In half prepubertal gilts (PA), the

In half prepubertal gilts (PA), the artificial insemination was performed 12 h before ovulation with a single dose of spermatozoa (4 × 109 spermatozoa/80 ml) diluted in a commercial extender Modena 1 (Semenitaly, MO, Italy). In all animals, the procedure of ELF-EMF exposure of the tubes was carried out 40 h after hCG injection (i.e. 0-4 h before ovulation). The isolation of the female genital tract was realized by laparatomy performed on anesthetized animals as previously described [45]. The genital tract was exteriorized from the mid-line post umbilical abdominal incision. One oviduct was inserted in the coil generating the field, while the contra lateral was maintained within a switched-off coil and used as control (CTR). The exposition parameters were similar to those used under in vitro experiments: time of exposure = 1 h, field frequency = 50 Hz and sinusoidal waveform. The fields for both the in vivo protocols were the minimum, the maximum and the TD50 (toxic dose 50) intensities as determined under in vitro experiments.

During all the surgical procedures it was took care that the distance between the CTR oviduct and the coil was >10 cm to avoid accidental exposition to ELF-EMF. The animals used for PB were surgically inseminated only after ELF-EMF exposure using in vitro capacitated spermatozoa resuspended in 500 ml at the final concentration of 1 × 106 cells/ml and injected with a sterile glass Pasteur pipette in correspondence of the proximal part of the uterus horn. After the exposition, the laparatomic wound was closed “lege artis” and after recovery the prepubertal gilts were returned to the pen.

All animals received standard post-operative cares and human cares in compliance with the “Principles of Laboratory Animal Care” formulated by the National Society for Medical Research and the “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals” prepared by the National Academy of Sciences and published by the National Institute of Health.



2.7. Fertilized oocytes and embryos evaluation

Fertilized oocytes and early embryos were collected to evaluate the effect of in vivo ELF exposure of the oviduct on reproduction. In particular, the zygotes were recovered from the oviducts 12 h post-ovulation while the early embryos were collected from the uterus at 6 days post-ovulation. The reproductive tracts were removed and transported to the laboratory in a pre-warmed box (38 °C) within 30 min after surgery. Each oviduct or uterus horn was flushed with Dulbecco's medium-PBS with Ca2+, Mg2 and 0.4%BSA medium to collect embryos.

The samples collected were fixed in acetic acid ethanol (3/1 v/v) for 24 h and successively stained with Lacmoid as above described. The samples were scored on the basis of fertilization rate (number of oocyte that presented one or more spermatozoa within the cytoplasm/total oocytes recovered %), polyspermy rate (oocytes containing more than one decondensed sperm head or male PN/fertilized oocytes %) and the % of zygote (monospermic oocytes with a female and male PN of normal shape and close each other/total oocytes recoverd %) [37].

The morphological evaluation of embryos was carried out by means of the observation under an inverted microscope (Nikon Eclipse E800), successively the number of blastocyst was recorded and the onset of apoptosis was monitored using a commercial kit TUNEL (In Situ Cell Death Detection kit, Boehringer, Mannheim, Germany), following the manufacturer instructions. Briefly, the samples were permeabilised in 0.5% Triton X-100 in PBS (20 min. at RT), washed in PBS + PVP (1 mg/ml). After three washings in PVP solution, positive controls and samples were incubated in fluorescein-dUTP and terminal deoxynucleotidyl transferase for 1 h at 37 °C in the dark. Negative controls were incubated in nucleotide mixture only in the absence of transferase. After three more washings in PBS + PVP solution, controls and samples were incubated in RNase A (50 μg/ml in PBS) for 1 h at RT [47]. The nuclei were then counterstained with 0.5% PI for 1 h at RT. After three more washings in PBS solution, controls and samples were incubated in RNase A (50 mg/ml in PBS) for 1 h at RT. The nuclei were then counterstained with 0.5% PI for 1 h at RT, to make possible the assessment of the number of blastomers. Subsequently, the slides were washed three times with PBS + PVP solution and embryos were mounted and examined by laser scanning confocal microscopy (Biorad, Radiance 2000). The embryo were considered TUNEL positive if at least 1 blastomer was positive to the assay [47].

