Nineteen SSR primers (Mir et al., 2008, 2009) were used for screening eight genotypes of both species of jute. Of these, six SSR primers (Table 2) produced clear polymorphic bands in this study. PCR reactions were performed in 10 μL reaction volumes containing approximately 20 ng of jute template DNA, 1X PCR buffer [(750 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C), 200 mM (NH4)2SO4 0.1% (v/v)], 1.5 mM MgCl2, 0.1 mM dNTPs, 0.5 μM of each primer and 0.3 unit of Taq DNA polymerase (Fermentas; Burlington, Ontario Canada). The reaction mixture was subjected to PCR amplification in a T1 Thermocycler (Biometra; Goettingen, Germany) using a PCR program of: preheating for 2 min at 94 °C; 30 cycles, each for 30 s at 94 °C (denaturation), 30 s at the annealing temperature of a particular primer pair (ranges were 56–60 °C), and 30 s at 72 °C for 1 min (extension) and a final extension at 72 °C for 5 min followed by cooling at 16 °C for an indefinite time.
ไพรเมอร์ยังคงเก้า (Mir et al. 2008, 2009) ใช้สำหรับคัดกรองไทป์แปดของปอทั้งสองชนิดนี้ เหล่านี้ ไพรเมอร์ยังคงหก (ตาราง 2) ผลิตวง polymorphic ชัดเจนในการศึกษานี้ ดำเนินปฏิกิริยา PCR ในปริมาณปฏิกิริยา μL 10 ที่ประกอบด้วยประมาณ 20 ฉบับของปอแม่ดีเอ็นเอ 1 X PCR บัฟเฟอร์ [(750 มม.ทริ HCl (ค่า pH 8.8 ที่ 25° C), 200 mM (NH4) 2SO4 0.1% (v/v)], 1.5 มม. MgCl2, dNTPs 0.1 mM รองพื้นละ 0.5 Μm และ 0.3 หน่วย Taq DNA พอลิเมอเรส (Fermentas เบอร์ลิงตัน ออนตาริโอแคนาดา) ผสมปฏิกิริยาภายใต้ปลักในเครื่อง Thermocycler T1 (Biometra กอตติงเกน เยอรมนี) โดยใช้โปรแกรม PCR ของ: อุ่น 2 นาทีที่ 94 ° C รอบ 30 แต่ละ 30 s ที่ 94 ° C (denaturation), 30 s ที่อุณหภูมิหลอมคู่รองพื้นเฉพาะ (ช่วงได้ 56-60 ° C), และ 30 s ที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที (ส่วนขยาย) และส่วนขยายสุดท้าย 72 ° c 5 นาทีตาม ด้วยความเย็นที่ 16 ° C สำหรับเวลาไม่จำกัด
การแปล กรุณารอสักครู่..

สิบเก้า SSR PCR ( Mir et al . , 2008 , 2009 ) ที่ใช้ในการคัดกรองแปดพันธุ์ทั้งสองชนิดของปอกระเจา ของเหล่านี้ , ไพรเมอร์ 6 SSR ( ตารางที่ 2 ) ผลิตวงดนตรีจำนวนที่ชัดเจนในการศึกษา ปฏิกิริยา PCR ได้ใน 10 μ L ปฏิกิริยาปริมาณที่มีประมาณ 20 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบปอ , 1x PCR buffer [ ( HCl หรือ 750 มม. ( 8.8 pH ที่ 25 ° C ) , 200 มม. ( NH4 ) 2so4 0.1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ] , 1.5 มม. ชุด 0.1 มม. dntps 0.5 μม. ไพรเมอร์ของแต่ละหน่วยและ 0.3 ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( fermentas ; Burlington Ontario Canada ) ปฏิกิริยา PCR แบบผสมภายใต้ใน T1 เทอมอไซเคล ์ ( biometra ; เกิททิงเกน , เยอรมนี ) โดยใช้เทคนิคโปรแกรม : ระบบสำหรับ 2 นาทีที่ 94 ° C ; 30 รอบละ 30 วินาทีที่ 94 ° C ( s ) , 30 เผาที่อุณหภูมิของคู่หลักโดยเฉพาะ ( ช่วงจำนวน 56 – 60 ° C ) , และ 30 s 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที ( นามสกุล ) นามสกุล สุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที ตามด้วยความเย็นที่ 16 ° C เวลาไม่แน่นอน
การแปล กรุณารอสักครู่..
