2. Materials and methods2.1. Koji p

2. Materials and methods
2.1. Koji preparation
Sixty percent of soybean was soaked in water for 6-8 h then autoclaved at 121°C for 40 min. Forty percent
of wheat bran was roasted to dark brown and broken. The 32% of total wheat bran was ground to powder and
mixed with culture before spreading to raw material to ensure mixing through of raw material. Spores of A.
oryzae S. NPUST-FS-206-A1 (0.1%) were inoculated into raw material and incubated at 30°C for 72h.
2.2. Enzyme extraction
The fermented matter was mixed with 0.1 M phosphate buffer (pH 6.9) (1:2 w/v) using a shaking incubator
(150 rpm, 30°C, 30 min). The supernatant was collected as crude enzyme extract by centrifugation at 10,000
xg, 4°C for 15 min.
2.3. Analytical methods
The moisture content of a fermented sample was determined by infrared moisture determination balance
(FD-720, Kett Electric Laboratory, Tokyo, Japan). The fermented matter was mixed with deionized water (1:2
w/v) by blender and the pH value was measured by pH meter (DKK-TOA, HM-25G, Japan).
Casein solution (0.65%) in 0.05 M phosphate buffer (pH 6.9) and 0.05 M carbonate buffer (pH 10) were
used as a substrate to analyze neutral and alkaline protease activity, respectively. One mL of crude enzyme Chuenjit Chancharoonpong et al. / APCBEE Procedia 2 ( 2012 ) 57 – 61 59
extract and 5 mL of casein were mixed and incubated at 30°C for 10 min. The reaction was arrested by adding
5 mL of trichloroacetic acid (TCA) and incubated for 30 min. After centrifugation at 10,000 xg for 10 min at
4°C, the supernatant was collected. The supernatant (2 mL) was reacted with 5 mL of 500 mM Na2CO3 and 1
mL of five-fold diluted Folin-Ciocalteau reagent for 10 min. Absorbance was read against a blank at 660 nm.
One unit of enzyme activity was defined as the amount of enzyme that liberated 1μg of tyrosine per minute
under assay conditions [10].
Amylase activity was measured with 1.0% soluble starch in 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0) as a
substrate. One mL of crude enzyme extract and 1 mL of soluble starch were mixed and incubated at 30°C for
10 min. After incubation, one mL of 3, 5-dinitrosalicylic acid was added, reacted in a boiling water bath for
15 min, cooled to room temperature and added with 9 mL of deionized water. The amylase activity was
analyzed spectrophotometrically at 540 nm. One unit of enzyme activity was defined as the amount of
enzyme that released 1 mM of reducing sugar as maltose per minute under the assay condition [11]. The
enzyme activity was reported per gram of dry koji used in the initial extraction. All the samples were analyzed
in triplicate.
2.4. Scanning electron microscope
Samples were fixed by 3% glutaraldehyde in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.0), dried by a critical point
dryer (HCP-2, Hitachi, Japan) and mounted on stub holders. The samples were then coated with gold in a
coater (E-1010, Hitachi, Japan) and investigated on a scanning electron microscope (Model S-3000N, Hitachi,
Japan).
3. Results and discussions
3.1. Physical properties of koji
As shown in Fig. 1a, the initial pH of koji was 6.32, then the pH decreased to 6.12 after 24 h of
fermentation. However, it increased to 6.97 at the end of fermentation period. Similar results have also been
reported for A. oryzae in soybean koji by Liang et al. [4]. The increasing of pH of fermented matter was due
to the microbial metabolic activities especially various extracellular proteins production [4].
Moisture in substrates brings a suitable water activity and swells substrates for mold growth [12]. The
results showed that the initial moisture content of koji was 40% then increased to 45% at 12 h cultivation.
However, it decreased to 22% after 72 h of fermentation (Fig. 1a). The high moisture content at the beginning
of fermentation period resulted in decreasing the porosity of substrates and reduction of heat transfer.
Consequently, low enzymes activities at the beginning of cultivation period (Fig. 1b) might be caused by the
increasing of temperature (data not shown) [13].
3.2. Enzyme production
The changes of neutral protease, alkaline protease and amylase production during soybean koji
fermentation were investigated (Fig. 1b). Neutral and alkaline protease activities of koji increased rapidly
after 24 h of fermentation. At 48 h of fermentation, soybean koji showed the highest neutral protease activity
at 84.38 unit/g of dry weight. However, alkaline protease activity was slightly increased and the activity was
lower than neutral protease. The highest alkaline protease activity was shown at the end of fermentation
period at 41.35 unit/g of dry weight. Amylase activity showed the highest activity (200 unit/g of dry weight)
at 72 h of fermentation. These results were similar to the previous study that extracellular proteins from A. 60 Chuenjit Chancharoonpong et al. / APCBEE Procedia 2 ( 2012 ) 57 – 61
oryzae on soybean koji were deduced by the intensity of time dependence during 48 h by digesting nutrients
from substrates [4].