2.8. Morphological evaluation of female genital tract exposed to ELF-EMF

After the oviduct recovery, both treated and CTR oviducts obtained from all experimental conditions, were immediately removed and dissected with the aid of a stereomicroscope in tubal segments (of about 1-1,5 cm in length). Particularly, from each oviduct the utero-tubal junction (UTJ), isthmus (I), ampullary-isthmic junction (AIJ) and ampulla (A) were morphologically identified and isolated. Each tubal tract was promptly fixed in 4% paraformaldehyde/PBS (pH 7,4) for 12 h at 4 °C, dehydrated and then embedded in paraffin-wax. For morphological analysis, serial paraffin sections of 5 μm thickness were collected on poly-L-lysine-coated slides. Histological sections of all the oviductal segments were deparaffined, rehydrated and stained by hematoxylin-eosin (HE). In addition, it was perfomed a hematoxylin-eosin-Alcian Blue (HE-AB) staining in order to reveal the acid proteoglycans. In detail, after HE staining, the slides were stained for 1 h at room temperature in 1% Alcian Blue 8GX diluted in 1% acetic acid (Merck, Darmstadt). Then, tissue sections were washed for 5 min in 1% acetic acid and for 2 min in distilled water. At the end of the staining, all the slides were dehydrated and mounted for histological investigation. The morphological analysis was performed with an Axioskop 2 Plus microscope (Zeiss, Oberkochen, Germany) equipped with a cooled color charge coupled device camera (CCD; Axiovision Cam, Zeiss) interfaced to a computer workstation.

2.9. Statistical analysis

Data reported in this paper are the mean ± standard deviation (SD) of three independent determinations, each performed in duplicate. The data normality was assessed by Shapiro-Wilks W test and the comparisons between control and different treatments were performed by ANOVA test The treatment effect was considered significant and highly significant for p < 0.05 and p < 0.01, respectively. The sigmoid correlations were calculated using the sigmoid Boltzmann model. All calculation were realised using Statistica 6.0.

3. Results

3.1. Influence of ELF-EMF of different intensities on morpho-functional asset of in vitro capacitated boar spermatozoa

The mean viability of spermatozoa either incubated under CTR conditions or exposed to EMF-ELF was >80%.

