Thermal denaturation kineticsAlthou

Thermal denaturation kinetics

Although thermodynamic stability is most easily related to theoretical calculations, the kinetic stability of proteins is often of higher practical significance in applications. Therefore the kinetic stability of stabilized variants was further investigated. The rate of irreversible thermal inactivation was determined for WT, D58N, D182N and G306A β-1,4-galactanase, variants with an observed increase in Tm of 0.5 or above, by measuring the residual activity at 55 °C after incubation. The resulting A vs time (min) curves are shown in Fig. 3. Inspection of semi-logarithmic plots such as the one displayed as example in the inset of Fig. 3 for the WT enzyme, shows that both for WT and variants the data cannot be fit by a single first order process. Rather the data display a characteristic pattern of a biphasic denaturation process, which can be interpreted as an intermediate as in [33]. The biphasic denaturation process can be described as:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Denaturation ร้อนจลนพลศาสตร์แม้ว่าเสถียรภาพทางอุณหพลศาสตร์ได้มากที่สุดเกี่ยวข้องกับทฤษฎีการคำนวณ เสถียรภาพของโปรตีนเดิม ๆ มักจะเป็นของสำคัญปฏิบัติสูงกว่าในการใช้งาน ดังนั้น ความมั่นคงเดิม ๆ เสถียรย่อยถูกเพิ่มเติมตรวจสอบ อัตราการยกเลิกการระบายความร้อนให้เรียกถูกกำหนดสำหรับ WT, D58N, D182N และ G306A β-1,4-galactanase ตัวแปร ด้วยการสังเกตเพิ่ม Tm 0.5 หรือ เหนือ โดยการวัดกิจกรรมที่เหลือที่ 55 ° C หลังจากบ่ม จะเกิดเส้นโค้งเทียบกับเวลา (นาที) จะแสดงใน Fig. 3 ตรวจสอบผืนกึ่งลอการิทึมเช่นที่แสดงเป็นตัวอย่างในการแทรก Fig. 3 สำหรับเอนไซม์ WT แสดงว่า ทั้งละเว้นและย่อยข้อมูลไม่พอดี โดยใบแรกเดียวดำเนินการ เป็น ข้อมูลแสดงรูปลักษณะของ biphasic denaturation กระบวนการ ซึ่งสามารถตีความเป็นกลางใน [33] ขั้นตอน denaturation biphasic สามารถอธิบายได้ว่า:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จลนศาสตร์ denaturation ร้อนแม้ว่าความมั่นคงทางอุณหพลศาสตร์ที่เกี่ยวข้องได้ง่ายที่สุดในการคำนวณทางทฤษฎีความมั่นคงเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวของโปรตีนที่มักจะมีความสำคัญในทางปฏิบัติที่สูงขึ้นในการใช้งาน ดังนั้นความมั่นคงกับการเคลื่อนไหวของสายพันธุ์ที่มีความเสถียรได้รับการตรวจสอบต่อไป อัตราการใช้งานความร้อนกลับไม่ได้ถูกกำหนดสำหรับ WT, D58N, D182N และ G306A β-1,4-galactanase สายพันธุ์กับการเพิ่มขึ้นสังเกตใน Tm 0.5 หรือสูงกว่าโดยการวัดกิจกรรมที่เหลือที่ 55 องศาเซลเซียสหลังจากการบ่ม ผลเทียบกับเวลา (นาที) เส้นโค้งจะแสดงในรูป 3. การตรวจสอบแปลงกึ่งลอการิทึมเช่นที่แสดงเป็นตัวอย่างของสิ่งที่ใส่เข้าไปในรูป 3 เอนไซม์ WT แสดงให้เห็นว่าทั้ง WT และตัวแปรข้อมูลไม่สามารถพอดีโดยกระบวนการสั่งซื้อครั้งแรกเพียงครั้งเดียว แต่ข้อมูลที่แสดงรูปแบบลักษณะของกระบวนการ denaturation biphasic ซึ่งสามารถตีความได้ว่าเป็นสื่อกลางในขณะที่ [33] กระบวนการ denaturation biphasic สามารถอธิบายเป็น:

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความร้อน ( จลนศาสตร์

แม้ว่าเสถียรภาพความร้อนได้ง่ายที่สุดที่เกี่ยวข้องกับการคำนวณทางทฤษฎี เสถียรภาพทางโปรตีนมักสูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับ . 05 ในการปฏิบัติงาน ดังนั้น เสถียรภาพทางเสถียรภาพของสายพันธุ์ถูกสอบสวนต่อไป อัตราความร้อนทำให้ได้ตัวอย่างเพื่อ d58n d182n g306a , โดยน้ำหนัก และบีตา - 14-galactanase สายพันธุ์ที่พบ , เพิ่มใน TM 0.5 ขึ้นไป โดยวัดกิจกรรมที่เหลือที่ 55 องศา C หลังจากการบ่ม ผู้ที่เกิดเวลา vs ( มิน ) เส้นโค้งที่แสดงในรูปที่ 3 การตรวจสอบของกึ่งลอการิทึมแปลงดังกล่าวเป็นหนึ่งที่แสดงเป็นตัวอย่างในสิ่งที่ใส่เข้าไปในรูปที่ 3 เพื่อเติมเอนไซม์แสดงให้เห็นว่าทั้งน้ำหนักและตัวแปรข้อมูลไม่สามารถให้พอดี โดยกระบวนการสั่งซื้อครั้งแรกเพียงครั้งเดียว แทนที่จะแสดงข้อมูลรูปแบบลักษณะของกระบวนการ ( ให้ตายซิ ซึ่งสามารถตีความเป็นตัวกลางใน [ 33 ] กระบวนการ ( ให้ตายซิสามารถอธิบายได้ดังนี้