Fig. 1. Changes of pH („) and moisture content (Ÿ) (a); neutral protease (Ɣ), alkaline protease („), and amylase (Ÿ) production (b)
during koji fermentation.
3.3. Growth of A. oryzae S. during koji fermentation
The growth of A. oryzae S. during koji fermentation was observed by a scanning electron microscope. As
shown in Fig. 2, A. oryzae S. grew continuously during cultivation period. The growth of mold also showed
the contrasting relation with the moisture content (Fig. 1a). The decrease of moisture content in koji is due to
the utilization of water in substrate by mold to generate mycelia [12].
Furthermore, the increasing of enzyme activity was also related to the growth of A. oryzae S. (Fig. 1b).
Sanchez and Pilosof (2000) have indicated that development of conidia and protease production of A. niger
are correlated during the fermentation period [14]. Additionally, the results showed that neither high content
of enzyme activity nor spore forming of mold was observed at the beginning of cultivation (24 h). However,
we found the formation of spores and the highest enzyme activities at 48 h of cultivation. The reason was
reported that the asexual cycle or spore forming is related to the secondary metabolite production, such as
enzyme and organic acid [3].
Fig. 2. Scanning electron micrographs of mycelium propagation on soybean koji fermentation. at 0 h (a), 24 h (b), 48 h (c) and 72 h (d).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. จิเตรียมหกเปอร์เซ็นต์ของถั่วเหลืองนำไปแช่ในน้ำ 6-8 h แล้ว autoclaved ที่ 121° C สำหรับ 40 นาทีสี่สิบเปอร์เซ็นต์ข้าวสาลี รำคั่วให้สีน้ำตาลเข้ม และเสีย 32% ของรำข้าวสาลีรวมถูกพื้นดินผง และผสมกับวัฒนธรรมก่อนที่จะแพร่กระจายไปให้ผสมวัตถุดิบโดยใช้วัตถุดิบ เพาะเฟิร์นของอ.แห้งระดับต่าง ๆ S. NPUST-FS-206-A1 (0.1%) มี inoculated เป็นวัตถุดิบ และ incubated ที่ 30° C สำหรับ 72h2.2. เอนไซม์สกัดเรื่องร้าถูกผสมกับ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) (1:2 w/v) ใช้บ่มเพาะวิสาหกิจงก ๆ(150 รอบต่อนาที,-30° C, 30 นาที) Supernatant ถูกรวบรวมเป็นสารสกัดเอนไซม์ดิบ โดย centrifugation ที่ 10000xg, 4° C สำหรับ 15 นาที2.3 การวิเคราะห์วิธีชื้นของตัวอย่างร้าถูกกำหนด โดยความชื้นอินฟราเรดกำหนดดุล(FD-720 ห้องปฏิบัติการไฟฟ้า Kett โตเกียว ญี่ปุ่น) เรื่องหมักที่ผสม ด้วยน้ำ deionized (1:2w/v) โดยเบลนเดอร์และ pH ค่าที่วัด โดยเครื่องวัดค่า pH (DKK-โตอะ HM - 25 G ญี่ปุ่น)เคซีนโซลูชัน (0.65%) ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) และ 0.05 M คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ (pH 10)ใช้เป็นพื้นผิวการวิเคราะห์กิจกรรมรติเอสเป็นกลาง และด่าง ตามลำดับ ML หนึ่งของเอนไซม์ดิบ Chuenjit Chancharoonpong et al. / APCBEE Procedia 2 (2012) 59 57 – 61สารสกัดและ 5 mL ของเคซีนถูกผสม และ incubated ที่ 30° C สำหรับ 10 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกจับกุม โดยการเพิ่ม5 mL ของกรด trichloroacetic (TCA) และ incubated สำหรับ 30 นาที หลังจาก centrifugation ที่ xg 10000 ใน 10 นาทีที่4° C, supernatant ถูกรวบรวม Supernatant (2 mL) เป็นปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับ 5 mL 500 มม. Na2CO3 และ 1mL five-fold รีเอเจนต์ Folin-Ciocalteau แตกออกสำหรับ 10 นาที Absorbance ที่อ่านกับช่องว่างที่ 660 nmหน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ liberated 1μg ของ tyrosine ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขทดสอบ [10]กิจกรรม amylase ถูกวัด ด้วยแป้งละลาย 1.0% ในบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม 0.1 M (pH 5.0) เป็นการพื้นผิว ML หนึ่งของเอนไซม์ดิบแยก และ 1 mL ของแป้งที่ละลายน้ำได้ผสม และ incubated ที่ 30° C สำหรับ10 นาที หลังจากบ่ม mL หนึ่งของ 3, 5-dinitrosalicylic กรดเพิ่ม ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นในน้ำน้ำเดือดสำหรับ15 นาที ระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิห้อง และเพิ่ม มี 9 mL น้ำ deionized กิจกรรม amylase ได้spectrophotometrically วิเคราะห์ที่ 540 nm หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มม.ลดน้ำตาลเป็น maltose ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [11] ที่รายงานกิจกรรมของเอนไซม์ต่อกรัมของจิแห้งที่ใช้ในการสกัดครั้งแรก มีวิเคราะห์ตัวอย่างทั้งหมดใน triplicate2.4 การการสแกนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนตัวอย่างที่กำหนด โดยการ glutaraldehyde 3% ใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), ที่แห้งตามจุดสำคัญเครื่องเป่า (HCP 2 ฮิตาชิ ญี่ปุ่น) และติดตั้งบนขั้วใส่ ตัวอย่างถูกเคลือบ ด้วยทองแล้วยังcoater (E-1010 ฮิตาชิ ญี่ปุ่น) และตรวจสอบในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนการสแกน (รุ่น S 3000N ฮิตาชิญี่ปุ่น)3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1. ทางกายภาพคุณสมบัติของจิตามที่แสดงใน Fig. 1a, pH เริ่มต้นของจิถูก 6.32 แล้ว pH ลดลงถึง 6.12 หลังจาก 24 ชมของหมัก อย่างไรก็ตาม มันเพิ่มขึ้น 6.97 ที่สิ้นสุดของรอบระยะเวลาการหมัก ยังได้ผลเหมือนกันรายงานสำหรับอ.แห้งระดับต่าง ๆ ในถั่วเหลืองจิโดยเหลียง et al. [4] เพิ่มขึ้นของ pH เรื่องหมักครบกิจกรรมเผาผลาญจุลินทรีย์โดยเฉพาะอย่างยิ่งต่าง ๆ โปรตีน extracellular ผลิต [4]ความชื้นในพื้นผิวนำกิจกรรมน้ำเหมาะสม และ swells พื้นผิวสำหรับโมลด์เติบโต [12] ที่ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า เนื้อหาความชื้นเริ่มต้นของจิ 40% แล้วเพิ่มขึ้น 45% ปลูก 12 hอย่างไรก็ตาม มันลดลง 22% หลัง h 72 ของหมักดอง (Fig. 1a) ชื้นสูงต้นระยะเวลาหมักให้ลด porosity ของพื้นผิวและลดการถ่ายเทความร้อนดังนั้น กิจกรรมเอนไซม์ต่ำสุดที่จุดเริ่มต้นของรอบระยะเวลาการเพาะปลูก (Fig. 1b) อาจมีสาเหตุมาจากการการเพิ่มของอุณหภูมิ (ข้อมูลไม่แสดง) [13]3.2 ผลิตเอนไซม์การเปลี่ยนแปลงของรติเอสกลาง รติเอสด่าง และ amylase ผลิตระหว่างถั่วเหลืองจิหมักถูกสอบสวน (Fig. 1b) เป็นกลางและด่างรติเอสจิกิจกรรมเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วหลังจากหมัก 24 ชม H 48 ของหมักดอง ถั่วเหลืองจิพบกิจกรรมกลางรติเอสสูงสุดที่ 84.38 หน่วย/กรัมของน้ำหนักแห้ง อย่างไรก็ตาม กิจกรรมรติเอสด่างเล็กน้อยเพิ่มขึ้น และมีกิจกรรมต่ำกว่ารติเอสเป็นกลาง กิจกรรมด่างรติเอสสูงสุดแสดงในตอนท้ายของหมักดองระยะเวลาที่หน่วย 41.35 กรัมของน้ำหนักแห้ง Amylase กิจกรรมพบว่ากิจกรรมสูงสุด (200 หน่วย/กรัมของน้ำหนักแห้ง)ที่ h 72 ของหมักดอง เหล่านี้ก็คล้ายกับการศึกษาก่อนหน้านี้ที่ว่า extracellular โปรตีนจาก A. 60 Chuenjit Chancharoonpong et al. / APCBEE Procedia 2 (2012) 57-61แห้งระดับต่าง ๆ ในถั่วเหลืองจิมี deduced โดยความเข้มของการพึ่งพาเวลาระหว่าง 48 h โดย digesting สารอาหารจากพื้นผิว [4]Fig. 1 การเปลี่ยนแปลงของค่า pH เนื้อหา()และความชื้น (Ÿ) (a); รติเอสกลาง (Ɣ), ()รติเอสด่าง และผลิต amylase (Ÿ) (b)ในระหว่างการหมักดองจิ3.3 การเจริญเติบโตของ S. แห้งระดับต่าง ๆ อ.