However, after 4 h culture the percentage of acrosome damaged spermatozoa increased in the samples exposed at intensity fields ranging from 0.5 to 2 mT, with a sigmoid behaviour (R2 = 0.991) as showed in Fig. 3. The incidence of acrosome damaged cells, in fact, raised from a basal level of approximately 10% for the exposure to ELF-EMF of 0.5 mT to about 22% after the exposure of 0,75 mT, reaching a plateau of approximately 30% when the field intensity was ≥1 mT. On the contrary, the exposure of spermatozoa to ELF-EMF of all the considered intensities was unable to affect the DNA integrity, as showed in Fig. 4.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในสุกร prepubertal ครึ่งหนึ่ง (PA) ผสมเทียมได้ดำเนินการ 12 ชั่วโมงก่อนการตกไข่ที่มีขนาดเดียวของตัวอสุจิ (4 × 109 อสุจิ / 80 มล.) เจือจางในเชิงพาณิชย์ Extender Modena 1 (Semenitaly, MO, อิตาลี) ในสัตว์ทุกขั้นตอนของการเปิดรับ ELF-EMF ของหลอดได้รับการดำเนินการ 40 ชั่วโมงหลังฉีดเอชซีจี (เช่น 0-4 ชั่วโมงก่อนการตกไข่) การแยกของระบบสืบพันธุ์เพศหญิงที่ได้รับการตระหนักโดย laparatomy ดำเนินการดมยาสลบในสัตว์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [45] ระบบสืบพันธุ์ถูก exteriorized จากโพสต์กลางสายแผลหน้าท้องสะดือ หนึ่งในท่อนำไข่ถูกแทรกอยู่ในขดลวดสร้างสนามในขณะที่ด้านข้างทางตรงกันข้ามถูกเก็บรักษาไว้ภายในขดลวดเปลี่ยนออกและใช้เป็นตัวควบคุม (CTR) พารามิเตอร์การแสดงออกมีความคล้ายคลึงกับผู้ใช้ภายใต้การทดลองในหลอดทดลอง: เวลาของการเปิดรับ = 1 ชั่วโมงความถี่ข้อมูล = 50 เฮิร์ตซ์และรูปคลื่นซายน์ สาขาทั้งโปรโตคอลในร่างกายได้ต่ำสุดสูงสุดและ TD50 (ยาพิษ 50) ความเข้มตามที่กำหนดภายใต้การทดลองในหลอดทดลอง. ในช่วงขั้นตอนการผ่าตัดมันก็เอาสนใจว่าระยะห่างระหว่างท่อนำไข่ CTR และขดลวดเป็น > 10 ซม. เพื่อหลีกเลี่ยงการแสดงออกโดยไม่ได้ตั้งใจที่จะ ELF-EMF สัตว์ที่ใช้ในการผ่าตัด PB ถูกผสมเทียมเท่านั้นหลังจากได้รับ ELF-EMF ใช้ในหลอดทดลอง capacitated อสุจิ resuspended ใน 500 ml ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 1 × 106 เซลล์ / มล. และฉีดด้วยปิเปตแก้วปาสเตอร์ผ่านการฆ่าเชื้อในการติดต่อในส่วนที่ใกล้ชิดของ ฮอร์นมดลูก หลังจากที่การแสดงออก, แผล laparatomic ถูกปิด "LEGE Artis" และหลังจากการกู้คืนสุกร prepubertal ถูกส่งกลับไปปากกา. สัตว์ทุกตัวได้รับการใส่ใจหลังการผ่าตัดมาตรฐานและความกังวลของมนุษย์ในการปฏิบัติตาม "หลักการของการปฏิบัติการดูแลสัตว์" สูตรโดย สังคมแห่งชาติเพื่อการวิจัยทางการแพทย์และ "คู่มือสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง" จัดทำโดยสถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์แห่งชาติและเผยแพร่โดยสถาบันสุขภาพแห่งชาติ. 2.7 เซลล์ไข่และตัวอ่อนเพาะการประเมินผลการปฏิสนธิเซลล์ไข่และตัวอ่อนในช่วงต้นถูกเก็บรวบรวมเพื่อประเมินผลกระทบของการเปิดรับในร่างกายเอลฟ์ของท่อนำไข่ด้วยการสืบพันธุ์ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง zygotes หายจากท่อนำไข่ 12 ชั่วโมงหลังการตกไข่ในขณะที่ตัวอ่อนในช่วงต้นถูกเก็บรวบรวมจากมดลูกที่ 6 วันที่โพสต์การตกไข่ ระบบสืบพันธุ์ถูกถอดออกและส่งไปยังห้องปฏิบัติการในกล่องก่อนอุ่น (38 ° C) ภายใน 30 นาทีหลังการผ่าตัด แต่ละรังไข่หรือมดลูกฮอร์นได้รับการล้างด้วย Dulbecco พีบีเอสกลางกับ Ca2 +, Mg2 และ 0.4% BSA กลางในการเก็บรวบรวมตัวอ่อน. ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้รับการแก้ไขในเอทานอลกรดอะซิติก (3/1 v / v) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและย้อมสีอย่างต่อเนื่องกับ Lacmoid ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ตัวอย่างที่ถูกยิงบนพื้นฐานของอัตราการปฏิสนธิ (จำนวนไข่ที่นำเสนอหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งตัวอสุจิภายใน cytoplasm / รวมเซลล์ไข่หาย%) อัตรา polyspermy (เซลล์ไข่ที่มีมากกว่าหนึ่งหัวสเปิร์ม decondensed หรือชาย PN / เพาะเซลล์ไข่%) และ % ของตัวอ่อน (เซลล์ไข่ monospermic กับหญิงและชาย PN ของรูปร่างปกติและปิดแต่ละอื่น ๆ / รวมเซลล์ไข่ recoverd%) [37]. การประเมินผลทางสัณฐานวิทยาตัวอ่อนได้รับการดำเนินการโดยวิธีการสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์คว่ำ (Nikon คราส E800) อย่างต่อเนื่องจำนวนของตัวอ่อนได้รับการบันทึกและการโจมตีของการตายคือการตรวจสอบโดยใช้ชุดการค้า TUNEL (in situ ชุดตรวจจับการตายของเซลล์, Boehringer, Mannheim, เยอรมนี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สั้น ๆ ตัวอย่าง permeabilised 0.5% Triton X-100 ในพีบีเอส (20 นาที. ที่ RT) ล้างในพีบีเอส + PVP (1 mg / ml) หลังจากสามซักในการแก้ปัญหา PVP ควบคุมบวกและตัวอย่างถูกบ่มใน fluorescein-dUTP และสถานี deoxynucleotidyl transferase เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในที่มืด การควบคุมเชิงลบถูกบ่มในส่วนผสมเบื่อหน่ายเท่านั้นในกรณีที่ไม่มี transferase หลังจากสามซักมากขึ้นในการแก้ปัญหา + พีบีเอสพีวีพีควบคุมและตัวอย่างถูกบ่มใน RNase (50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในพีบีเอส) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ RT [47] นิวเคลียสถูก counterstained แล้วกับ 0.5% PI เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ RT หลังจากสามซักมากขึ้นในการแก้ปัญหาพีบีเอส, การควบคุมและตัวอย่างถูกบ่มใน RNase (50 mg / ml ในพีบีเอส) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ RT นิวเคลียสถูก counterstained แล้วด้วย PI 0.5% เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ RT ที่จะทำให้เป็นไปได้ที่การประเมินของจำนวน blastomers ต่อมาสไลด์ถูกล้างสามครั้งกับพีบีเอส + แก้ปัญหา PVP และตัวอ่อนได้รับการติดตั้งและตรวจสอบโดยเลเซอร์สแกนกล้องจุลทรรศน์ confocal (Biorad, Radiance 2000) ตัวอ่อนได้รับการพิจารณาในเชิงบวก TUNEL ถ้าอย่างน้อย 1 blastomer เป็นบวกในการทดสอบ [47]. 2.8 การประเมินผลทางสัณฐานวิทยาของระบบสืบพันธุ์เพศหญิงสัมผัสกับ ELF-EMF หลังจากการฟื้นตัวของท่อนำไข่ทั้งสองได้รับการรักษาและ CTR ท่อนำไข่ที่ได้รับจากเงื่อนไขการทดลองทั้งหมดถูกถอดออกทันทีและชำแหละด้วยความช่วยเหลือของกล้องขยายในส่วนท่อนำไข่ (ประมาณ 1-1,5 ซม. ความยาว) โดยเฉพาะอย่างยิ่งจากแต่ละรังไข่มดลูกทางแยก-ท่อนำไข่ (UTJ) คอคอด (I), ทางแยก ampullary-isthmic (AIJ) และขวด (A) ถูกระบุสัณฐานวิทยาและโดดเดี่ยว แต่ละระบบทางเดินท่อนำไข่ได้รับการแก้ไขในทันที 4% paraformaldehyde / พีบีเอส (pH 7,4) เป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสการคายน้ำและฝังตัวแล้วในพาราฟินแว็กซ์ สำหรับการวิเคราะห์ลักษณะทางสัณฐานวิทยาส่วนพาราฟินอนุกรม 5 ไมครอนความหนาที่ถูกรวบรวมไว้ในโพลี-L-ไลซีนเคลือบสไลด์ ส่วนทางจุลกายวิภาคของทุกกลุ่มท่อนำไข่ถูก deparaffined, rehydrated และย้อมสีโดย hematoxylin-Eosin (HE) นอกจากนี้ยังได้รับการ perfomed hematoxylin-Eosin-ด้วย Alcian สีฟ้า (HE-AB) การย้อมสีเพื่อที่จะเปิดเผย proteoglycans กรด ในรายละเอียดหลังจากที่เขาย้อมสีสไลด์มีการย้อมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องใน 1% ด้วย Alcian สีน้ำเงิน 8GX เจือจางใน 1% กรดอะซิติก (เมอร์ค, Darmstadt) จากนั้นส่วนเนื้อเยื่อถูกล้างเป็นเวลา 5 นาทีใน 1% กรดอะซิติกและเป็นเวลา 2 นาทีในน้ำกลั่น ในตอนท้ายของการย้อมสี, ภาพนิ่งทั้งหมดมีการคายน้ำและติดตั้งเพื่อการตรวจสอบการตรวจชิ้นเนื้อ การวิเคราะห์ลักษณะทางสัณฐานวิทยาได้ดำเนินการกับกล้องจุลทรรศน์ Axioskop 2 พลัส (Zeiss, Oberkochen, เยอรมนี) พร้อมกับค่าใช้จ่ายในการระบายความร้อนสีกล้องอุปกรณ์คู่ (CCD; Axiovision Cam, Zeiss). เชื่อมต่อไปยังเครื่องคอมพิวเตอร์2.9 การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลรายงานในบทความนี้เป็นค่าเฉลี่ย±ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ของสามหาความอิสระแต่ละดำเนินการในที่ซ้ำกัน ปกติข้อมูลที่ได้รับการประเมินโดยการทดสอบชาปิโรวิลก์ส-W และการเปรียบเทียบระหว่างการควบคุมและการรักษาที่แตกต่างกันได้ดำเนินการโดยการทดสอบ ANOVA ผลการรักษาได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญและมีความสำคัญอย่างมากสำหรับ p <0.05 และ p <0.01 ตามลำดับ ความสัมพันธ์ sigmoid จะถูกคำนวณโดยใช้รูปแบบการ sigmoid Boltzmann การคำนวณทั้งหมดได้ตระหนักถึงการใช้ Statistica 6.0. 3 ผล3.1 อิทธิพลของเอลฟ์-EMF ของความเข้มที่แตกต่างกันของสินทรัพย์ Morpho การทำงานของตัวอสุจิในหลอดทดลองหมูป่า capacitated มีชีวิตเฉลี่ยของตัวอสุจิทั้งบ่มภายใต้เงื่อนไข CTR หรือสัมผัสกับ EMF-เอลฟ์เป็น> 80%. อย่างไรก็ตามหลังจากที่ 4 วัฒนธรรมชั่วโมงร้อยละของ acrosome อสุจิเสียหายที่เพิ่มขึ้นในกลุ่มตัวอย่างที่สัมผัสทุ่งเข้มตั้งแต่ 0.5-2 mT กับพฤติกรรม sigmoid (R2 = 0.991) ขณะที่แสดงให้เห็นในรูป 3. อุบัติการณ์ของเซลล์ที่เสียหาย acrosome ในความเป็นจริงเพิ่มขึ้นจากระดับต่ำประมาณ 10% สำหรับการสัมผัสกับ ELF-EMF 0.5 mT ไปประมาณ 22% หลังจากได้รับของ 0,75 mT ถึงที่ราบสูงประมาณ 30 % เมื่อเข้มสนามเป็น≥1 mT ในทางตรงกันข้ามการสัมผัสของตัวอสุจิที่จะ ELF-EMF ทุกความเข้มของการพิจารณาก็ไม่สามารถที่จะส่งผลกระทบต่อความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอที่เป็นแสดงให้เห็นในรูป 4

