Test compounds were initially prepa

Test compounds were initially prepared as 40 mM stocks in
DMSO and diluted to final test concentrations in binding
buffer. The highest concentration of DMSO was less than
1%, which had no demonstrable effect on [3H] IMI binding.
Tissue, compound and radioligand were combined and
allowed to incubate for 1 h at room temperature in 96-well
polystyrene micro-titer plates (Fisher, Pittsburg, PA). The
assay was terminated by filtration through a GF/C glass
fiber filter presoaked with cold binding buffer (4 C), using
a TomTec 9600 harvester (TomTec, Hamden, CT). Bound
radioactivity was counted on a Wallec Microbeta Plus
(Wallac, Inc., Gaithersburg, MD). Non-specific binding
was defined in the presence of 100 lM IMI. Each test compound
was assayed at 1, 10 and 100 lM in triplicate. [3H]
Imidacloprid was obtained from Amersham Pharmacia
Biotech (Piscataway, NJ; Sp. Activity 30.1 mCi/mmol),
and concentrated stocks were stored at 80 C in ethanol.
All other chemicals were obtained from Sigma Chemical
Co. (St. Louis, MO).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สารทดสอบเตรียมไว้เริ่มเป็นหุ้น 40 มม.ในDMSO และแตกออกไปสุดท้ายทดสอบความเข้มข้นในการผูกบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นสูงสุดของ DMSO มีน้อยกว่า1% ซึ่งมีผลผูกอิ [3H] ไม่แสดงให้เห็นถึง การรวมเนื้อเยื่อ สารประกอบ และ radioligand และสามารถฟักสำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้องใน 96-ดีโฟมไมโคร titer แผ่น (Fisher, Pittsburg, PA) ที่วิเคราะห์ถูกยกเลิก โดยการกรองผ่านแก้ว GF/Cใยกรอง presoaked กับบัฟเฟอร์รวมเย็น (4 C), ใช้เป็น TomTec 9600 เก็บเกี่ยว (TomTec แฮม CT) ผูกradioactivity ที่นับในตัว Wallec Microbeta บวก(Wallac, Inc., Gaithersburg, MD) รวมไม่ใช่เฉพาะกำหนดไว้ในต่อหน้าของ 100 lM อิ ทดสอบแต่ละบริเวณถูก assayed ที่ lM 1, 10 และ 100 ใน triplicate [3H]Imidacloprid กล่าวจาก Amersham Pharmaciaเทคโนโลยีชีวภาพ (ปิสกาตาเวย์ NJ กิจกรรม sp. 30.1 mCi/mmol),และหุ้นที่เข้มข้นถูกเก็บไว้ที่ 80 C ในเอทานอลสารเคมีอื่น ๆ ได้รับจากซิกเคมีจำกัด (St. Louis, MO)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สารทดสอบได้จัดทำครั้งแรกเป็น 40 มิลลิหุ้นใน
DMSO และเจือจางความเข้มข้นของการทดสอบขั้นสุดท้ายในการผูก
บัฟเฟอร์ ความเข้มข้นสูงสุดของ DMSO น้อยกว่า
1% ซึ่งไม่มีผลพิสูจน์ได้ใน [3H] IMI ผูกพัน.
เนื้อเยื่อและสารประกอบ radioligand มารวมกันและ
ได้รับอนุญาตในการฟักไข่เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องใน 96 หลุม
โฟมแผ่น titer ไมโคร ( ฟิชเชอร์สเบิร์ก, PA)
การทดสอบถูกยกเลิกโดยการกรองผ่าน GF / C แก้ว
กรองใยแช่กับบัฟเฟอร์ผูกพันเย็น (4 องศาเซลเซียส) โดยใช้
TomTec 9600 เก็บเกี่ยว (TomTec เดน, CT) ผูกพัน
กัมมันตภาพรังสีถูกนับ Wallec Microbeta พลัส
(Wallac อิงค์ Gaithersburg, MD) ผูกพันที่ไม่เฉพาะเจาะจง
ที่ถูกกำหนดไว้ในการแสดงตนของ LM 100 IMI สารประกอบทดสอบแต่ละ
ได้รับการวิเคราะห์ที่ 1, 10 และ 100 LM ในเพิ่มขึ้นสามเท่า [3H]
Imidacloprid ที่ได้รับจาก Amersham Pharmacia
ไบโอเทค (พิสแคต, นิวเจอร์ซีย์; Sp. กิจกรรม 30.1 มิลลิ / mmol)
?. และหุ้นเข้มข้นถูกเก็บไว้ที่ 80 C ในเอทานอล
ทั้งหมดสารเคมีอื่น ๆ ที่ได้รับจาก Sigma เคมี
จำกัด (เซนต์หลุยส์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารทดสอบในขั้นแรกเตรียม 40 มิลลิเมตรหุ้นใน DMSO เพื่อลดความเข้มข้นและ

ทดสอบขั้นสุดท้ายในการบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นสูงสุดของ DMSO น้อยกว่า
1 % ซึ่งยังไม่มีการพิสูจน์ผล [ 3 ] imi ผูกมัด
เนื้อเยื่อ สารและ radioligand ถูกรวมและ
อนุญาตให้พักเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง 96 ดี
โฟมแผ่นไมโครไตเตอร์ ( Fisher , Pittsburgh , PA )
( ถูกยกเลิกโดยการกรองผ่าน GF / C กระจกกรองไฟเบอร์ presoaked
บัฟเฟอร์ผูกเย็น ( 4  C ) โดยใช้การ tomtec 9600 เครื่องเก็บเกี่ยว ( tomtec เดน , CT ) ผูกพัน
กัมมันตภาพรังสีถูกนับใน wallec microbeta บวก
( wallac Gaithersburg ( MD ) ไม่เฉพาะเจาะจงผูกพัน
ถูกกำหนดไว้ในการแสดงตนของ 100 Lm การจัดการ . การทดสอบสารประกอบ
ซีรั่มที่ 1 , 10 และ 100 LM ทั้งสามใบ [ 3 ]
อิมิดาโคลพริด ได้จากที่มุ่งมั่น
BIOTECH ( Piscataway , NJ ; sp . กิจกรรม 30.1 MCI / มิลลิโมล ) หุ้น
และเข้มข้นที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส ใน   เอทานอล สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดได้รับ

จาก Sigma เคมี Co . ( St . Louis , MO )