2.4. PCR procedureAmplification of

2.4. PCR procedure
Amplification of the 261 bp product was per-
formed using primers 261F and 261R on DNA
extracted from shrimp tissue samples. The PCR
reaction was carried out in a 25 Al reaction mixture
containing 0.5 Al of template DNA (50–450 ng of
DNA), 2.5 Al of 10  PCR II buffer (final con-
centration: 10 mM Tris HCl, 50 mM KCl pH 8.3),
1.5 mM MgCl 2 , 200 AM of each dATP, dGTP,
dCTP and dTTP, 0.3 AM of primers (261F/R) and
2.5 U per 25 Al of AmpliTaq Goldk DNA poly-
merase (Applied Biosystems, Foster City, CA).
PCR amplification was performed in a Mastercyler
gradient thermocycler (Eppendorf, Germany) with
hot start at 94 8C for 5 min and 35 cycles of 94
8C 30 s, 60 8C 30 s, 72 8C 30 s, and a final
extension at 72 8C for 7 min. Following this, 10
Al of the PCR products were analyzed by electro-
phoresis on 1–2% agarose gels containing ethidium
bromide at a final concentration of 0.5 Ag/ml. A 1
kb DNA ladder (Invitrogen, Carlsbad, CA) was
used as a marker. The agarose gel was examined
under UV transillumination and photographed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 กระบวนการ PCRขยายผลิตภัณฑ์ bp 261 ถูกต่อ-รูปแบบการใช้ไพรเมอร์ 261F และ 261R ในดีเอ็นเอสกัดจากตัวอย่างเนื้อเยื่อกุ้ง PCRปฏิกิริยาที่ดำเนินการในส่วนผสมปฏิกิริยาอัล 25ประกอบด้วยอัล 0.5 (50-450 ng ของดีเอ็นเอแม่แบบDNA), 2.5 บัฟเฟอร์อัล 10 PCR II (สุดท้ายคอน-centration: 10 มม.ทริสเรทติ้ง HCl, 50 mM KCl pH 8.3),1.5 mM MgCl 2, 200 AM ของแต่ละ dATP, dGTPdCTP และ dTTP, 15.00 09.00 น.ของไพรเมอร์ (261F/R) และ2.5 U ต่อ 25 อัล AmpliTaq Goldk DNA โพลี-merase (Biosystems ใช้ ฟอสเตอร์ซิตี้ CA)ทำ PCR ขยายในตัว Mastercylerthermocycler (Eppendorf เยอรมนี) ที่ไล่โทนสีด้วยเริ่มร้อนที่ 8C 94 5 นาทีและรอบ 35 ของ 948C 30 s, 60 s 8C 30, 72 s 8C 30 และตัวสุดท้ายส่วนขยายที่ 8C 72 ใน 7 นาที ต่อ 10 นี้อัลผลิตภัณฑ์ PCR ถูกวิเคราะห์ โดย electro-phoresis บน 1-2% agarose ประกอบด้วย ethidiumโบรไมด์ที่เข้มข้นสุดท้ายของ Ag 0.5 ml 1มีบันได DNA kb (Invitrogen คาร์ลส CA)ใช้เป็นเครื่องหมาย เจ agarose ถูกตรวจสอบภายใต้ UV transillumination และถ่ายภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ขั้นตอนวิธี PCR
Amplification ของผลิตภัณฑ์ bp 261 ถูกลำดับ
ที่เกิดขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์ 261F และ 261R ดีเอ็นเอ
ที่สกัดจากตัวอย่างเนื้อเยื่อกุ้ง PCR
ปฏิกิริยาจะถูกดำเนินการใน 25 อัลผสมปฏิกิริยา
ที่มี 0.5 อัของแม่ดีเอ็นเอ (50-450 ng ของ
ดีเอ็นเอ) 2.5 อั 10? บัฟเฟอร์ PCR II (con- สุดท้าย
centration: 10 มิลลิ Tris HCl พีเอช 50 มิลลิเมตร KCl 8.3),
1.5 มิลลิ MgCl 2, 200 นของแต่ละ dATP, Dgtp,
dCTP และ Dttp, 12:03 ของไพรเมอร์ (261F / R) และ
2.5 U ละ 25 ของอัล AmpliTaq ดีเอ็นเอ Goldk โพลี
merase (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี้, แคลิฟอร์เนีย).
ขยาย PCR ได้รับการดำเนินการใน Mastercyler
เครื่อง thermocycler ลาด (Eppendorf, เยอรมนี) กับ
เริ่มร้อนที่ 94 8C เป็นเวลา 5 นาทีและ 35 รอบจาก 94
8C 30 วินาที, 60 8C 30 วินาที, 72 8C 30 วินาทีและสุดท้าย
ส่วนขยายที่ 72 8C 7 นาที ต่อไปนี้ 10
อัของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการวิเคราะห์โดยทางไฟฟ้า
phoresis วันที่ 1-2% agarose เจลที่มี ethidium
bromide ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.5 Ag / ml 1
บันไดดีเอ็นเอ KB (Invitrogen, Carlsbad, CA) ถูก
ใช้เป็นเครื่องหมาย เจล agarose ถูกตรวจสอบ
ภายใต้ transillumination รังสียูวีและถ่ายภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . PCR ขั้นตอน
แบบ 261 BP ผลิตภัณฑ์ต่อ -
สร้างขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์กับดีเอ็นเอและ 261f 261r
สกัดจากกุ้งตัวอย่างเนื้อเยื่อ . pcr
ปฏิกิริยาได้ดําเนินการใน 25 ล ปฏิกิริยาที่มีส่วนผสม
0.5 อัลดีเอ็นเอแม่แบบ ( 50 – 450 นาโน
DNA ) , 2.5 ล 10  PCR 2 บัฟเฟอร์ ( สุดท้ายคอน -
centration : 10 มม. นอกจากนี้ HCL 50 mm . pH 8.3 )
1.5 mm คลอไรด์ 2 , 200 กำลังของแต่ละ datp dgtp
, ,และ dctp dttp 0.3 เป็นไพรเมอร์ ( 261f / R )
2 U / 25 al ของ amplitaq goldk ดีเอ็นเอโพลี -
merase ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย )
PCR ( แสดงใน mastercyler
ลาดเทอร์มอไซเคล ์ ( เพนดอร์ฟ , เยอรมนี )
ร้อนเริ่มต้นที่ 94 8C สำหรับ 5 นาที และ 35 รอบ 94
8C 30 , 60 72 30 30 s 8C , 8C , และส่วนขยายสุดท้าย
72 8C 7 นาที 10
ต่อไปนี้อัลของ PCR โดยใช้ผลิตภัณฑ์กุ้งโรง -
1 – 2% หรือเจลที่มีคู่
โบรไมด์ในขั้นสุดท้ายที่ความเข้มข้น 0.5 AG / มิลลิลิตร 1
KB ดีเอ็นเอบันได ( Invitrogen Carlsbad , CA ) คือ
ใช้เป็นเครื่องหมาย ส่วนเจลตรวจสอบ
ภายใต้ transillumination UV และถ่ายภาพ