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในสุกรสาวครึ่งไทยสุขภาพดี ( PA ) , ผสมเทียม 12 ชั่วโมงก่อนการตกไข่ด้วยฤทธิ์ของอสุจิ ( 4 × 109 5 / 80 ml ) เจือจางในโมเดนา Extender พาณิชย์ 1 ( semenitaly โม อิตาลี ) ในสัตว์ทุกขั้นตอนของการเปิดรับแสงของหลอด elf-emf ดำเนินการ 40 H หลังจากฉีด HCG ( เช่น 0-4 H ก่อนการตกไข่ )การแยกทางเดินอวัยวะสืบพันธุ์สตรีได้ตระหนักโดยการวางยาสลบในสัตว์ laparatomy ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 45 ] ส่วนของอวัยวะสืบพันธุ์คือ exteriorized จากเส้นกลางสะดือ หน้าท้องหลังผ่าตัด หนึ่งท่อนำไข่ถูกแทรกในขดลวดสร้างสนาม ขณะที่ในทางตรงกันข้ามด้านข้างไว้ภายในปิดม้วนและใช้เป็นตัวควบคุม ( จักร )งานมหกรรมพารามิเตอร์มีความคล้ายคลึงกับที่ใช้ในการทดลองในหลอดทดลอง : เวลาของการเปิดรับแสง = 1 H , สนามความถี่ = Hz 50 และเส้นสัญญาณ เขตข้อมูลทั้งสองชนิดโปรโตคอลเป็นขั้นต่ำ และสูงสุด td50 ( พิษปริมาณ 50 ) ความเข้มตามที่กำหนดในหลอดทดลอง .

