A Thermo Scientific hybrid mass spe

A Thermo Scientific hybrid mass spectrometer (LTQ Orbitrap,
Thermo Scientific, Bremen, Germany) was used for MS data
collection. The mass spectrometer was equipped with a Paradigm
MS4 (Michrom Bioresources, Inc., Auburn, CA, USA), an autosampler
(HTC PAL, CTC Analytics, Zwingen, Switzerland) and a
nanoelectrospray ion source (NSI). Each sample was desalted using
a ZipTip C18/P10 (Millipore) prior to the NanoLCeMS analysis. The
ZipTip C18 showed recovery of palytoxin/ovatoxin over 50e90%.
The clean sample was separated on a capillary reverse phase column
(50  0.18 mm, 3 mm, C18, Supelco or Vydac). A 30-min stepgradient
(2% B for 0.0e2.0 min, 2e30% B for 2.0e7.0 min, hold
30% B for 7.0e14.0 min, 30e45% B for 14.0e20.0 min, wash 75% B
for 20.1e24.0 min, equilibration 2% B for 24.1e30.0 min, where
solvent A is aqueous-acetonitrile (98:2) and solvent B is aqueousacetonitrile
(2:98), both containing 0.1% formic acid, flow rate
2.0 ml/min) was used for the toxin separation. The mass spectrometer's
settings were full MS scan range m/z 300 to 2000 with
mass resolution of 60,000 at m/z 524 and scan time 50 ms with
three microscans accumulation. The temperature of the heated
capillary was 200
C, and 2.00 kV spray voltage was applied to all
samples. The two most intense ions from the full MS scan were
fragmented in data-dependent manner with CID, using an exclusion
list of 500 ions during 30 s. Duplicate NanoLCeMS analyses
were run for each sample.
PTX has a molecular mass of 2680 Da. In this study, both doubleand
triple-charged ions were used to identify PTX. The doublecharged
ions along with multiple losses of water molecules were
observed at m/z 1351.23 [M þ H þ Na]2þ, 1348.76 [M þ H þ NH4]2þ,
1340.24 [M þ 2H]2þ, 1331.24 [M þ 2H  H2O]2þ and 1322.23
[M þ 2H  2H2O]2þ, and the triple-charged ions were also detected
at m/z 901.16 [M þ 2H þ Na]3þ, 887.83 [M þ 3H  H2O]3þ, 881.82
[M þ 3H  2H2O]3þ and 875.82 [M þ 3H  3H2O]3þ (Ciminiello
et al., 2010, 2008).
In total, 64 colonies of P. tuberculosa were collected from the
aggregation (Fig. 1B and C), of which a clear majority of 42 (65.6%)
were PTX-positive (Table 1). Among the positive samples, 17 samples
contained the congener 42-OH-PTX, while other PTX congeners
like ostreocin and ovatoxins were not found in any of the
samples. The PTX content of quantifiable samples showed a
considerable spread, ranging between 12 ng/g colony wet weight
and 945 ng/g colonywet weight (Supplementary Table S1). The PTX
content of some samples were below the quantification range but
counted as positives, as their PTX content was still well above the
detection limit. For 42-OH-PTX, the range was from 27 ng/g to
419 ng/g colony wet weight (Table S1). These findings are in
agreement with the observation that in Palythoa samples only PTX
and 42-OH-PTX have been found up until now, including commercial
standards that are purified from Palythoa colonies (Rossi
et al., 2010). It is also interesting to note that 42-OH-PTX was
only found together with PTX in the same colony, whereas some
PTX-positive colonies did not have 42-OH-PTX. The results for
P. tuberculosa colonies confirmed a high spread of PTX in the Teniya
sampling area.