ระหว่างหมักจิการเติบโตของแห้งระดับต่าง ๆ A. S. ระหว่างหมักจิถูกตรวจสอบ ด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนการสแกน เป็นแสดงใน Fig. 2 แห้งระดับต่าง ๆ A. S. โตอย่างต่อเนื่องในช่วงระยะเวลาเพาะปลูก นอกจากนี้ยังพบการเติบโตของราความสัมพันธ์ที่แตกต่างกันกับชื้น (Fig. 1a) การลดลงของชื้นจิจะครบกำหนดการใช้ประโยชน์ของน้ำในพื้นผิวโดยแม่พิมพ์สร้าง mycelia [12]นอกจากนี้ เพิ่มเอนไซม์ถูกยังเกี่ยวข้องกับการเติบโตของแห้งระดับต่าง ๆ A. S. (Fig. 1b)ซานและ Pilosof (2000) ได้แสดงให้เห็นการพัฒนาของ conidia และรติเอสผลิตไนเจอร์อ.มี correlated ช่วงหมัก [14] นอกจากนี้ ผลชี้ให้เห็นว่าเนื้อหาไม่สูงของเอนไซม์ กิจกรรมหรือเป็นสปอร์ของราได้สังเกตที่จุดเริ่มต้นของการเพาะปลูก (24 ชม) อย่างไรก็ตามเราพบการก่อตัวของเพาะเฟิร์นและกิจกรรมของเอนไซม์สูงสุดที่ h 48 ของการเพาะปลูก มีเหตุผลรายงานว่า วงจร asexual หรือสปอร์ที่เป็นเกี่ยวข้องกับการผลิต metabolite รอง เช่นเอนไซม์และกรดอินทรีย์ [3]Fig. 2 การสแกน micrographs อิเล็กตรอนของ mycelium แพร่กระจายในถั่วเหลืองหมักจิ ที่ 0 h (ก) 24 h (b) 48 h (c) และ 72 h (d)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 โคจิเตรียม
หกสิบเปอร์เซ็นต์ของถั่วเหลืองแช่ในน้ำ 6-8 ชั่วโมงแล้วนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาที สี่สิบเปอร์เซ็นต์
ของรำข้าวสาลีได้รับการคั่วน้ำตาลเข้มและหัก 32% ของรำข้าวสาลีทั้งหมดถูกบดเป็นผงและ
ผสมกับวัฒนธรรมก่อนที่จะกระจายไปยังวัตถุดิบเพื่อให้แน่ใจว่าการผสมผ่านของวัตถุดิบ สปอร์ของ A.
oryzae S. NPUST-FS-206-A1 (0.1%) ถูกเชื้อเป็นวัตถุดิบและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72h.
2.2 เอนไซม์สกัด
เรื่องหมักผสมกับ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) (1: 2 w / v) โดยใช้ศูนย์บ่มเพาะสั่น
(150 รอบต่อนาที, 30 ° C 30 นาที) ใสถูกเก็บเป็นสารสกัดจากเอนไซม์โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000
XG 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที.
2.3 วิธีการวิเคราะห์
ปริมาณความชื้นของตัวอย่างหมักถูกกำหนดโดยความมุ่งมั่นอินฟราเรดสมดุลความชื้น
(FD-720, Kett ไฟฟ้าห้องปฏิบัติการ, โตเกียว, ญี่ปุ่น) เรื่องหมักผสมกับน้ำกลั่นปราศจากไอออน (1: 2
w / v) โดยเครื่องปั่นและค่า pH โดยวัดจากค่า pH เมตร (DKK-TOA, HM-25G, ญี่ปุ่น).
การแก้ปัญหาเคซีน (0.65%) ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) และ 0.05 M บัฟเฟอร์คาร์บอเนต (pH 10) ถูก
นำมาใช้เป็นสารตั้งต้นในการวิเคราะห์กิจกรรมโปรติเอสที่เป็นกลางและด่างตามลำดับ หนึ่งมิลลิลิตรของเอนไซม์ชื่นจิตร Chancharoonpong และคณะ / APCBEE Procedia 2 (2012) 57-61 59
และสารสกัดจาก 5 มิลลิลิตรเคซีนถูกผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ปฏิกิริยาถูกจับกุมโดยการเพิ่ม
5 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโร (TCA) และบ่มเป็นเวลา 30 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 xg เป็นเวลา 10 นาทีที่
4 องศาเซลเซียสใสถูกเก็บรวบรวม ใส (2 มิลลิลิตร) ได้รับการตอบสนองด้วย 5 มิลลิลิตร 500 มิลลิ Na2CO3 และ 1
มิลลิลิตรห้าเท่าเจือจางน้ำยา Folin-Ciocalteau เป็นเวลา 10 นาที ดูดซับได้อ่านกับว่างเปล่าที่ 660 นาโนเมตร.
หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่มีอิสรเสรี1μgของซายน์ต่อนาที
ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [10].
กิจกรรมอะไมเลสได้รับการวัดที่มี 1.0% แป้งละลายใน 0.1 M โซเดียมอะซิเตท บัฟเฟอร์ (pH 5.0) เป็น
สารตั้งต้น หนึ่งมิลลิลิตรของสารสกัดจากเอนไซม์และ 1 มิลลิลิตรของแป้งที่ละลายน้ำได้ถูกผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
10 นาที หลังจากการบ่มหนึ่งมิลลิลิตร 3 กรด 5- dinitrosalicylic ถูกเพิ่มปฏิกิริยาในอ่างน้ำเดือด
15 นาทีเย็นที่อุณหภูมิห้องและเพิ่มกับ 9 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออน กิจกรรมอะไมเลสที่ได้รับการ
วิเคราะห์ spectrophotometrically ที่ 540 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของ
เอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มิลลิของการลดน้ำตาลมอลโตสต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [11]
กิจกรรมของเอนไซม์ที่มีการรายงานต่อกรัมของโคจิแห้งที่ใช้ในการสกัดการเริ่มต้น ตัวอย่างทั้งหมดถูกนำมาวิเคราะห์
ในเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2.4 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน
ตัวอย่างได้รับการแก้ไขโดย glutaraldehyde 3% 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) แห้งโดยจุดสำคัญ
เครื่องเป่า (HCP-2, ฮิตาชิ, ประเทศญี่ปุ่น) และติดตั้งอยู่บนถือต้นขั้ว ตัวอย่างถูกแล้วเคลือบด้วยทองใน
Coater (E-1010, ฮิตาชิ, ประเทศญี่ปุ่น) และการตรวจสอบในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (รุ่น S-3000N, Hitachi,
ญี่ปุ่น).
3 และการอภิปรายผล
3.1 คุณสมบัติทางกายภาพของโคจิ
ดังแสดงในรูป 1a, pH เริ่มต้นของโคจิเป็น 6.32 แล้วค่า pH ลดลง 6.12 หลังจาก 24 ชั่วโมงของ
การหมัก แต่ก็เพิ่มขึ้นเป็น 6.97 ณ วันสิ้นงวดการหมัก ผลที่คล้ายกันนอกจากนี้ยังมี
รายงาน A. oryzae ในโคจิถั่วเหลืองโดยเหลียงและคณะ [4] ที่เพิ่มขึ้นของค่า pH ของเรื่องหมักเนื่องจาก
ในกิจกรรมการเผาผลาญอาหารของจุลินทรีย์โดยเฉพาะอย่างยิ่งการผลิตโปรตีนเซลล์ต่างๆ [4].
ความชื้นในพื้นผิวที่จะนำกิจกรรมทางน้ำที่เหมาะสมและฟูพื้นผิวสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อรา [12]
ผลการศึกษาพบว่าความชื้นเริ่มต้นของโคจิเป็น 40% จากนั้นเพิ่มขึ้นถึง 45% ใน 12 ชั่วโมงการเพาะปลูก.
แต่ก็ลดลงถึง 22% หลังจาก 72 ชั่วโมงของการหมัก (รูป. 1a) ความชื้นสูงที่จุดเริ่มต้น
ของระยะเวลาการหมักผลในการลดความพรุนของพื้นผิวและลดการถ่ายเทความร้อน.
ดังนั้นกิจกรรมเอนไซม์ต่ำที่จุดเริ่มต้นของระยะเวลาการเพาะปลูก (รูปที่ 1b.) อาจจะมีสาเหตุมาจากการ
เพิ่มขึ้นของอุณหภูมิ (ข้อมูลไม่ได้ แสดง) [13].
