3.4. Study of potential food proces

3.4. Study of potential food processing impact on DNA walking
strategy
As food processing is well-known to cause DNA damage, the
DNA walking approach was carried out on rice matrices processed
in-house (Ballari & Martin, 2013). In order to gradually test the
potential effect of food processing, rice flour and rice noodles were
generated. These products are composed of WT rice and 1%, 0.1% or
0% of Bt rice. As a control, unprocessed WT rice samples (rice
grain), containing 1%, 0.1% or 0% of Bt rice, were also prepared.
To evaluate the impact of food processing on DNA quality,
extracted DNAs were observed on 1% agarose gel (Fig. 2). Although
the DNA yields were similar, DNA degradation followed the level of
food processing. Indeed, rice flour and rice noodles presented a
DNA slightly and strongly degraded compared to the unprocessed
materials, respectively.
First, these processed food products were analysed by qPCR
SYBR_Green using the PLD and t35S pCAMBIA markers (Table 3).
As expected, the Bt rice samples presented a positive signal for
the two screening markers (PLD and t35s pCAMBIA), inversely proportional
to the amount of target. A difference of Ct was observed
between the unprocessed and processed samples, suggesting an
impact of food processing.
Second, the DNA walking approach was evaluated on processed
rice products (Fig. 1; Table 3). Compared to the unprocessed materials,
the detection power of this system had decreased according
to the level of DNA damage caused by food processing. However,
the intensity of this effect differed in function of the DRT mix used.
Indeed, no amplicon was generated on processed food with the
DRT B primer while the mix D was able to detect the junction localised
on the chromosome III similarly to unprocessed materials.
amplicons, their sizes Concerning the obtained were in the same
range as those of unprocessed materials (Fig. 1; Table 1). Nonetheless,
the DNA degradation had implied a disappearance of some of
them, such as in mix D tested on the 0.1% Bt rice noodles sample.
As a whole, based on the combination of results from the four
different DRT primer mixes (A–D), the DNA walking approach
was able to confirm the presence of the target at its lowest tested
concentration (0.1%), in both rice flour and noodles, identifying the
transgene flanking regions on chromosomes II and III. Regarding
the specificity, no additional aspecific amplification was observed.
The high sensitivity and specificity of the proposed DNA walking
approach was confirmed by all these results. This method presents
the important advantage to be able to cope with processed
food that is essential for all analysis applied to food matrices. It
should be noted, however, that, although the DNA from rice
noodles was strongly degraded by the food processing, the impact
of higher temperatures was not investigated in this study (Fig. 2).
In addition, the sensitivity of the method is clearly linked to the
affinity of DRT primers used. Indeed, a primer with a poor affinity
for the targeted sequence, such as mix B, presents an obvious
difficulty to detect the transgene flanking regions in a given sample
submitted to food processing. Therefore, the importance of using
the four different DRT primers is highlighted in order to maximise
the detection power of the DNA walking method, independently
of the processing state of the tested matrix.
4. Conclusion

