2.5.2. Extraction of high-molecular

2.5.2. Extraction of high-molecular-weight genomic DNA from
microtissue samples of urinary bladder urothelium and in vitro
packaging of l phage DNA
Briefly, using a toothpick, mucosal samples were transferred
into 600 ml cell lysis buffer (8.20 g NaCl, 0.22 g KCl, 120 g sucrose,
0.30 g EDTA, 10 ml Triton X-100 and 1.58 g TriseHCl (pH 8.3) in 1 L
dH2O), the sample was homogenized by pipetting, and the solution
was centrifuged at 13,200 rpm in a microfuge at 4
C for 12 min. The
supernatant was discarded and the nuclei were resuspended in 70 ml of digestion butter (1.75 g Na2HPO4, 8.0 g NaCl, 0.2 g KCl and
20 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0) in 1 L dH2O, pH adjusted to 8.0 with
NaOH) supplemented with 2% RNaseIt cocktail and 70 ml of proteinase
K solution (100 mg proteinase K in 30 ml d dH2O supplemented
with 10 ml 10% (w/v) SDS and 10 ml 0.5 M EDTA (pH 7.5)).
The tube was incubated at 50
C in a water bath for 1e2 h with
occasional and gentle mixing of the solution. After digestion, using
a wide bore pipette tip, the solution was gently pipetted into a
dialysis cup, which was floated on TE buffer in a beaker with a
capacity of 500 ml. The buffer was slowly stirred on a magnetic
stirrer overnight to obtain high-molecular-weight genomic DNA. l
EG10 phages were rescued from the DNA using Transpack Packaging
Extract (Stratagene).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5.2 การสกัดสูงโมเลกุลน้ำหนัก genomic DNA จากตัวอย่าง microtissue urothelium กระเพาะปัสสาวะ และการเพาะเลี้ยงบรรจุภัณฑ์ของ phage l ดีเอ็นเอสั้น ๆ ใช้ไม้จิ้มฟัน ตัวอย่าง mucosal ถูกโอนย้ายเป็นบัฟเฟอร์ lysis เซลล์ 600 มล. (8.20 g NaCl, 0.22 กรัม KCl, 120 g ซูโครส0.30 g EDTA การ 10 ml ไตรตั้น X 100 และ 1.58 g TriseHCl (pH 8.3) 1 LdH2O), ตัวอย่างถูก homogenized เป็นกลุ่ม ด้วย pipetting และการแก้ไขcentrifuged ที่ rpm 13,200 ใน microfuge แบบที่ 4 C ในนาทีที่ 12supernatant ถูกละทิ้ง และแอลฟาถูก resuspended ใน 70 ml เนยย่อยอาหาร (1.75 g Na2HPO4, 8.0 g NaCl, 0.2 กรัม KCl และปริมาณ 20 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0) ใน 1 L dH2O, pH ปรับปรุง 8.0 ด้วยNaOH) เสริม ด้วย 2% RNaseIt ค็อกเทลและ 70 ml ของ proteinaseโซลูชั่น K (100 มิลลิกรัม proteinase K ใน 30 ml dH2O d เสริมองค์กร 10% (w/v) 10 ml และ 10 ml 0.5 M EDTA (pH 7.5))หลอดถูก incubated ที่ 50 C ในอ่างน้ำสำหรับ 1e2 h ด้วยเป็นครั้งคราว และอ่อนโยนผสมของโซลูชัน หลังจากย่อยอาหาร การใช้เป็นกระบอกสูบแนะนำเปตต์ โซลูชันถูกค่อย ๆ pipetted ลงในการหน่วยถ้วย ที่ถูกลอยบนบัฟเฟอร์ TE ในบีกเกอร์มี ความกำลังการผลิตขนาด 500 มล. บัฟเฟอร์ที่กวนช้า ๆ บนเป็นแม่เหล็กช้อนคนนอนรับสูงโมเลกุลน้ำหนัก genomic DNA lEG10 phages