ORAC-FL was performed in a black 96

ORAC-FL was performed in a black 96-well microplate (BD
Falcon, BD Biosciences, UK), following the method described by
Dávalos, Gómez-Cordovés, and Bartolomé (2004) with some
modifications.
This assay was realised with a Multidetection plate reader (Synergy HT, Vermont, USA).

Previously, fluorescein (60 nM) and appropriate dilutions of the samples were prepared along with
solutions of different Trolox concentrations (0.5, 2, 3.5, 5, 6.5, 8,9.5 mM) used to construct the calibration curve, all in 75 mM phosphate buffer (pH 7.4).

First, the wells at the edges of the microplate were filled with 200 mL of buffer to moderate the temperature throughout the assay.

Then all of the wells containing 50 mL of the sample (buffer, Trolox or assay sample) at the required dilution plus 50 mL fluorescein were preincubated for 15 min at 37 C.

Afterwards, 50 mL of fresh AAPH (15mMin phosphate buffer)
was rapidly added to the reaction using a multichannel pipette.

Fluorescence measures were taken at intervals of 5 min over a period of 90 min.

The excitation wavelength was set at 485 nm and the emission wavelength at 528 nm.

All the reaction assays were realised in triplicate.

The results are expressed as the area under the curve (AUC) as calculated by the Cao and Prior (1999)
equation:

where f0 is the initial fluorescence and fi is the fluorescence at time i(minutes).

The final AUC values were calculated by subtracting the AUC of the blank from all of the results.

For each experiment, a blank was assayed and a calibration line with different Trolox concentrations was made to obtain the regression equation and calculate the
ORAC-FL final values, expressed as mmol Trolox equivalents (TE)/kg
of sample.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ORAC FL ทำใน (BD microplate 96 ดีเป็นสีดำฟอลคอน เวลาออก BD สหราชอาณาจักร), ตามวิธีที่อธิบายโดยDávalos, Gómez Cordovés และ Bartolomé (2004) กับปรับเปลี่ยน ทดสอบนี้ได้เองก็ยังคิดกับตัวอ่านแผ่น Multidetection (เอ ชที Synergy รัฐเวอร์มอนต์ สหรัฐอเมริกา) ก่อนหน้านี้ fluorescein (60 nM) และ dilutions ที่เหมาะสมของตัวอย่างได้เตรียมพร้อมโซลูชั่นที่ความเข้มข้นแตกต่างกันของ Trolox (0.5, 2, 3.5, 5, 6.5, 8,9.5 mM) ใช้ในการสร้างเส้นโค้งเทียบ ใน 75 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) ครั้งแรก บ่อที่ขอบ microplate เต็มไป ด้วย 200 mL ของบัฟเฟอร์บรรเทาอุณหภูมิตลอดการทดสอบ แล้ว ทั้งหมดของบ่อประกอบด้วย 50 มล.ของตัวอย่าง (ตัวอย่างบัฟเฟอร์ Trolox หรือวิเคราะห์) ที่ต้องเจือจางบวก 50 mL fluorescein มี preincubated สำหรับ 15 นาทีที่ 37 เซลเซียส ภายหลัง 50 mL ของสด AAPH (15mMin ฟอสเฟตบัฟเฟอร์)รวดเร็วถูกเพิ่มเข้าไปปฏิกิริยาใช้เปตต์หลายแชนแนลวัด fluorescence ที่ถ่ายในช่วงเวลา 5 นาทีเป็นระยะเวลา 90 นาที มีการตั้งค่าความยาวคลื่นในการกระตุ้นที่ 485 nm และความยาวคลื่นปล่อยก๊าซที่ 528 nm Assays ปฏิกิริยาทั้งหมดได้เองก็ยังคิดใน triplicate ผลลัพธ์จะแสดงเป็นพื้นที่ภายใต้เส้นโค้ง (AUC) ตามที่คำนวณโดยการเกาและก่อน (1999)สมการ:ที่ f0 fluorescence เริ่ม และ fi fluorescence ที่เวลา i(minutes)ค่า AUC สุดท้ายถูกคำนวณ โดยลบ AUC ของว่างจากผลการ สำหรับแต่ละการทดลอง ช่องว่าง assayed และบรรทัดเทียบกับความเข้มข้นของ Trolox ที่แตกต่างกันจะได้สมการถดถอย และคำนวณค่าสุดท้ายที่ ORAC FL แสดงเป็น mmol /kg Trolox เทียบเท่า (TE)ของอย่างนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ORAC ฟลอริดาได้รับการดำเนินการในสีดำ microplate 96 หลุม (BD
เหยี่ยว BD ชีววิทยาศาสตร์สหราชอาณาจักร)
ตามวิธีการที่อธิบายโดยDávalos, Gómez-CordovésและBartolomé (2004)
กับบางส่วนปรับเปลี่ยน.
การทดสอบนี้ได้รับรู้ด้วยแผ่น Multidetection ผู้อ่าน (Synergy HT, เวอร์มอนต์สหรัฐอเมริกา). ก่อนหน้านี้ fluorescein (60 นาโนเมตร) และเจือจางที่เหมาะสมของกลุ่มตัวอย่างได้จัดทำพร้อมกับการแก้ปัญหาความเข้มข้นของTrolox ที่แตกต่างกัน (0.5, 2, 3.5, 5, 6.5 มิลลิ 8,9.5) ที่ใช้ในการ สร้างกราฟมาตรฐานทั้งหมดใน 75 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4). ครั้งแรกที่หลุมที่ขอบของไมโครที่เต็มไปด้วย 200 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์ถึงปานกลางอุณหภูมิตลอดการทดสอบได้. แล้วทั้งหมดในหลุมที่มี 50 มิลลิลิตร ตัวอย่าง (บัฟเฟอร์ Trolox หรือตัวอย่างทดสอบ) ที่เจือจางต้องบวก 50 มล fluorescein ถูก preincubated 15 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส. หลังจากนั้น 50 มล AAPH สด (15mMin ฟอสเฟตบัฟเฟอร์) ถูกเพิ่มเข้ามาอย่างรวดเร็วปฏิกิริยาโดยใช้ปิเปตหลายช่อง . มาตรการเรืองแสงถูกนำมาในช่วงเวลา 5 นาทีในช่วง 90 นาที. ความยาวคลื่นกระตุ้นตั้งอยู่ที่ 485 นาโนเมตรและความยาวคลื่นปล่อยก๊าซเรือนกระจกที่ 528 นาโนเมตร. ทั้งหมดการตรวจปฏิกิริยาได้ตระหนักถึงในเพิ่มขึ้นสามเท่า. ผลที่ได้จะแสดงเป็นพื้นที่ที่อยู่ภายใต้ เส้นโค้ง (AUC) ตามที่คำนวณโดยเฉาและก่อน (1999) สม: ที่ F0 เป็นเรืองแสงเริ่มต้นและสายเป็นเรืองแสงในเวลาที่ฉัน (นาที). ค่า AUC สุดท้ายจะถูกคำนวณโดยการลบ AUC ของว่างจากทั่วทุก ของผล. สำหรับการทดสอบแต่ละว่างเปล่าได้รับการวิเคราะห์และสายการสอบเทียบที่มีความเข้มข้นแตกต่างกัน Trolox ถูกสร้างขึ้นมาเพื่อให้ได้สมการถดถอยและคำนวณค่าORAC สุดท้ายฟลอริดาแสดงเป็นมิลลิโมเทียบเท่า Trolox (TE) / กก. ของกลุ่มตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