ตลอดการผ่าตัด มันเอาว่าระยะทางระหว่างศูนย์ท่อนำไข่และขดลวด 10 ซม. เพื่อหลีกเลี่ยงอุบัติเหตุมหกรรม elf-emf .สัตว์ที่ใช้ตะกั่ว surgically ผสมเทียมเท่านั้น หลังจากการใช้ elf-emf capacitated อสุจิในหลอดทดลอง resuspended ใน 500 มล. ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 1 × 106 เซลล์ / มิลลิลิตร และฉีดยาฆ่าเชื้อแก้วปาสเตอร์เปตในจดหมายของส่วนการทำงานของมดลูก ฮอร์น หลังจาก ที่เกี่ยวข้องแผล laparatomic ถูกปิด " กฎหมายกําหนด Artis " และหลังจากที่การกู้คืนไทยสุขภาพดีโดยมี ปากกา

สัตว์ทั้งหมดที่ได้รับสนหลังผ่าตัดมาตรฐานและมนุษย์สนใจในการปฏิบัติตาม " หลักการปฏิบัติการดูแลสัตว์ " ขึ้น โดยสมาคมแห่งชาติเพื่อการวิจัยทางการแพทย์และคู่มือการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง " จัดทำโดยสถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์แห่งชาติและเผยแพร่โดยสถาบันสุขภาพแห่งชาติ .



2.7 . ไข่ไข่ตัวอ่อนและการประเมิน

ไข่และตัวอ่อนระยะต้น เก็บข้อมูลเพื่อศึกษาผลของชนิดเอลฟ์แสงของท่อนำไข่ ในการสืบพันธุ์ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง zygotes พบแบ่ง 12 H โพสต์ตกไข่ในขณะที่ตัวอ่อนก่อนเก็บตัวมดลูก 6 วันตกไข่ โพสต์tracts การสืบพันธุ์ ออก และส่งตัวไปปฏิบัติการในก่อนเปิดกล่อง ( 38 ° C ) ภายใน 30 นาที หลังผ่าตัด ท่อนำไข่หรือมดลูกฮอร์นเป็นแต่ละกลั้วกับดัลเบโค่ปานกลาง PBS กับแคลเซียม mg2 , และ 0.4 % BSA กลางเพื่อเก็บตัว

ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมการแก้ไขในกรดอะซิติก เอทานอล ( 3 / 1 v / v ) 24 H และกระชั้นชิดเปื้อน lacmoid ข้างต้นอธิบายจำนวนคะแนนบนพื้นฐานของอัตราการปฏิสนธิ ( จำนวนไข่ที่นำเสนอหนึ่งหรือมากกว่าท่อภายในไซโตปลาสซึม / รวมไข่หาย % )คะแนน polyspermy ( ไข่ที่มีมากกว่าหนึ่ง decondensed อสุจิหรือไข่ / ไข่หัวชาย 94 % ) และ % ของไซโกต ( monospermic ไข่กับหญิงและชาย ? รูปร่างปกติและปิดแต่ละอื่น ๆรวมไข่ recoverd % ) [ 37 ] .

การประเมินลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเอ็มบริโอได้ดำเนินการโดยวิธีการของ การสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์กลับหัว ( Nikon คราส e800 )อย่างต่อเนื่องจำนวนตัวอ่อนที่ถูกบันทึกไว้ และเริ่มเกิดการใช้ชุดพาณิชย์อุโมงค์ ( ในแหล่งกำเนิดเซลล์ตายชุดตรวจ , Boehringer Mannheim , เยอรมัน ) , ต่อไปนี้ผู้ผลิตแนะนำ สั้นจำนวน permeabilised 0.5% Triton X-100 ใน PBS ( 20 นาทีที่ RT ) , ล้างใน PBS PVP ( 1 mg / ml ) หลังจากที่สาม washings ในพีวีพี โซลูชั่นการควบคุมที่ดีและจำนวน ) และขั้วของ deoxynucleotidyl ี่ได้เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาองศาเซลเซียสในที่มืด การควบคุมเป็นลบ ) ผสมนิวคลีโอไทด์เพียงในกรณีที่ไม่มีของ . หลังจากกว่าสาม washings ในสารละลายพีพีบีเอส การควบคุม และจำนวนเชื้อในเลส ( 50 μ g / ml ใน PBS ) 1 H ที่ RT [ 47 ]นิวเคลียสแล้ว counterstained 0.5 และ 1 H ที่ RT . หลังจากกว่าสาม washings ใน PBS โซลูชั่นการควบคุมและจำนวน ) เลส ( 50 mg / ml ใน PBS ) 1 H ที่ RT . นิวเคลียสแล้ว counterstained กับพี 0.5% เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในโหมด เพื่อให้สามารถประเมิน จำนวน blastomers . ต่อมาสไลด์กำลังล้างสามครั้งกับ PBS พีวีพี โซลูชั่น และตัวอ่อนติดและตรวจสอบโดยเลเซอร์สแกนด้วยกล้องจุลทรรศน์ ( biorad เปล่งปลั่ง , 2000 ) ตัวอ่อนพบอุโมงค์บวกอย่างน้อย 1 blastomer เป็นบวก ( [ 47 ] .