3.2 การผลิตเอนไซม์
โปรติเอสของการเปลี่ยนแปลงที่เป็นกลางโปรติเอสและอัลคาไลน์การผลิตอะไมเลสในช่วงโคจิถั่วเหลือง
หมักที่ได้รับการตรวจสอบ (รูปที่ 1b.) เป็นกลางและกิจกรรมโปรติเอสอัลคาไลน์ของโคจิเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็ว
หลังจาก 24 ชั่วโมงของการหมัก ใน 48 ชั่วโมงของการหมัก, โคจิถั่วเหลืองมีฤทธิ์เป็นกลางโปรติเอสสูงสุด
ที่ 84.38 หน่วย / กรัมของน้ำหนักแห้ง อย่างไรก็ตามกิจกรรมโปรติเอสอัลคาไลน์ที่เพิ่มขึ้นเล็กน้อยและกิจกรรมได้
ต่ำกว่าโปรติเอสที่เป็นกลาง กิจกรรมโปรติเอสอัลคาไลน์ที่สูงที่สุดก็แสดงให้เห็นในตอนท้ายของการหมัก
ระยะเวลาที่ 41.35 หน่วย / กรัมของน้ำหนักแห้ง กิจกรรมอะไมเลสแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมสูงสุด (200 หน่วย / กรัมของน้ำหนักแห้ง)
ที่ 72 ชั่วโมงของการหมัก ผลลัพธ์เหล่านี้มีความคล้ายคลึงกับการศึกษาก่อนหน้านี้ที่คุณสมบัติโปรตีนจาก A. 60 Chancharoonpong ชื่นจิตรและคณะ / APCBEE Procedia 2 (2012) 57-61
oryzae ในโคจิถั่วเหลืองถูกอนุมานโดยความรุนแรงของการพึ่งพาอาศัยกันในช่วงเวลา 48 ชั่วโมงโดยการย่อยสารอาหาร
จากพื้นผิว [4].
รูป 1. การเปลี่ยนแปลงของค่า pH (??) และความชื้น (Y) (); โปรติเอสที่เป็นกลาง (ɣ), อัลคาไลน์โปรติเอส (??) และอะไมเลส (Y) การผลิต (ข)
ในระหว่างการหมักโคจิ.
3.3 การเจริญเติบโตของ A. oryzae S. ระหว่างการหมักโคจิ
การเจริญเติบโตของ A. oryzae S. ระหว่างการหมักโคจิได้รับการตรวจสอบโดยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ในฐานะที่
แสดงในรูป 2, A. oryzae เอสเติบโตอย่างต่อเนื่องในช่วงระยะเวลาการเพาะปลูก เจริญเติบโตของเชื้อรายังแสดงให้เห็น
ความสัมพันธ์ข้ามกับปริมาณความชื้น (รูป. 1a) การลดลงของปริมาณความชื้นในโคจิเกิดจากการ
ใช้ประโยชน์ของน้ำในพื้นผิวแม่พิมพ์โดยการสร้างเส้นใย [12].
นอกจากนี้ที่เพิ่มขึ้นของกิจกรรมของเอนไซม์ถูกยังเกี่ยวข้องกับการเจริญเติบโตของ A. oryzae S. (รูปที่ 1b.)
ชีซ์และ Pilosof (2000) ได้ชี้ให้เห็นว่าการพัฒนาของสปอร์และการผลิตโปรติเอสของไนเจอร์ A.
มีความสัมพันธ์ในช่วงระยะเวลาการหมัก [14] นอกจากนี้ผลการศึกษาพบว่าทั้งเนื้อหาที่สูง
ของเอนไซม์หรือสร้างสปอร์ของเชื้อราเป็นข้อสังเกตที่จุดเริ่มต้นของการเพาะปลูก (24 ชั่วโมง) แต่
เราพบว่าการก่อตัวของสปอร์และการทำงานของเอนไซม์สูงสุดใน 48 ชั่วโมงของการเพาะปลูก เหตุผลที่ถูก
รายงานว่าวงจรกะเทยหรือสร้างสปอร์ที่เกี่ยวข้องกับการผลิต metabolite รองเช่น
เอนไซม์และกรดอินทรีย์ [3].
รูป 2. กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบสแกนของการขยายพันธุ์เส้นใยในการหมักถั่วเหลืองโคจิ ที่ 0 ชั่วโมง (ก) 24 ชั่วโมง (ข) 48 ชั่วโมง (c) และ 72 ชั่วโมง (ง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . โคจิ การเตรียม
ร้อยละหกสิบของถั่วเหลืองแช่น้ำ 6-8 H แล้วสังเคราะห์ที่ 121 ° C เป็นเวลา 40 นาที สี่สิบเปอร์เซ็นต์
รําข้าวสาลีคือคั่วกับน้ำตาลเข้ม และแตก 32 % ของรำข้าวสาลี รวมกับผงและดินผสมกับวัฒนธรรม
ก่อนที่จะแพร่กระจายไปยังวัตถุดิบ เพื่อให้ผ่านการผสมของวัตถุดิบ สปอร์
oryzae . npust-fs-206-a1 ( 01 ) ปลูกเชื้อในวัตถุดิบและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C 72h .
2.2 . การสกัดเอนไซม์
เรื่องหมักผสมกับ 0.1 M phosphate buffer pH 6.9 ) ( 1 : 2 W / V ) ใช้เขย่าตู้
( 150 รอบต่อนาที , 30 องศา C 30 นาที ) และน่านถูกรวบรวมเป็นเอนไซม์ที่สกัดโดยการเหวี่ยงแยกที่ 10
XG 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที
2.3 วิธีการวิเคราะห์
ความชื้นของตัวอย่างที่ถูกกำหนดโดยอินฟราเรดหมักความชื้นการหาสมดุล
( fd-720 เขตไฟฟ้า , ห้องปฏิบัติการ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) เรื่องหมักผสมกับน้ำ ( คล้ายเนื้อเยื่อประสาน 1 : 2
w / v ) โดยเครื่องปั่นและค่า pH วัดโดยเครื่องวัด ( dkk-toa hm-25g , ญี่ปุ่น )
, โซลูชั่น ( 0.65 % ) ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.9 ) และ 0.05 M คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 10 )
ใช้เป็นสารตั้งต้นเพื่อวิเคราะห์เป็นกลางและเอนไซม์อัลคาไลน์โปรติเอส ตามลำดับ หนึ่งมิลลิลิตรเอนไซม์ชื่นใจ ศรีพงษ์พันธุ์กุล และคณะ / apcbee procedia 2 ( 2012 ) 57 และ 59 และ 61
5 มิลลิลิตร สารสกัดโปรตีนผสมบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C นาน 10 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกจับโดยการเพิ่ม
5 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) และบ่มเป็นเวลา 30 นาที หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 10000 XG 10 นาที
4 ° C , นำมันเก็บ และน่าน ( 2 มล. ) คือปฏิกิริยากับ 5 ml ของ Na2CO3 500 มม. และ 1
4 ห้าพับ folin ciocalteau เจือจางสารเคมีเป็นเวลา 10 นาทีก็อ่านต่อค่าว่างที่ 660 nm .
หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์อิสระ 1 μกรัมต่อนาที
ภายใต้เงื่อนไขแต่อย่างใด [ 10 ] ( . . .
กิจกรรมเอนไซม์อะไมเลสวัดด้วย 10 % ละลายแป้งใน 0.1 โมลาร์โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) เป็น
พื้นผิว หนึ่งมิลลิลิตร สารสกัดเอนไซม์ 1 มิลลิลิตร และปริมาณแป้งผสมบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C
10 นาทีหลังจากระยะเวลาหนึ่งประมาณ 3 , 5-dinitrosalicylic เติมกรดทำปฏิกิริยาในน้ำอาบ
15 นาที เย็นที่อุณหภูมิห้องและเพิ่ม 9 มิลลิลิตร คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ ส่วนกิจกรรม
เลสวิเคราะห์นี้ 540 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1
มม. ลดน้ำตาลมอลโตสต่อนาทีภายใต้การทดสอบเงื่อนไข [ 11 ]
กิจกรรมเอนไซม์รายงานแห้ง 1 กรัม โคจิที่ใช้ในการสกัดสารตั้งต้น กลุ่มตัวอย่างทั้งหมด วิเคราะห์
ทั้งสามใบ
2.4 . กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน
จำนวนคงที่ 3 % glutaraldehyde ใน 0.1M phosphate buffer pH 7.0 ) , อบแห้งด้วยเครื่องอบแห้งแบบจุดวิกฤต (
hcp-2 , ฮิตาชิ , ญี่ปุ่น ) และติดตั้งบนถือต้นขั้ว จำนวน แล้วเคลือบด้วยทองใน
เครื่องเคลือบ ( e-1010 , ฮิตาชิ , ญี่ปุ่น ) และศึกษาบนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( แบบ s-3000n , ฮิตาชิ ,
ญี่ปุ่น )
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . สมบัติทางกายภาพของโคจิ
ดังแสดงในรูปที่1A , pH เริ่มต้นของโคจิเป็น 6.32 แล้ว pH ลดลง 6.12 หลังจากชั่วโมงที่ 24 ของการหมัก
. แต่มันเพิ่มขึ้น 6.97 เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาการหมัก ผลที่คล้ายกันได้รับ
รายงาน . oryzae ในถั่วเหลือง โคจิ โดยเลี่ยง et al . [ 4 ] การเพิ่ม pH ของเรื่องหมักกับจุลินทรีย์เนื่องจาก
กิจกรรมสลายโปรตีนสำคัญต่าง ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งการผลิต
[ 1 ]ความชื้นในวัสดุที่ทำให้น้ำและกิจกรรมที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อราฟู ) [ 12 ]
ผลการทดลองพบว่า ความชื้นเริ่มต้นของโคจิเป็น 40% และเพิ่มขึ้นเป็น 45% ในการเพาะปลูก 12 H .
