Amplification of toxR geneThe PCR t

Amplification of toxR gene

The PCR targeting toxR gene of V. parahaemolyticus was performed
for isolated BG strains based on the method of Kim et al.
(1999) using a thermocycler (Thermalcycler, Genei, Bangalore,
India) and PCR amplification was done by using PCR mastermix
(MedoxTM, Chennai, India). Primers like toxR forward
(5´- GTCTTCTGACGCAATCGTTG-3´) and reverse
(5´- ATACGAGTGGTTGCTTGCTGTCATG-3´) were purchased from
Bioserve Biotechnologies (India) Pvt Ltd, Hyderabad, India. Each
cycle consisted of three step reactions that is, initial denaturation
(95ºC, 1 min) followed by 35 cycles of denaturation (94°C, 30 s),
annealing temperature was calculated with Tm value of primer
(51°C, 1 min ) and extension (72°C, 1 min 30 s) followed by final
extension (72°C, 10 min). The PCR products were resolved on agarose
(1.5% w/v) gel electrophoresis. The gel was stained with ethidium
bromide (0.5 mg/ml) and visualized under a ultraviolet (UV)
transilluminator (Alpha Imager, Innotech Corporation, USA). GeneiTM
100 bp DNA Ladder (Genei, Bangalore, India) was used as a molecular
size marker.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การขยายของยีน toxRทำ PCR ยีน toxR ของ V. parahaemolyticus การกำหนดเป้าหมายสำหรับแยก BG สายพันธุ์ตามวิธีของ Kim et alใช้ thermocycler (Thermalcycler, Genei บังกา ลอร์ (1999)อินเดีย) และกระบือที่ทำ โดยใช้ PCR mastermix(MedoxTM เจนไน อินเดีย) ไพรเมอร์เช่น toxR ไปข้างหน้า (5´-GTCTTCTGACGCAATCGTTG-3´) และย้อนกลับ (5´-ATACGAGTGGTTGCTTGCTGTCATG-3´) ซื้อจากBioserve แสวง (อินเดีย) Pvt Ltd ไฮเดอราบัด อินเดีย แต่ละวงจรประกอบด้วยสามขั้นตอนปฏิกิริยาที่ เริ่มต้นแปรสภาพ(95ºC, 1 นาที) ตาม ด้วยรอบ 35 ของแปรสภาพ (94° C, 30 s),อุณหภูมิในการหลอมคำนวณกับค่า Tm ของไพรเมอร์(51° C, 1 นาที) และนามสกุล (72° C, 1 นาที 30 วินาที) แล้วตาม ด้วยสุดท้ายนามสกุล (72° C, 10 นาที) ผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับการแก้ไขใน agaroseอิเจ (1.5% w/v) เจถูกย้อม ด้วย ethidiumโบรไมด์ (0.5 mg/ml) และมองเห็นภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลต (UV)transilluminator (อัลฟา Imager, Innotech Corporation, USA) GeneiTM100 bp บันไดดีเอ็นเอ (Genei บังกาลอร์ อินเดีย) มาเป็นโมเลกุลเครื่องหมายขนาดนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การขยายของ toxR ยีน

กำหนดเป้าหมาย PCR ยีน toxR ของ V. parahaemolyticus ได้ดำเนินการ
สำหรับสายพันธุ์ที่แยก BG ขึ้นอยู่กับวิธีการของคิมอัล et.
(1999) โดยใช้ thermocycler A (Thermalcycler, Genei บังกาลอร์,
อินเดีย) และขยาย PCR ที่ได้กระทำโดยใช้ PCR mastermix
(MedoxTM เชนไนอินเดีย) ไพรเมอร์เช่น toxR ไปข้างหน้า
(5'- GTCTTCTGACGCAATCGTTG-3') และย้อนกลับ
(5'- ATACGAGTGGTTGCTTGCTGTCATG-3') ที่ซื้อมาจาก
BioServe Biotechnologies (อินเดีย) Pvt Ltd, Hyderabad, อินเดีย แต่ละ
รอบประกอบด้วยสามปฏิกิริยาขั้นตอนที่เป็น denaturation เริ่มต้น
(95ºC, 1 นาที) ตามด้วย 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ (94 ° C, 30 s),
อุณหภูมิการอบที่คำนวณได้มีค่า Tm ของไพรเมอร์
(51 ° C, 1 นาที) และการขยาย (72 ° C, 1 นาที 30 วินาที) ตามด้วยสุดท้าย
ส่วนขยาย (72 องศาเซลเซียส 10 นาที) ผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับการแก้ไขใน agarose
(1.5% w / v) gel electrophoresis เจลถูกย้อมด้วย ethidium
bromide (0.5 mg / ml) และมองเห็นภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลต (UV)
transilluminator (อัลฟา Imager อินโนเทคคอร์ปอเรชั่นประเทศสหรัฐอเมริกา) GeneiTM
100 bp ดีเอ็นเอบันได (Genei บังกาลอร์, อินเดีย) ถูกใช้เป็นโมเลกุล
เครื่องหมายขนาด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเพิ่มปริมาณของยีน toxrการตรวจยีน tdh toxr เป้าหมายของการปฏิบัติสำหรับแยก BG สายพันธุ์ตามวิธีของ Kim et al .( 1999 ) โดยใช้เทอร์โมไซเคล ์ ( เทอร์มอล ไซเคล ์ genei , บังกาลอร์อินเดีย ) และสามารถขยายได้โดยการใช้เทคนิค mastermix( medoxtm , เชนไน , อินเดีย ) ไพรเมอร์ที่ชอบ toxr ไปข้างหน้า5 ใหม่ - gtcttctgacgcaatcgttg-3 ใหม่ ) และย้อนกลับ5 ใหม่ - atacgagtggttgcttgctgtcatg-3 ใหม่ ) ซื้อจากbioserve เทคโนโลยีชีวภาพ ( อินเดีย ) Pvt Ltd , Hyderabad , อินเดีย แต่ละวงจรประกอบด้วยปฏิกิริยาขั้นตอนที่สามที่เริ่มต้นการหยุดชั่วคราว( 95 º C 1 นาที ) ตามด้วย 35 รอบ ( 94 ° C ( , 30 ) ,อุณหภูมิการอบอ่อนที่คำนวณได้กับค่า R ของไพรเมอร์( 51 ° C , 1 นาที ) และนามสกุล ( 72 ° C , 1 30 นาทีด้วย ) ตามด้วยสุดท้ายนามสกุล ( 72 ° C , 10 นาที ) ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกแก้ไขบน ,( 1.5 % w / v ) เจล เจลเปื้อนคู่โบรไมด์ ( 0.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และมองเห็นภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลต ( UV )transilluminator ( อัลฟา imager Innotech Corporation , USA ) geneitmบันได 100 คู่เบสดีเอ็นเอ ( genei บังกาลอร์ , อินเดีย ) ถูกใช้เป็นโมเลกุลขนาดเครื่องหมาย