Blood collection, microvesicle isol

Blood collection, microvesicle isolation and RNA extraction. Peripheral
blood (7ml) was collected in tubes containing EDTA, and the tubes
were centrifuged at 400 g for 15min to separate the plasma fraction
from the blood cells. Aliquots of cell-free plasma were stored
at – 80 °C. Thawed samples were centrifuged three times at increasing
speeds (1000 g, 2000 g, 3000 g) for 15min at 4 °C to remove cell
debris and aggregates. Supernatants were ultracentrifuged at
110 000 g for 2 h at 4 °C. Enriched miRNAs were isolated with
the miRNeasy purification kit (Qiagen Hilden, Germany) following
the manufacturer’s instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เก็บเลือด microvesicle แยก และสกัดอาร์เอ็นเอ อุปกรณ์ต่อพ่วง
รวบรวมไว้ในหลอดที่ประกอบด้วย EDTA และหลอดเลือด (7ml)
ถูก centrifuged ที่ 400 กรัมสำหรับ 15 นาทีเพื่อแยกเศษพลาสม่า
จากเซลล์เม็ดเลือด Aliquots ของพลาสม่าเซลล์ฟรีถูกเก็บไว้
ที่-80 องศาเซลเซียส ตัวอย่าง thawed ถูก centrifuged สามครั้งที่เพิ่ม
ความเร็ว (1000 g, 2000 g 3000 g) ใน 15 นาทีที่ 4 ° C เพื่อลบเซลล์
เศษและผลการ Supernatants ได้ที่ ultracentrifuged
g 110 000 สำหรับ h 2 ที่ 4 องศาเซลเซียส MiRNAs อุดมได้แยกกับ
ต่อชุด (Qiagen Hilden เยอรมนี) ฟอก miRNeasy
คำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เก็บเลือดแยก microvesicle และการสกัดอาร์เอ็นเอ อุปกรณ์ต่อพ่วง
เลือด (7ml) ถูกเก็บในหลอดที่มี EDTA, และท่อ
ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 400 g นาน 15 นาทีที่จะแยกส่วนของพลาสมา
จากเซลล์เม็ดเลือด aliquots ของพลาสม่าเซลล์ฟรีถูกจัดเก็บไว้
ที่ - 80 ° C ตัวอย่างละลายถูกปั่นสามครั้งที่การเพิ่ม
ความเร็ว (1000 กรัม 2000 กรัม 3000 กรัม) ต่อ 15 นาทีที่ 4 ° C ในการลบเซลล์
เศษและมวลรวม supernatants ถูก ultracentrifuged ที่
110 000 กรัมเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 4 ° C. miRNAs อุดมถูกแยกด้วย
ชุดฟอก miRNeasy (Qiagen ฮิลเดน, เยอรมนี) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เก็บเลือด , แยก microvesicle และการสกัด RNA กระแสเลือด
( 7ml ) ถูกเก็บในหลอดที่มี EDTA และท่อ
เป็นระดับที่ 400 กรัม 15 นาทีเพื่อแยกพลาสมาเศษส่วน
จากเซลล์เลือด เฉยๆของการสังเคราะห์ของพลาสมาที่เก็บไว้ที่ 80 องศา C .
) ละลายจำนวน 3 ครั้ง ที่ระดับความเร็วเพิ่มขึ้น
( 1000 กรัม 2000 กรัม3 , 000 กรัม ) สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C เพื่อลบเซลล์
debris และมวลรวม . supernatants เป็น ultracentrifuged ที่ 110 000 G
2 H ที่อุณหภูมิ 4 องศา อุดม mirnas แยกได้ด้วย
mirneasy ฟอก Kit ( QIAGEN Hilden เยอรมนี ) ต่อไปนี้
คําแนะนําของผู้ผลิต