบวงกลม สีของโคโลนีมีความหลากหลายของครีม
สีขาวและสีชมพู .เซลล์ที่พบเป็นรูปร่างต่าง ๆ เช่น รอบ ;
รูปไข่ , ทรงกลม และทรงรี ( ตารางที่ 2 ) .
ตารางที่ 1 : จำนวนที่แยกได้จากดะฮี ต่าง ๆและผลไม้ jaggery
แหล่งทดสอบไม่ ตัวอย่าง

ไม่แยกสายพันธุ์



แยกแอลกอฮอล์ผลิตดะฮี 6 12
แอปเปิ้ล น้ำผลไม้ 1 2
ต่อ . . . . . . .