Commercial nisin was diluted in water and loaded onto a HICcolumn (Fig. 2A). In the first step, the eluate (2 M ammoniumsulphate) contained the highest protein content, althoughwithout nisin activity. In the following step, the eluate (1 Mammonium sulphate) contained a low amount of protein.Nisin activity was detected only in the water elution step(Fig. 2A, samples 35–40), in which protein content was lowerthan in the previous steps. Although elution of commercialnisin with PBS showed a similar profile (Fig. 2B), a decrease wasobserved in the number of samples with detectable activity(Fig. 2B, samples 36–39).Regardless of the eluent (PBS or water), nisin was selec-tively eluted in the step without ammonium sulphate. Thesecond step (elution with 1 M (NH4)2SO4) of commercial nisinpurification yielded low protein content without nisin activ-ity. Therefore, we decided to suppress this step and perform a2-step protocol to purify the nisin produced in-house (elutionwith 2 M (NH4)2SO4and water or PBS).Elution of nisin produced in-house exhibited the samebehavior observed with the commercial one; nisin was selec-tively eluted in the step without ammonium sulphate. A peakwith high protein content was recovered in the first step (2 Mammonium sulphate, with water or PBS), but no nisin activ-ity was found. Most samples collected in the last step werehighly active (Fig. 3A and B), and some of them even showedincreased activity around 1 log after purification.Nisin was previously purified (produced in MRS) by HIC, inwhich it was also recovered in an eluent without ammoniumsulphate (Gujarathi et al., 2008). However, conditions used inthis work are different from the published literature.
Nisin พาณิชย์ถูกทำให้เจือจางในน้ำ และโหลดลงบน HICcolumn (Fig. 2A) ในขั้นแรก eluate (2 M ammoniumsulphate) อยู่สูงโปรตีนเนื้อหา althoughwithout nisin กิจกรรม ในขั้นตอนต่อไปนี้ eluate (1 Mammonium ซัลเฟต) ประกอบด้วยจำนวนโปรตีนต่ำ กิจกรรม Nisin พบเฉพาะในน้ำ elution ขั้นตอน (Fig. 2A ตัวอย่าง 35 – 40), ที่โปรตีนถูก lowerthan ในขั้นตอนก่อนหน้านี้ แม้ว่า elution ของ commercialnisin กับ PBS แสดงให้เห็นว่าโพรไฟล์คล้าย (Fig. 2B), wasobserved ลดลงในจำนวนตัวอย่างที่มีกิจกรรมอาสา (Fig. 2B ตัวอย่าง 36 – 39) ไม่ eluent nisin (PBS หรือน้ำ), ถูกเลือก tively eluted ในขั้นตอนไม่มีแอมโมเนียมซัลเฟต ขั้นตอน Thesecond (elution กับ M 1 (NH4) 2SO4) ของ nisinpurification ค้าหาโปรตีนต่ำ โดย nisin activ-ity ดังนั้น เราตัดสินใจระงับขั้นตอนนี้ และทำการโพรโทคอล a2-ขั้นตอนที่ต้องทำ nisin ผลิตในบริษัท (น้ำ 2SO4and 2 เมตร (NH4) elutionwith หรือ PBS) Elution nisin ผลิตในบริษัทจัดแสดง samebehavior สังเกต ด้วยค้า nisin ถูกเลือก tively eluted ในขั้นตอนไม่มีแอมโมเนียมซัลเฟต การ peakwith สูงโปรตีนถูกกู้คืนในขั้นตอนแรก (2 Mammonium ซัลเฟต น้ำหรือ PBS), แต่ activ-ity nisin ไม่พบ ตัวอย่างส่วนใหญ่เก็บรวบรวมในสุดขั้นตอน werehighly งาน (Fig. 3A และ B), และบางส่วนของพวกเขาแม้กระทั่งกิจกรรม showedincreased รอบ 1 ล็อกหลังจากฟอก Nisin ถูกก่อนหน้านี้บริสุทธิ์ (ผลิตในนาง) โดยชไอ ซึ่งมันถูกยังกู้คืนใน eluent การโดย ammoniumsulphate (Gujarathi et al., 2008) อย่างไรก็ตาม สภาพใช้งาน inthis แตกต่างจากเอกสารประกอบการเผยแพร่
การแปล กรุณารอสักครู่..