2.8 . การประเมินลักษณะทางสัณฐานวิทยาของอวัยวะสืบพันธุ์หญิง เปิดเผย elf-emf

หลังจากอายุการกู้คืนทั้งการปฏิบัติ และเครื่องที่ได้จากทุกสภาวะการทดลองแบ่งเป็น ทันที ออกและผ่าด้วยความช่วยเหลือของทู stereomicroscope ในกลุ่ม ( ประมาณ 1-1,5 เซนติเมตร ) โดยเฉพาะอย่างยิ่งจากแต่ละท่อนำไข่ที่ท้องยังชุมทาง ( utj ) คอคอด ( ฉัน ) , ampullary isthmic Junction ( aij ) และหลอดมดลูก ( ) ถูกระบุจาก และแยกแต่ละระบบยังได้ทันทีคงที่ 4% PBS พาราฟอร์มาลดิไฮด์ ( pH 7,4 ) เป็นเวลา 12 ชั่วโมงใน 4 ° C , แห้ง และฝังอยู่ในขี้ผึ้งพาราฟิน การวิเคราะห์ลักษณะทางสัณฐานวิทยา , อนุกรมพาราฟินส่วนความหนาของ 5 M μครั้งนี้ poly-l-lysine-coated สไลด์ ส่วนผลของทุกกลุ่ม คือ deparaffined oviductal , และได้ทำการ รีไฮเดรทมเปื้อนย้อมโอซิน ( เขา ) นอกจากนี้มันถูกบรรเลงเป็นย้อม eosin สิ้นลมปราณ ( he-ab ) การย้อมสีเพื่อเปิดเผยกรด proteoglycans . ในรายละเอียด หลังจากเขา staining ภาพนิ่งใช้ย้อม 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องใน 1% อัลเซียน 8gx สีน้ำเงินเจือจาง 1% กรดอะซิติก ( เมอร์ค ดาร์มชตัท , ) แล้วส่วนเนื้อเยื่อได้ซัก 5 นาที 1% กรดอะซิติกและสำหรับ 2 นาทีในน้ำกลั่น ในตอนท้ายของการย้อมสีสไลด์เป็นแห้งและติดตั้งเพื่อตรวจสอบผล . การวิเคราะห์ลักษณะการปฏิบัติ axioskop 2 บวกด้วยกล้องจุลทรรศน์ oberkochen , Germany ) พร้อมกับระบายสีชาร์จคู่อุปกรณ์กล้อง ( CCD ; axiovision แคม Zeiss ) ติดต่อกับคอมพิวเตอร์เวิร์กสเตชัน

2.9 .

ทางสถิติการวิเคราะห์ข้อมูลที่รายงานในกระดาษนี้จะหมายถึง±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD ) ของทั้งสามรวมทั้งอิสระแต่ละแสดงในที่ซ้ำกัน ข้อมูลปกติและโดย Shapiro วิลค์ส W ทดสอบและเปรียบเทียบระหว่างการควบคุมและการรักษาที่แตกต่างกันได้ทดสอบการวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) ผลการรักษาก็ถือว่าสำคัญมากและสำคัญสำหรับ p < 0.05 และ P < 0.01 ตามลำดับความสัมพันธ์แบบคำนวณโดยใช้แบบจำลองแบบรวม . การคำนวณมีทั้งหมดได้ใช้ statistica 6.0

3 ผล

1 . อิทธิพลของความเข้มที่แตกต่างกันในการทำงาน elf-emf Morpho สินทรัพย์ในหลอดทดลอง capacitated หมูป่า 5

หมายถึงความมีชีวิตของเชื้ออสุจิให้ภายใต้เงื่อนไขที่ศูนย์หรือสัมผัสกับ emf-elf ได้ > 80%

อย่างไรก็ตามหลังจาก 4 ชั่วโมงเปอร์เซ็นต์อสุจิที่มีวัฒนธรรมเสียหายเพิ่มขึ้นในตัวอย่างเปิดเผยที่ความเข้มสนามตั้งแต่ 0.5 ถึง 2 ตัน มีพฤติกรรมแบบ ( R2 = 0.991 ) ตามที่แสดงในรูปที่ 3 อุบัติการณ์ที่มีเซลล์ที่เสียหายในความเป็นจริงขึ้นมาจากพื้นฐานระดับประมาณ 10% สำหรับการเปิดรับ elf-emf 0.5 ตันประมาณ 22 % หลังจากการ 0,75 MT ,ถึงที่ราบสูงประมาณ 30% เมื่อเขตข้อมูลความเข้ม≥ 1 ที่ ในทางตรงกันข้าม การเปิดรับของอสุจิเพื่อ elf-emf ทั้งหมดถือว่าเข้มไม่ส่งผลกระทบต่อความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอที่แสดงในรูปที่ 4 .