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.4. การศึกษาศักยภาพอาหารประมวลผลผลกระทบบนเดินดีเอ็นเอกลยุทธ์เป็นอาหารรู้จักทำให้เกิดความเสียหายของดีเอ็นเอ การดีเอ็นเอที่เดินแนวทางดำเนินการบนเมทริกซ์ข้าวที่ประมวลผลภายใน (Ballari & Martin, 2013) เพื่อค่อย ๆ ทดสอบการศักยภาพผลของอาหารแปรรูป แป้งข้าวและก๋วยเตี๋ยวได้สร้างขึ้น ผลิตภัณฑ์เหล่านี้จะประกอบด้วยข้าว WT และ 1%, 0.1% หรือ0% ข้าวบีที เป็นตัวควบคุม ประมวลผล WT ข้าวตัวอย่างข้าวเมล็ดข้าว), ประกอบด้วย 1%, 0.1% หรือ 0% ข้าวบีที ถูกจัดขึ้นการประเมินผลกระทบของคุณภาพดีเอ็นเอ การแปรรูปอาหารสกัดดีเอ็นเอถูกสังเกตในเจ 1% agarose (2 รูป) ถึงแม้ว่าก็เป็นผลผลิตของดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอลดตามระดับของการแปรรูปอาหาร ข้าวแป้ง และข้าวก๋วยเตี๋ยวแสดงจริง มีดีเอ็นเอเล็กน้อย และขอลดลงเมื่อเทียบกับตัวประมวลผลวัสดุ ตามลำดับครั้งแรก ผลิตภัณฑ์อาหารแปรรูปเหล่านี้ถูกวิเคราะห์ โดย qPCRSYBR_Green ที่ใช้จัดและ t35S pCAMBIA หมาย (ตาราง 3)ตามที่คาดไว้ ตัวอย่างข้าวบีทีแสดงสัญญาณบวกสำหรับการคัดกรองสองเครื่องหมาย (pCAMBIA จัดและ t35s), สัดส่วน inverselyจำนวนเป้าหมาย ได้สังเกตความแตกต่างของ Ctระหว่างตัวประมวลผล และประมวลผลอย่าง แนะนำการผลกระทบของการแปรรูปอาหารที่สอง ดีเอ็นเอที่เดินแนวทางประกอบในการประมวลผลผลิตภัณฑ์ข้าว (รูปที่ 1 ตาราง 3) เมื่อเทียบกับวัสดุการประมวลผลเครื่องตรวจจับของระบบนี้ลดลงตามระดับความเสียหายของดีเอ็นเอเกิดจากการแปรรูปอาหาร อย่างไรก็ตามความรุนแรงของผลกระทบนี้ขัดแย้งกันในฟังก์ชันของ DRT ผสมใช้จริง สร้าง amplicon ไม่มีในอาหารแปรรูปด้วยการรองพื้น DRT B ขณะผสม D สามารถตรวจแยกหน่วงบนโครโมโซม III การประมวลผลวัสดุamplicons ขนาดของพวกเขาเกี่ยวกับการได้รับมาเหมือนกันช่วงที่ประมวลผลวัสดุ (รูปที่ 1 ตาราง 1) กระนั้นสลายดีเอ็นเอมีนัยหายไปบางส่วนพวกเขา เช่นเดียวกับในผสมทดสอบตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวข้าวบีทีที่ของ 0.1% Dทั้งหมด ตามชุดของผลลัพธ์จากสี่ต่าง ๆ DRT รองพื้นผสม (A – D), ดีเอ็นเอที่เดินแนวทางสามารถยืนยันการมีอยู่ของเป้าหมายที่ผ่านการทดสอบที่ต่ำสุดความเข้มข้น (0.1%), ทั้งแป้งข้าวและก๋วยเตี๋ยว ระบุการtransgene โล่งภูมิภาคบนไหน II และ III เกี่ยวกับความ สังเกตเห็นไม่ขยายเพิ่มเติม aspecificความไวแสงสูงและมีความจำเพาะของดีเอ็นเอเสนอเดินวิธีการได้รับการยืนยัน โดยผลลัพธ์เหล่านี้ นำเสนอวิธีการนี้สิ่งสำคัญเพื่อให้สามารถรับมือกับการประมวลผลอาหารที่จำเป็นต่อการวิเคราะห์ทั้งหมดที่ใช้กับอาหารเมทริกซ์ มันควรระบุไว้ อย่างไรก็ตาม ที่ แม้ว่าดีเอ็นเอจากข้าวก๋วยเตี๋ยวถูกขอลด โดยการแปรรูปอาหาร ผลกระทบอุณหภูมิสูงขึ้นคือไม่ตรวจสอบในการศึกษานี้ (รูป 2)นอกจากนี้ ความไวของวิธีการที่ชัดเจนได้เชื่อมโยงกับการความสัมพันธ์ของ DRT ไพรเมอร์ที่ใช้ แน่นอน รองพื้น ด้วยความสัมพันธ์ดีสำหรับลำดับเป้าหมาย เช่นผสม B นำเสนอชัดเจนปัญหาการตรวจสอบ transgene ที่โล่งในตัวอย่างที่กำหนดส่งไปประมวลผลอาหาร ดังนั้น ความสำคัญของการใช้ไพรเมอร์ DRT แตกต่างกันสี่จะเน้นเพื่อเพิ่มเครื่องตรวจจับของดีเอ็นเอเดินวิธี อิสระสถานะการประมวลผลของเมทริกซ์ผ่านการทดสอบ4. สรุป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4 การศึกษาผลกระทบของการแปรรูปอาหารที่มีศักยภาพในการเดินดีเอ็นเอ
กลยุทธ์
การประมวลผลอาหารเป็นที่รู้จักกันจะทำให้เกิดความเสียหายของดีเอ็นเอที่
วิธีดีเอ็นเอที่สามารถเดินได้ดำเนินการในการฝึกอบรมการประมวลผลข้าว
ในบ้าน (Ballari และมาร์ติน, 2013) เพื่อที่จะค่อยๆทดสอบ
ผลกระทบของการแปรรูปอาหาร, แป้งข้าวเจ้าและข้าวก๋วยเตี๋ยวถูก
สร้างขึ้น ผลิตภัณฑ์เหล่านี้จะประกอบด้วยข้าว WT และ 1%, 0.1% หรือ
0% ข้าวบาท เป็นตัวควบคุมตัวอย่างข้าวที่ยังไม่ได้ WT (ข้าว
เมล็ด) มี 1%, 0.1% หรือ 0% ข้าวบาทนอกจากนี้ยังได้จัดเตรียมไว้.
เพื่อประเมินผลกระทบของการแปรรูปอาหารที่มีต่อคุณภาพดีเอ็นเอ
ดีเอ็นเอที่สกัดได้ถูกตั้งข้อสังเกตเกี่ยวกับการเจล agarose 1% (รูปที่. 2) แม้ว่า
อัตราผลตอบแทนดีเอ็นเอมีความคล้ายคลึงกันการทำลายดีเอ็นเอตามระดับของ
การแปรรูปอาหาร แท้จริงแป้งข้าวเจ้าและข้าวก๋วยเตี๋ยวนำเสนอ
ดีเอ็นเอเล็กน้อยและเสื่อมโทรมอย่างมากเมื่อเทียบกับที่ยังไม่ได้
วัสดุตามลำดับ.
