A 2191-bp open reading fragment of

A 2191-bp open reading fragment of CaNPR1 (GenBank:
DQ648785.1) was amplified using the following primers: CaNPR1
forward 5
-CAAAAAAAT GGCAAACTC TCT C-3 and CaNPR1 reverse
5
-TTT TAA GTA AAA TTC TCT TCT TTC AAA GTC GT-3 from cDNA of
healthy leaves from 10 day old bell pepper plants. The resulting
fragment was then cloned into CaMV 35S-promoter-IntronGUSNos
poly-A terminator (Vancanneyt et al., 1990) of binary vector
pCAMBIA1301. The authenticity ofthe above construct was verified
by sequencing of the cloned gene fragment. Agrobacterium tumefaciens
strain, EHA105 (Hood et al., 1986) was transformed with the
above vector and positive colony was streaked onto LB plate with
appropriate antibiotic selection. The plates were incubated at 28 ◦C
for 2 days, then a single A. tumefaciens colony was re-suspended
into 3 ml LB broth supplemented with appropriate antibiotics and
cultured in shaker incubator (230 rpm) at 28 ◦C for 16 h. Overnight
grown culture was added to 100 ml of freshly prepared Winans’ AB
minimal media (Winans et al., 1988) supplemented with appropriate
antibiotics. The culture was incubated on a shaker incubator
(230 rpm) at 28 ◦C for 18 h or till the optical density (OD600) of
1.2–1.5 was obtained. Finally, for virulence gene induction, 4–5 ml
of freshly prepared wounded tobacco leaf extract was added to
the A. tumefaciens culture and incubated on a shaker incubator
(230 rpm) at 28 ◦C for 5 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ส่วน 2191 bp เปิดอ่านของ CaNPR1 (GenBank:DQ648785.1) ได้ขยายการใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้: CaNPR1ส่งต่อ 5-CAAAAAAAT GGCAAACTC C เรา-3 และ CaNPR1 กลับ5-ทีท่า GTA AAA TTC เราเรา TTC AAA GTC GT-3 จาก cDNA ของใบสุขภาพจากพืชพริกหยวกอายุ 10 วัน ผลส่วนถูกแล้วลอกแบบลงใน CaMV 35S-โปรโมเตอร์-IntronGUSNosโพลี-A เทอร์มิเนเตอร์ (Vancanneyt et al. 1990) เวกเตอร์การไบนารีpCAMBIA1301 รับการตรวจสอบความถูกต้องของโครงสร้างข้างต้นโดยลำดับของส่วนการโคลนยีน Tumefaciens อโกรแบคทีเรียมสายพันธุ์ EHA105 (Hood et al. 1986) ถูกแปลงด้วยการข้าง ต้นเวกเตอร์ และบวกอาณานิคมเป็นลายลงบนจาน LBการเลือกยาปฏิชีวนะที่เหมาะสม ได้รับการกกแผ่นที่ 28 ◦C2 วัน แล้วอาณานิคมเดียว A. tumefaciens ถูกเลื่อนออกไปอีกลงในน้ำซุป 3 ml LB เสริม ด้วยยาปฏิชีวนะที่เหมาะสม และเพาะเลี้ยงในตู้อบการปั่น (รอบต่อนาที 230) ที่ 28 ◦C สำหรับ 16 ชั่วข้ามคืนวัฒนธรรมปลูกเพิ่ม 100 ml ของ AB แสนอร่อย Winansน้อยที่สุดสื่อ (Winans et al. 1988) เสริม ด้วยความเหมาะสมยาปฏิชีวนะ วัฒนธรรมได้รับการกกบนตู้ปั่น(รอบต่อนาที 230) ที่ 28 ◦C 18 ชม. หรือจน ถึงความหนาแน่นออปติคอล (OD600) ของ1.2 – 1.5 ได้รับ ในที่สุด สำหรับเหนี่ยวนำยีน virulence, 4-5 mlใบยาสูบได้รับบาดเจ็บที่เตรียมสดใหม่ สารสกัดเพิ่มA. tumefaciens วัฒนธรรม และได้รับการกกบนตู้ปั่น(รอบต่อนาที 230) ที่ 28 ◦C สำหรับ 5 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2191-BP ชิ้นส่วนเปิดอ่านของ CaNPR1 (GenBank:
DQ648785.1) ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้: CaNPR1
ไปข้างหน้า 5?
-CAAAAAAAT GGCAAACTC TCT C-3 หรือไม่? และย้อนกลับ CaNPR1
5?
