RNA was extracted from 1) the tissu

RNA was extracted from 1) the tissues using Trizol (Invitrogen,
France) and 2) from 10 to 20 isolated transfected (siTRPC1) and
nontransfected cells using RNeasy mini kit (Quiagen, France). Real
time PCR was conducted using the Sybr Green (Agilent Technologies,
France) with the RPL32 as a housekeeping gene. Gene quantifications
were conducted using the 2ΔΔCt method.
Total proteins were extracted from the lacZ transfected heart
tissue using a RIPA buffer with protease and phosphatase inhibitors.
The proteins concentration was determined using the Bradford
protein assay (Bio‐Rad, France). Proteins (100 μg) were separated
by SDS 10% PAGE, blotted on Hybond-C membranes (Amersham
Biosciences, GE Healthcare, France) and incubated with various antibodies:
beta galactosidase (1/5000, Abcam-France), TRPC1 (1/200,
Alomone ACC 010) and GAPDH as an internal control (1/2500,
Abcam-France). Immunoreactive proteins were visualized by using
an ECLR (enhanced chemiluminescence) detection system (Amersham
Biosciences, GE Healthcare, France).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอที่สกัดมาจาก 1) การใช้เนื้อเยื่อ trizol (Invitrogen,
ฝรั่งเศส) และ 2) 10-20 แยก transfected (sitrpc1)​​ และเซลล์ nontransfected
ใช้ rneasy มินิ Kit (quiagen, ฝรั่งเศส) จริง
Time PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ sybr สีเขียว (Agilent เทคโนโลยี
ฝรั่งเศส) กับ rpl32 เป็นยีนดูแลทำความสะอาดห้​​อง quantifications ยีน
ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการ2ΔΔct.
โปรตีนทั้งหมดถูกดึงออกมาจากหัวใจ transfected lacZ เนื้อเยื่อ
ใช้บัฟเฟอร์ Ripa กับน้ำย่อยโปรตีนและ phosphatase.
เข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบ Bradford โปรตีน
(Bio-RAD, ฝรั่งเศส) โปรตีน (100 ไมโครกรัม) ถูกแยกออกโดย
หน้า 10% SDS, เปื้อนบน hybond c-เมมเบรน (Amersham Biosciences
, จีอีเฮล, ฝรั่งเศส) และบ่มกับแอนติบอดีต่างๆ:
เบต้ากาแลคโต (1/5000, abcam-ฝรั่งเศส) trpc1 (1/200
alomone ACC 010) และ GAPDH เป็นระบบการควบคุมภายใน (1/2500
abcam-ฝรั่งเศส) โปรตีน immunoreactive เป็นรูปธรรมโดยใช้
eclr ระบบการตรวจจับ (Chemiluminescence ที่เพิ่มขึ้น) (Amersham Biosciences
, จีอีเฮล, ฝรั่งเศส)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์เอ็นเอที่สกัดจากเนื้อเยื่อ 1 ใช้ Trizol (Invitrogen,
ฝรั่งเศส) และ 2 จาก 10 ไป 20 แยกต่างหาก transfected (siTRPC1) และ
nontransfected เซลล์ใช้ชุดมินิ RNeasy (Quiagen ฝรั่งเศส) จริง
เวลาวิธี PCR โดยใช้สีเขียว Sybr (Agilent เทคโนโลยี,
ฝรั่งเศส) กับ RPL32 เป็นยีนทำความสะอาด ยีน quantifications
ได้ดำเนินการโดยใช้วิธี 2ΔΔCt.
รวมโปรตีนที่สกัดจากหัวใจ lacZ transfected
เนื้อเยื่อใช้ริป้าราคาเป็นกันชนกับรติเอสและฟอสฟาเตส inhibitors
กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนโดยใช้แบรดฟอร์ด
วิเคราะห์โปรตีน (Bio‐Rad ฝรั่งเศส) โปรตีน (100 μg) ถูกแยก
โดย SDS 10% หน้า blotted ในสาร Hybond-C (Amersham
เวลาออก GE สุขภาพ ฝรั่งเศส) และ incubated กับแอนตี้ต่าง ๆ:
เบต้า galactosidase (1/5000, Abcam-ฝรั่งเศส), TRPC1 (1/200,
Alomone บัญชี 010) และ GAPDH เป็นตัวควบคุมภายใน (1/2500,
Abcam-ฝรั่งเศส) วิลเลียม immunoreactive มี visualized โดย
ระบบการตรวจหา ECLR (เพิ่ม chemiluminescence) (Amersham
เวลาออก GE สุขภาพ ฝรั่งเศส)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

rna สกัดจาก 1 )เนื้อเยื่อโดยใช้ trizol ( invitrogen
ฝรั่งเศส)และ 2 )จาก 10 เป็น 20 แยก transfected ( sitrpc 1 )และเซลล์
nontransfected โดยใช้ชุดอุปกรณ์ขนาดมินิ rneasy ( quiagen ฝรั่งเศส) pcr จริง
เวลาทำการใช้ sybr สีเขียว( Agilent เทคโนโลยี
ฝรั่งเศส)ที่พร้อมด้วย RPL 32 ที่เป็นยีนที่ทำความสะอาด ยีน quantifications
มีการใช้ 2 δδct วิธีที่.
ทั้งหมดเป็นโปรตีนแตกออกมาจากที่ lacz transfected ใจกลาง
เนื้อเยื่อโดยใช้ a Ripa บัฟเฟอร์พร้อมด้วย protease และ phosphatase ผลลัพธ์โรคหลอดเลือดสมองแตก.
ที่โปรตีนสมาธิตั้งใจไว้แล้วว่าการใช้ที่ Bradford
โปรตีนสอบ( Bio - ประชาราษฎร์,ฝรั่งเศส) โปรตีน( 100 ไมโครกรัม)แยก
โดยเซิร์ฟเวอร์ SDS 10% หน้าใส่ในเยื่อเลือกผ่านความละเอียดสูง hybond - C ( amersham
ชีวศาสตร์, GE Healthcare ,ฝรั่งเศส)และ incubated ด้วยเมื่อเส้นเลือดต่างๆ:
Beta galactosidase ( 1/5000 abcam-france ) trpc 1 ( 1/200
alomone ตามมาตรฐาน 010 )และ gapdh ( 1/2500 ,
การควบคุม ภายใน ที่ abcam-france ) โปรตีน immunoreactive อยู่เคียงข้างโดยใช้
ที่ eclr ( chemiluminescence Enhanced )ระบบการตรวจจับ( amersham
ชีวศาสตร์, GE Healthcare ,ฝรั่งเศส)