ครั้งแรกที่ผลิตภัณฑ์เหล่านี้อาหารแปรรูปนำมาวิเคราะห์โดย qPCR
SYBR_Green ใช้ PLD และเครื่องหมาย t35S pCAMBIA (ตารางที่ 3).
ตามคาดบาท ตัวอย่างข้าวที่นำเสนอเป็นสัญญาณบวกสำหรับ
ทั้งสองเครื่องหมายการตรวจคัดกรอง (PLD และ t35s pCAMBIA) สัดส่วนผกผัน
กับปริมาณของเป้าหมาย ความแตกต่างของกะรัตถูกพบ
ระหว่างที่ยังไม่ได้ตัวอย่างและประมวลผลการแนะนำ
. ผลกระทบของการแปรรูปอาหาร
สองวิธีดีเอ็นเอที่สามารถเดินได้รับการประเมินในการประมวลผล
ผลิตภัณฑ์ข้าว (รูปที่ 1. ตารางที่ 3) เมื่อเทียบกับวัสดุที่ยังไม่ได้
อำนาจการตรวจสอบของระบบนี้ได้ลดลงตาม
ระดับของการเสียหายของดีเอ็นเอที่เกิดจากการแปรรูปอาหาร อย่างไรก็ตาม
ความรุนแรงของผลกระทบนี้แตกต่างกันในการทำงานของ DRT ผสมที่ใช้.
อันที่จริงไม่มี amplicon ถูกสร้างขึ้นในอาหารแปรรูปที่มี
ไพรเมอร์ DRT B ขณะที่ผสม D ก็สามารถที่จะตรวจสอบทางแยกที่มีการแปล
บนโครโมโซมที่สามในทำนองเดียวกันกับวัสดุที่ยังไม่ได้
amplicons ขนาดของพวกเขาเกี่ยวกับการได้รับอยู่ในเดียวกัน
ช่วงเป็นที่ของวัสดุที่ยังไม่ได้ (รูปที่ 1. ตารางที่ 1) อย่างไรก็ตาม
การย่อยสลายดีเอ็นเอได้โดยนัยการหายตัวไปของบางส่วนของ
พวกเขาเช่นในการผสม D ทดสอบบน 0.1% บาทก๋วยเตี๋ยวตัวอย่าง.
เป็นทั้งขึ้นอยู่กับการรวมกันของผลที่ได้จากสี่
ที่แตกต่างกันผสม DRT ไพรเมอร์ (A-D ) วิธีดีเอ็นเอเดิน
ก็สามารถที่จะยืนยันการปรากฏตัวของเป้าหมายที่ผ่านการทดสอบต่ำสุด
เข้มข้น (0.1%) ทั้งในแป้งข้าวและก๋วยเตี๋ยวระบุ
ยีนขนาบภูมิภาคบนโครโมโซม II และ III เกี่ยวกับ
ความจำเพาะที่ไม่มีการขยาย aspecific เพิ่มเติมเป็นข้อสังเกต.
ความไวและความจำเพาะของการเดินดีเอ็นเอที่นำเสนอ
วิธีการที่ได้รับการยืนยันโดยผลเหล่านี้ทั้งหมด วิธีการนี้จะนำเสนอ
ข้อได้เปรียบที่สำคัญที่จะสามารถที่จะรับมือกับการประมวลผล
อาหารที่เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการวิเคราะห์นำมาใช้กับการฝึกอบรมอาหาร มัน
ควรจะตั้งข้อสังเกตอย่างไรว่าแม้ว่าดีเอ็นเอจากข้าว
ก๋วยเตี๋ยวถูกเสื่อมโทรมอย่างรุนแรงจากการแปรรูปอาหาร, ผลกระทบ
ของอุณหภูมิที่สูงขึ้นไม่ได้ตรวจสอบในการศึกษานี้ (รูปที่. 2).
นอกจากนี้ยังมีความไวของวิธีการที่เห็นได้ชัด ที่เชื่อมโยงกับ
ความสัมพันธ์ของไพรเมอร์ที่ใช้ DRT แท้จริงไพรเมอร์ที่มีความสัมพันธ์ที่ไม่ดี
สำหรับลำดับการกำหนดเป้าหมายเช่นผสม B, มีการจัดที่เห็นได้ชัด
ความยากลำบากในการตรวจสอบยีนขนาบภูมิภาคในกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับ
ส่งไปยังการแปรรูปอาหาร ดังนั้นความสำคัญของการใช้
สี่ไพรเมอร์ DRT ที่แตกต่างกันเป็นไฮไลต์ในการสั่งซื้อเพื่อเพิ่ม
อำนาจการตรวจสอบของวิธีดีเอ็นเอที่สามารถเดินได้เป็นอิสระ
ของรัฐในการประมวลผลของเมทริกซ์การทดสอบ.
4 ข้อสรุป