Mononuclear cells were prepared fro

Mononuclear cells were prepared from the CNS as previously described by Phillips.

(25) on day 7 after i.c. inoculation.
Three to five brains were pooled per sample.

In brief, animals were sacrificed and perfused with 10 ml of PBS, and a single-cell suspension from the brain was obtained by passing cells through a nylon mesh bag (mesh opening, 64 μm).

Percoll (Pharmacia) was added to a final concentration of 30%, and the lysate was centrifuged at 1,300 × g for 30 min at 4°C.

The cell pellet was resuspended, passed through a cell strainer (pore diameter, 70 μm; Becton Dickinson), and washed.

The cells were then layered over 2 ml of Lympholyte-M (Cedarlane Laboratories) and centrifuged at 1,300 × g for 20 min at room temperature.

Cells were removed from the interface, washed once, and counted.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์ mononuclear ถูกเตรียมจาก CNS เป็นก่อนหน้านี้ อธิบาย ด้วยไขควง (25) ในวันที่ 7 หลังจาก inoculation ซี สมองสามถึงห้าถูกทางถูกพูต่อตัวอย่าง สังเขป สัตว์เสียสละ และ perfused กับ 10 ml ของ PBS และระงับเซลล์เดียวจากสมองได้รับ โดยผ่านเซลล์ถุงตาข่ายไนล่อน (ตาข่ายเปิด 64 μm) Percoll (Pharmacia) ถูกเพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย 30% และที่ lysate ถูก centrifuged ที่ 1300 × g ใน 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เม็ดเซลล์ถูก resuspended ผ่านเครื่องร่อนเซลล์ (เส้นผ่าศูนย์กลางของรูขุมขน 70 μm Becton สัน), และเครื่องซักผ้า เซลล์ได้แล้วชั้น Lympholyte-M (ห้อง Cedarlane) กว่า 2 ml และ centrifuged ที่ 1300 × g สำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง เซลล์ถูกเอาออกจากอินเทอร์เฟซ ล้างครั้งเดียว และนับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์โมโนนิวเคลียร์ที่เตรียมจากระบบประสาทส่วนกลางตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยฟิลลิป. (25) ในวันที่ 7 หลังจากการฉีดวัคซีนไอซี. สามถึงห้าสมองถูกรวบรวมต่อตัวอย่าง. ในช่วงสั้น ๆ สัตว์ที่ถูกเสียสละและ perfused 10 มิลลิลิตรพีบีเอสและการเดียว เซลล์แขวนลอยจากสมองได้รับโดยผ่านเซลล์ผ่านถุงตาข่ายไนลอน (ตาข่ายเปิด 64 ไมครอน). Percoll (Pharmacia) ถูกบันทึกอยู่ในความเข้มข้นสุดท้ายของ 30% และ lysate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1300 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C. ตะกอนเซลล์ที่ถูก resuspended ผ่านกรองเซลล์ (เส้นผ่าศูนย์กลางรูขุมขน 70 ไมครอน; Becton ดิกคินสัน). และล้างเซลล์ถูกชั้นแล้วมากกว่า2 มิลลิลิตร Lympholyte-M (ห้องปฏิบัติการ Cedarlane) และหมุนเหวี่ยงที่ 1,300 × กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง. เซลล์ที่ถูกลบออกจากอินเตอร์เฟซล้างครั้งเดียวและนับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปกติเซลล์ที่เตรียมจากคมช. ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า โดยฟิลิปส์

( 25 ) . ในวันที่ 7 หลังการฉีดวัคซีน
สามถึงห้าสมองถูก pooled ต่อตัวอย่าง

สรุปว่า สัตว์ถูกฆ่าหนู 10 ml ของ PBS , และระงับเซลล์เดี่ยวจากสมองได้โดยผ่านเซลล์ผ่านตาข่ายไนล่อนถุง ( เปิดμตาข่าย 64 M )

percoll ( มุ่งมั่น ) คือการเพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย 30 % และ lysate คือระดับที่ 1300 × G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C .

เซลล์เม็ดเป็น resuspended ผ่านมือถือกระชอน ( เส้นผ่าศูนย์กลางรูขุมขน 70 μ M ; เบคตอน Dickinson ) และล้าง

เซลล์ก็แล้ว ชั้น 2 มิลลิลิตร lympholyte-m ( cedarlane ห้องปฏิบัติการ ) และระดับที่ 1300 × G สำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง .

เซลล์ที่ถูกลบออกจากเฟส ซักครั้งนึง และนับ