Assay of calpains and calpastatinCa

Assay of calpains and calpastatin
Calpain activity was determined using casein as a
substrate. Aliquots (1ml) of the column fractions
were incubated at 25C with 1ml of 0.7% casein in 100
mM Tris-HCl, 10 mM mercaptoethanol, 1 mM NaN3,
pH 7.5 containing 100 ml of either 0.1 M CaCl2 or 0.2 M
EDTA. The reaction was stopped after 30 min with 2 ml
of 5% TCA and the mixture centrifuged at 3000 g for 15
min. The absorbance of the supernatant was read at 278
nm. One unit of calpain was de®ned as the amount
which gave a Ca-dependent increase of 1.0 unit of
absorption in 1 h. Calpastatin was determined and
expressed as inhibitory equivalents of m-calpain.
Following localisation of the fractions with active
calpains and calpastatin, the appropriate fractions were
pooled and the activity of the bulked fractions reassayed
accurately.
2.5. Analysis of data
Statistical analysis was by a Minitab version 8 computer
package. Curves were ®tted to the data using the
SigmaPlot computer package.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบของ calpains และ calpastatinกำหนดกิจกรรม Calpain ใช้เคซีนเป็นการพื้นผิว Aliquots (1ml) ของเศษส่วนคอลัมน์ได้รับการกกที่ 25 C กับเคซีน 0.7% 100 มิลลิลิตร 1ทริสเรทติ้ง HCl, NaN3 มม. 10 มม. mercaptoethanol มม.pH 7.5 ประกอบด้วย 100 มิลลิลิตร 0.1 M CaCl2 หรือ 0.2 MEDTA หยุดปฏิกิริยาหลังจาก 30 นาทีกับ 2 ml5% TCA และส่วนผสมจากที่ 3000 กรัม 15นาที ค่าของ supernatant ถูกอ่านที่ 278นิวตันเมตร หน่วยของ calpain ถูกเด® ned เป็นจำนวนเงินซึ่งให้การเพิ่มขึ้นขึ้นอยู่กับ Ca ของ 1.0 หน่วยกำหนดการดูดซึมใน 1 h. Calpastatin และแสดงเป็นรายการเทียบเท่ายับยั้งของ m calpainการโลคัลไลซ์ของประโยคกับการใช้งานต่อไปนี้calpains และ calpastatin เศษส่วนที่เหมาะสมได้พู และกิจกรรมของเศษ bulked reassayedอย่างถูกต้อง2.5. การวิเคราะห์ข้อมูลรับวิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติ โดยเน็ดคอมพิวเตอร์รุ่น 8แพคเกจนี้ เส้นโค้ง® tted กับข้อมูลโดยใช้การแพคเกจ SigmaPlot คอมพิวเตอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Assay ของแคลเพนและ calpastatin
กิจกรรม Calpain ถูกกำหนดโดยใช้เคซีนเป็น
สารตั้งต้น aliquots (1ml) เศษส่วนคอลัมน์
ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสกับ 1ml 0.7% เคซีนใน 100
มิลลิ Tris-HCl 10 มิลลิ mercaptoethanol 1 มิ NaN3,
ค่า pH 7.5 ที่มี 100 มล. ของทั้ง 0.1 M CaCl2 หรือ 0.2 M
EDTA ปฏิกิริยาก็หยุดหลังจาก 30 นาทีมี 2 มล.
5% TCA และส่วนผสมที่หมุนเหวี่ยงที่ 3000 กรัมเป็นเวลา 15
นาที ค่าการดูดกลืนของสารละลายได้อ่านที่ 278
นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของ calpain ถูกde®nedถึงจำนวนเงิน
ที่ให้เพิ่มขึ้น CA-ขึ้น 1.0 หน่วยของ
การดูดซึมใน 1 ชั่วโมง Calpastatin ถูกกำหนดและ
แสดงเป็นเทียบเท่ายับยั้ง M-calpain.
ต่อไปนี้การแปลของเศษส่วนที่มีการใช้งาน
แคลเพนและ calpastatin, เศษส่วนที่เหมาะสมถูก
รวบรวมและกิจกรรมของเศษส่วนมีเนื้อมีหนัง reassayed
ได้อย่างถูกต้อง.
2.5 การวิเคราะห์ข้อมูล
ทางสถิติโดยรุ่น Minitab คอมพิวเตอร์ 8
แพคเกจ เส้นโค้งถูก®ttedข้อมูลโดยใช้
แพคเกจคอมพิวเตอร์ SigmaPlot

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ของ calpains calpastatin และการทดสอบกิจกรรมคาลตั้งใจใช้เป็นเคซีนพื้นผิว เฉยๆ ( 1ml ) ของคอลัมน์เศษส่วนอุณหภูมิ 25C กับ 1ml 0.7% เคซีนใน 100อืมบริษัท HCL mercaptoethanol 10 มม. nan3 1 มิลลิเมตรบรรจุ 100 มิลลิลิตร pH 7.5 ด้วย 0.1 M ผลิตหรือ 0.2 เมตรEDTA ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดหลังจาก 30 นาที 2 มิลลิลิตร5% TCA และส่วนผสมระดับที่ 3 , 000 กรัม 15มินน และน่านได้อ่านที่คุณนาโนเมตร หน่วยหนึ่งของคาลเดอ ®เน็ดเป็นจํานวน คือซึ่งให้ CA ขึ้นอยู่กับเพิ่มสำหรับหน่วยการดูดซึมใน 1 ชั่วโมง calpastatin ตั้งใจและแสดงเป็นยับยั้งเทียบเท่าของ m-calpain .ตามท้องถิ่นของเศษส่วนที่มีงานและ calpains calpastatin , เศษส่วนที่เหมาะสมคือรวม และกิจกรรมของ ยก reassayed เศษส่วนถูกต้อง2.5 การวิเคราะห์ข้อมูลสถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล คือ โปรแกรม คอมพิวเตอร์ รุ่น 8 โดยแพคเกจ เส้นโค้งเป็น® tted กับข้อมูลโดยใช้ชุดคอมพิวเตอร์ sigmaplot .