แต่ลดลง 22% หลังจาก 72 ชั่วโมงของการหมัก ( รูปที่ 1A ) ความชื้นสูงเนื้อหาที่จุดเริ่มต้น
ระยะเวลาการหมักทำให้ลดความพรุนของพื้นผิวและลดการถ่ายโอนความร้อน
ดังนั้นต่ำเอนไซม์กิจกรรมที่เริ่มต้นของระยะเวลาการเพาะปลูก ( รูปที่ 1A ) อาจจะเกิดจากการเพิ่มขึ้นของอุณหภูมิ
( ข้อมูลไม่แสดง ) [ 13 ] .
2 . การผลิตเอนไซม์โปรติเอส
การเป็นกลาง และในระหว่างการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสจากถั่วเหลืองโคจิ
การหมัก คือ ( รูปที่ 1A ) เป็นกลางและการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสกิจกรรมของโคจิเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็ว
หลังจากชั่วโมงที่ 24 ของการหมัก 48 ชั่วโมงของการหมักโคจิถั่วเหลืองแสดงกิจกรรมสูงสุดที่ติ
เป็นกลาง 84.38 หน่วย / กรัมน้ำหนักแห้ง อย่างไรก็ตาม กิจกรรมของอัลคาไลน์โปรติเอสเพิ่มขึ้นเล็กน้อย และกิจกรรม
กว่าโปรที่เป็นกลางกิจกรรมอัลคาไลน์โปรติเอสสูงสุดคือการแสดงที่สิ้นสุดระยะเวลาการหมัก
ที่ 41.35 หน่วย / กรัมน้ำหนักแห้ง กิจกรรมเอนไซม์อะไมเลส พบกิจกรรมสุด ( 200 หน่วย / กรัมน้ำหนักแห้ง )
ที่ 72 ชั่วโมงของการหมัก ผลลัพธ์เหล่านี้คล้ายคลึงกับการศึกษาก่อนหน้านั้นพบว่า โปรตีนจาก ก. 60 ชื่นใจ ศรีพงษ์พันธุ์กุล และคณะ / apcbee procedia 2 ( 2012 ) 57 – 61
ถั่วเหลืองถูก deduced โดยโคจิ oryzae ในความเข้มของการใช้เวลาระหว่าง 48 ชั่วโมง โดยจะย่อยสารอาหาร
จากพื้นผิว [ 4 ] .
รูปที่ 1 การเปลี่ยนแปลงของ pH ( " ) และความชื้น ( Ÿ ) ( ) ; โปรตีเอสเป็นกลาง ( Ɣ ) , อัลคาไลน์โปรติเอส ( " ) , และอะไมเลส ( Ÿ ) การผลิต ( B )

ระหว่างโคจิการหมัก และ 3 . A . oryzae . ในระหว่างการเจริญเติบโตของโคจิการหมัก
การเจริญเติบโตของ A . oryzae sในระหว่างการหมักโคจิสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ตามที่แสดงในรูปที่ 2
, A . oryzae s เติบโตอย่างต่อเนื่องในช่วงระยะเวลาการเพาะปลูก การเจริญเติบโตของเชื้อรา พบ
ตัดความสัมพันธ์กับความชื้น ( รูปที่ 1A ) การลดลงของความชื้นในโคจิ เนื่องจากการใช้น้ำสูง
โดยแม่พิมพ์เพื่อสร้างเส้นใย [ 12 ] .
นอกจากนี้การเพิ่มของกิจกรรมเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการเจริญเติบโตของ A . oryzae . ( รูปที่ 1A ) .
Sanchez และ pilosof ( 2000 ) พบว่า การพัฒนา และการผลิตโปรติเอสนี้ของ A . niger
มีความสัมพันธ์กันในช่วงระยะเวลาการหมัก [ 14 ] นอกจากนี้ พบว่า ไม่สูง เนื้อหา
กิจกรรมของเอนไซม์หรือสปอร์ขึ้นรูปแม่พิมพ์พบว่าจุดเริ่มต้นของการปลูก ( ตลอด 24 ชั่วโมง ) อย่างไรก็ตาม เราพบการก่อตัวของ
สปอร์ และกิจกรรมเอนไซม์สูงสุดที่ 48 ชั่วโมงของการ เหตุผลคือ
รายงานว่าวงจรไม่มีเพศ หรือเกี่ยวข้องกับการสร้างสปอร์ไลท์ผลิต เช่น
เอนไซม์และกรดอินทรีย์ [ 3 ] .
รูปที่ 2ด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน micrographs การขยายพันธุ์ของเส้นใยถั่วเหลืองโคจิการหมัก 0 H ( a ) H ( B ) , 24 , 48 และ 72 H ( c ) H ( D )