-TTT TAA GTA AAA TTC TCT TCT TTC AAA GTC GT-3 หรือไม่? จากยีนของ
ใบมีสุขภาพดีจาก 10 วันพืชระฆังเก่าพริกไทย ส่งผลให้
ชิ้นส่วนเป็นโคลนแล้วเป็น CaMV 35S-โปรโมเตอร์ IntronGUSNos
โพลีเทอร์มิ (Vancanneyt et al., 1990) ของเวกเตอร์ไบนารี
pCAMBIA1301 ความถูกต้อง ofthe สร้างดังกล่าวข้างต้นได้รับการยืนยัน
โดยลำดับส่วนยีนที่โคลนได้ Agrobacterium tumefaciens
สายพันธุ์ EHA105 (Hood et al., 1986) ถูกเปลี่ยนกับ
เวกเตอร์ข้างต้นและอาณานิคมบวกลายลงบนจาน LB กับ
การเลือกใช้ยาปฏิชีวนะที่เหมาะสม แผ่นถูกบ่มที่ 28 ◦C
เป็นเวลา 2 วันแล้ว A. tumefaciens เดียวอาณานิคมเป็นอีกครั้งที่ถูกระงับ
เป็น 3 มล. LB น้ำซุปเสริมด้วยยาปฏิชีวนะที่เหมาะสมและการ
เพาะเลี้ยงในเครื่องปั่นศูนย์บ่มเพาะ (230 รอบต่อนาที) วันที่ 28 ◦Cเป็นเวลา 16 ชั่วโมง ค้างคืน
วัฒนธรรมเติบโตถูกบันทึกอยู่ใน 100 มลปรุงสดใหม่ Winans 'Ab
สื่อน้อยที่สุด (Winans et al., 1988) ที่เหมาะสมเสริมด้วย
ยาปฏิชีวนะ วัฒนธรรมถูกบ่มในเครื่องปั่นศูนย์บ่มเพาะ
(230 รอบต่อนาที) วันที่ 28 ◦Cสำหรับ 18 ชั่วโมงหรือจนความหนาแน่นของออปติคอล (OD600) ของ
1.2-1.5 ที่ได้รับ สุดท้ายสำหรับความรุนแรงของยีนเหนี่ยวนำ 4-5 มล.
ของสดที่เตรียมสารสกัดจากใบยาสูบที่ได้รับบาดเจ็บถูกบันทึกอยู่ใน
เอ tumefaciens วัฒนธรรมและบ่มในเครื่องปั่นศูนย์บ่มเพาะ
(230 รอบต่อนาที) วันที่ 28 ◦Cเป็นเวลา 5 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นคู่เบสของ canpr1 ชวนเปิดอ่าน ( ขนาด :dq648785.1 ) คือการขยายการใช้ไพรเมอร์ canpr1 ต่อไปนี้ :หน้า 5- caaaaaaat ggcaaactc TCT c-3 canpr1 ย้อนกลับและ5- GTA TTT TAA AAA ttc TCT TCT ttc AAA GTC gt-3 จากยีนของสุขภาพจาก 10 วัน เก่า ใบพริกพืช ที่เกิดขึ้นเบสถูกโคลนเข้า 35S CaMV promoter introngusnospoly-a Terminator ( vancanneyt et al . , 1990 ) ของเวกเตอร์ไบนารีสามารถ . ความถูกต้องของการตรวจสอบความถูกต้องเหนือสร้างโดยการโคลนยีน ~ . Agrobacterium tumefaciensสายพันธุ์ , ถ่ายยีนพบในสายพันธุ์ EHA105 ( หมวก et al . , 1986 ) ถูกเปลี่ยนด้วยเหนือเวกเตอร์และบวกอาณานิคมถูกลายบนแผ่นกับปอนด์ยาปฏิชีวนะที่เหมาะสมเลือก แผ่น◦อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส2 วันแล้วที่เป็นอาณานิคมของ A . tumefaciens เดี่ยวอีกครั้งระงับน้ำซุป 3 ปอนด์เสริมยาปฏิชีวนะ และเหมาะสมเลี้ยงในตู้ Shaker ( 230 RPM ) ที่ 28 ◦ C 16 ชั่วโมง ค้างคืนวัฒนธรรมการเติบโตเพิ่ม 100 มิลลิลิตรเตรียมสดวิเนิ่นส์ " .สื่อน้อยที่สุด ( วิเนิ่นส์ et al . , 1988 ) อาหารเสริมที่เหมาะสมยาปฏิชีวนะ วัฒนธรรมถูกบ่มใน shaker incubator( 230 RPM ) ที่ 28 ◦ C 18 ชั่วโมง หรือจนความหนาแน่นของแสง ( od600 ) ของ1.2 - 1.5 ได้ . สุดท้าย โรคยีนเหนี่ยว 4 – 5 มล.สารสกัดจากใบยาสูบของเตรียมสดได้รับบาดเจ็บถูกเพิ่มเอ. ซี วัฒนธรรม และบ่มใน shaker incubator( 230 RPM ) ที่ 28 ◦องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 ชั่วโมง