orac-fl แสดงในสีดำ 96 ดีพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( BD
Falcon BD BIOSCIENCES , UK ) ตามวิธีที่อธิบายไว้โดย
D . kgm valos G óแมส cordov é s และบาร์โตโลเมé ( 2004 ) กับบาง
การปรับเปลี่ยน
วิเคราะห์นี้ตระหนักกับ multidetection จานอ่าน ( Synergy HT , Vermont , สหรัฐอเมริกา )

ก่อนหน้านี้ี่ ( 60 nm ) ที่เหมาะสมและวิธีการนำไปพร้อมกับ
โซลูชั่นของความเข้มข้นสาร ต่าง ๆ ( 0.5 , 2 , 3 , 5 , 6.5 , 8,9.5 มม. ) ใช้ในการสร้างเส้นปรับเทียบทั้งหมดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 75 มม. ( pH 7.4 )

ตอนแรก หลุมที่ขอบของพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยเต็มไปด้วย 200 ml ของบัฟเฟอร์ ค่าอุณหภูมิตลอดการทดสอบ

แล้วทั้งหมดจากบ่อผสม 50 มิลลิลิตร ตัวอย่าง ( บัฟเฟอร์หรือ การทดสอบสารตัวอย่าง ) ที่ต้องการเพิ่ม 50 ml ี่ถูก preincubated 15 นาทีที่ 37  C .

หลังจากนั้น 50 มิลลิลิตร aaph สด ( 15mmin ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ )
เพิ่มอย่างรวดเร็ว ปฏิกิริยาการใช้ปิเปตต์หลายช่อง

วัดนี้ถูกถ่ายในช่วงเวลา 5 นาที ตลอดระยะเวลา 90 มิน

ไทเทเนียมความยาวคลื่นเท่ากับ 485 นาโนเมตรและความยาวคลื่นที่ปล่อยมลพิษ 700 นาโนเมตร

) ทั้งหมดมีทั้งปฏิกิริยาทั้งสามใบ

ผลจะแสดงเป็นค่าพื้นที่ใต้เส้นโค้ง ( ยา ) ที่คำนวณโดย โจโฉ และก่อน ( 1999 )

ที่ละสมการคือการเริ่มต้นและ Fi เป็นเรืองที่เวลาผม

( นาที )ค่าสุดท้ายค่าคำนวณด้วยการลบค่าของเปล่าจากทั้งหมดของผลลัพธ์

สำหรับแต่ละการทดลอง ว่างซีรั่มและสายการสอบเทียบที่มีความเข้มข้นสารต่าง ๆขึ้นเพื่อให้ได้สมการถดถอยและคำนวณ
orac-fl สุดท้ายค่า แสดงเป็นมิลลิโมลสารเทียบเท่า ( TE ) / kg
ของกลุ่มตัวอย่าง