ได้รับจากดีเอ็นเอโดยใช้บรรจุภัณฑ์ Transpackแยก (Stratagene)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5.2 การสกัดดีเอ็นเอสูงน้ำหนักโมเลกุลจีโนมจากตัวอย่าง microtissue ของ urothelium กระเพาะปัสสาวะและในหลอดทดลองบรรจุภัณฑ์ของลิตรดีเอ็นเอทำลายจุลินทรีย์สั้นๆ โดยใช้ไม้จิ้มฟันตัวอย่างเยื่อเมือกถูกย้ายเข้า600 มลเซลล์บัฟเฟอร์สลาย (8.20 กรัมโซเดียมคลอไรด์, 0.22 กรัมโพแทสเซียมคลอไรด์ 120 กรัมซูโครส0.30 กรัม EDTA, 10 มล. Triton X-100 และ 1.58 กรัม TriseHCl (pH 8.3) ใน 1 ลิตรdH2O) ตัวอย่างที่ถูกปั่นโดยปิเปตและการแก้ปัญหาที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่13,200 รอบต่อนาทีใน microfuge ที่ 4 องศาเซลเซียสสำหรับ 12 นาที ใสทิ้งและนิวเคลียสถูก resuspended ใน 70 มล. ของเนยย่อยอาหาร (1.75 กรัม Na2HPO4 8.0 กรัมโซเดียมคลอไรด์ 0.2 กรัมโพแทสเซียมคลอไรด์และ20 มล. 0.5 M EDTA (pH 8.0) ใน 1 ลิตร dH2O, ปรับ pH 8.0 ด้วยNaOH) เสริม มี 2% RNaseIt ค๊อกเทลและ 70 มล. ของโปรK แก้ปัญหา (100 มิลลิกรัมโปร K ใน 30 มล. d dH2O เสริมที่มี10 มล. 10% (w / v) SDS และ 10 มล. 0.5 M EDTA (pH 7.5)). หลอดถูกบ่ม ที่ 50 องศาเซลเซียสในอ่างน้ำสำหรับ 1e2 ชั่วโมงที่มีการผสมเป็นครั้งคราวและอ่อนโยนของการแก้ปัญหา หลังจากการย่อยอาหารโดยใช้ปลายปิเปตเจาะกว้าง, การแก้ปัญหาที่ถูกปิเปตเบา ๆ ลงไปในถ้วยล้างไตซึ่งลอยอยู่บนกันชนTE ในบีกเกอร์ที่มีความจุ500 มล. บัฟเฟอร์ถูกกวนช้าในแม่เหล็กค้างคืนกวนที่จะได้รับสูงน้ำหนักโมเลกุลดีเอ็นเอ ลิตรphages EG10 ได้รับการช่วยเหลือจากดีเอ็นเอโดยใช้บรรจุภัณฑ์ Transpack Extract (Stratagene)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

งานวาง . การสกัดดีเอ็นเอจากน้ำหนักโมเลกุลสูง
microtissue ตัวอย่างของกระเพาะปัสสาวะยูโรทีเลียมและในบรรจุภัณฑ์หลอดแก้ว
L
ว่าดีเอ็นเอสั้น ใช้ไม้จิ้มฟัน ตัวอย่างที่ถูกโอน
เป็น 600 มล. การสลายเซลล์บัฟเฟอร์ ( 8.20 กรัมเกลือ , 0.22 กรัม ปริมาณ 120 กรัมซูโครส
0.30 กรัม EDTA 10 ml Triton X-100 1.58 กรัม และ trisehcl ( pH 8.3 ) 1 L
dh2o ) ตัวอย่างที่ได้จาก pipetting บด ,และโซลูชั่น
คือระดับที่ 200 รอบต่อนาทีใน microfuge ที่ 4
องศาเซลเซียสนาน 12 นาที
น่านถูกทิ้งและนิวเคลียสมี resuspended 70 ml ของการย่อยอาหาร 1.75 กรัมเนย ( na2hpo4 NaCl 8.0 กรัมโพแทสเซียม 0.2 กรัม
20 ml 0.5 M EDTA pH 8.0 ) 1 L dh2o , พีเอช ปรับ 8.0 กับ
NaOH ) เสริมด้วยค็อกเทล rnaseit 2% และ 70 กรัมโปรตีน
เค โซลูชั่น ( 100 มก. โปรตีน K ใน 30 ml D dh2o เสริม
10% 10 ml ( w / v ) SDS และ 10 ml 0.5 M EDTA pH 7.5 ) ) .
หลอดมันบ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส ใน
น้ำอาบ 1e2 H กับ
เป็นครั้งคราวและอ่อนโยนผสมของสารละลาย หลังจากการย่อยโดยใช้
กว้างเจาะปิเปต ทิป , แก้ปัญหาเบา pipetted เป็น
ล้างถ้วย ซึ่งลอยใน TE บัฟเฟอร์ในบีกเกอร์ที่มีความจุ 500 มล.
บัฟเฟอร์ค่อยๆกวนในแม่เหล็ก stirrer ค้างคืนเพื่อขอรับ
น้ำหนักโมเลกุลสูง genomic DNA l
eg10 จได้รับการช่วยเหลือจากดีเอ็นเอโดยใช้
บรรจุภัณฑ์บรรจุพัสดุ สารสกัด stratagene )