The other samples collected comprised a diverse set of marine
organisms that were found close to the aggregations formed by
P. tuberculosa colonies (Fig. 1C). In total 55 specimens were
collected (Table 1) and analysed by NanoLCeMS. According to their
taxonomic classification, the following 11 groups were included:
green macroalgae, red macroalgae, coralline algae, sponges, soft
corals, starfish, snails, crustaceans, zoantharians (species other than
P. tuberculosa), sea cucumbers, and hydrozoans (Table 1). Thus, the
sampled specimens contained organisms that might host the PTX

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีเทอร์โมวิทยาศาสตร์ผสมมวลสเปกโตรมิเตอร์ (LTQ Orbitrapเทอร์โมวิทยาศาสตร์ เบรเมน เยอรมนี) ใช้สำหรับข้อมูล MSคอลเลกชัน สเปกโตรมิเตอร์มวลชนพร้อมกับกระบวนทัศน์MS4 (ทรัพยากรชีวภาพ Michrom, Inc. ออเบิร์น CA, USA), สามารถมี(HTC PAL, CTC วิเคราะห์ Zwingen สวิตเซอร์แลนด์) และแหล่งไอออน nanoelectrospray (NSI) แต่ละอย่างถูก desalted ใช้การ ZipTip C18/P10 (มิลลิพอร์) ก่อนวิเคราะห์ NanoLCeMS การZipTip C18 แสดงให้เห็นว่าการกู้คืนของ palytoxin/ovatoxin ผ่าน 50e90%แบ่งออกคอลัมน์ขั้นตอนย้อนกลับที่เส้นเลือดฝอยอย่างสะอาด(50 0.18 มม. 3 มม. C18, Supelco หรือ Vydac) Stepgradient 30 นาที(2% B 0.0e2.0 นาที 2e30% B 2.0e7.0 นาที ค้าง30% B 7.0e14.0 นาที 30e45% B 14.0e20.0 นาที ซัก 75% B20.1e24.0 นาที equilibration 2% B 24.1e30.0 นาที ที่เป็นตัวทำละลายละลาย acetonitrile (98:2) และตัวทำละลาย B คือ aqueousacetonitrile(2:98), ทั้งที่ประกอบด้วย 0.1% กรด อัตราการไหล2.0 มล./นาที) ใช้สำหรับแยกสารพิษ สเปกโตรมิเตอร์มวลการตั้งค่าได้เต็ม MS แกนช่วง m/z 300-2000 ด้วยมวลละเอียด 60,000 m/z 524 และแกนเวลา 50 ms ด้วยสาม microscans สะสม อุณหภูมิของความร้อนหลอดเลือดฝอยเป็น 200 C และใช้แรงดันฉีด kV 2.00 ทั้งหมดตัวอย่าง มีไอออนที่รุนแรงที่สุดสองจากการสแกนเต็มรูปแบบของ MSมากในลักษณะขึ้นอยู่กับข้อมูลกับ CID โดยใช้โปรแกรมรายการของไอออน 500 ในระหว่างการวิเคราะห์ซ้ำ NanoLCeMS s. 30ถูกเรียกใช้สำหรับแต่ละอย่างPTX มีมวลโมเลกุลของดา 2680 ในการศึกษานี้ doubleand ทั้งสองไอออนที่มีค่าห้องถูกใช้ในการระบุ PTX Doublecharged การไอออนกับขาดทุนหลายของโมเลกุลของน้ำได้ข้อสังเกตที่ m/z 1351.23 [M þ H þนา] 2þ, 2þ 1348.76 [M þ H þ NH4]1340.24 [M þ 2H] 2þ, 1331.24 [þ M 2H H2O] 2þ และ 1322.232þ [M þ 2H 2H2O] และประจุมีค่าห้องยังพบที่ m/z 901.16 3þ [M þ 2H þนา] 887.83 [þ M 3H H2O] 3þ, 881.823þ [M þ 3H 2H2O] และ 875.82 [M þ 3H 3H2O] 3þ (Ciminielloet al. 2010, 2008)รวม โค P. tuberculosa 64 ถูกรวบรวมจากการรวม (รูป 1B และ C), ซึ่งส่วนใหญ่ใส 42 (65.6%)ได้บวก PTX (ตาราง 1) จากตัวอย่างบวก ตัวอย่าง 17อยู่ congener 42-OH-PTX ในขณะที่อื่น ๆ congeners PTXเช่น ostreocin และ ovatoxins ไม่พบในการตัวอย่าง แสดงเนื้อหา PTX ตัวอย่างเชิงปริมาณของการองถนนเยอะ ตั้งแต่ 12 ฉบับ/g อาณานิคมน้ำหนักเปียกและน้ำหนักของ colonywet ng/g 945 (เสริมตาราง S1) การ PTXเนื้อหาของตัวอย่างได้ด้านล่างช่วงนับ แต่นับเป็นบวก เป็นเนื้อหา PTX ยังคงสูงกว่าการตรวจสอบจำกัด สำหรับ 42-OH-PTX ช่วงคือจาก ng/g 27 เพื่อ419 ng/g อาณานิคมเปียกน้ำหนัก (ตาราง S1) ประเด็นเหล่านี้อยู่ในกับการสังเกตที่ Palythoa ตัวอย่างเฉพาะ PTXและ 42-OH-PTX พบได้จนถึงตอนนี้ รวมทั้งการค้ามาตรฐานที่บริสุทธิ์จากอาณานิคม Palythoa (Rossiet al. 2010) ก็ยังสนใจที่จะทราบได้ที่ 42-OH-PTXเพียง พบกับ PTX ในอาณาจักรเดียวกัน ในขณะที่บางอาณานิคม PTX บวกไม่มี 42-OH-PTX ผลลัพธ์ของP. tuberculosa อาณานิคมยืนยัน PTX ใน Teniya ความหลากหลายสูงพื้นที่สุ่มตัวอย่างตัวอย่างอื่น ๆ ที่เก็บรวบรวมประกอบด้วยการกำหนดความหลากหลายของทะเลสิ่งมีชีวิตที่พบใกล้รวมที่เกิดขึ้นโดยP. tuberculosa อาณานิคม (รูปที่ 1C) ในตัวอย่าง 55 รวม(ตารางที่ 1) การเก็บรวบรวม และวิเคราะห์ โดย NanoLCeMS ตามของพวกเขาการจัดประเภทอนุกรมวิธาน กลุ่ม 11 ต่อไปนี้ถูกรวม:macroalgae macroalgae สีเขียว สีแดง สาหร่าย coralline ฟองน้ำ นุ่มนวลปะการัง ปลาดาว snails กุ้ง zoantharians (สายพันธุ์อื่นที่ไม่ใช่P. tuberculosa), แตงกวาทะเล และ hydrozoans (ตารางที่ 1) ดังนั้น การตัวอย่างตัวอย่างที่ประกอบด้วยชีวิตที่อาจเป็นโฮสต์ PTX

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Thermo Scientific ไฮบริดมวลสเปกโตรมิเตอร์ (LTQ Orbitrap,
Thermo Scientific เบรเมนเยอรมนี) ที่ใช้สำหรับข้อมูล MS
คอลเลกชัน สเปกโตรมิเตอร์มวลพร้อมกับกระบวนทัศน์
MS4 (Michrom ทรัพยากรชีวภาพ, Inc ออเบิร์น, CA, USA) ซึ่งเป็น autosampler
(HTC PAL, CTC Analytics, Zwingen วิตเซอร์แลนด์) และ
แหล่งที่มา nanoelectrospray ไอออน (NSI) แต่ละตัวอย่าง desalted ใช้
Ziptip C18 / P10 (อร์ค) ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ NanoLCeMS
Ziptip C18 แสดงให้เห็นว่าการฟื้นตัวของ palytoxin / ovatoxin กว่า 50e90%.
ตัวอย่างที่สะอาดถูกแยกออกในคอลัมน์ของเส้นเลือดฝอยเฟสย้อนกลับ
(50? 0.18 มมมม 3, C18, Supelco หรือ Vydac) stepgradient 30 นาที
(2% B สำหรับ 0.0e2.0 นาที, 2e30% B สำหรับ 2.0e7.0 นาทีถือ
30% B สำหรับ 7.0e14.0 นาที 30e45% B สำหรับ 14.0e20.0 นาทีล้าง 75% B
สำหรับ 20.1e24.0 นาทีสมดุล 2% B สำหรับ 24.1e30.0 นาทีที่
ตัวทำละลายเป็นน้ำ-acetonitrile (98: 2) และตัวทำละลาย B เป็น aqueousacetonitrile
(2:98) ทั้งที่มี 0.1% กรดไหล อัตรา
2.0 มล. / นาที) ถูกนำมาใช้สำหรับการแยกสารพิษ มวลสเปกโตรมิเตอร์ของ
การตั้งค่าได้เต็มรูปแบบ MS สแกนช่วง M / z 300-2000 กับ
ความละเอียดของมวล 60,000 ที่ M / z 524 และสแกนเวลา 50 มิลลิวินาทีกับ
สาม Microscans สะสม อุณหภูมิของน้ำอุ่น
เส้นเลือดฝอย 200 องศาเซลเซียสและแรงดันไฟฟ้า 2.00 กิโลโวลต์สเปรย์ที่ถูกนำไปใช้กับ
กลุ่มตัวอย่าง ทั้งสองไอออนที่รุนแรงที่สุดจากการสแกนเต็มรูปแบบ MS ถูก
แยกส่วนในลักษณะขึ้นอยู่กับข้อมูลที่มี CID โดยใช้การยกเว้น
รายการ 500 ไอออนในช่วง 30 วินาที ซ้ำ NanoLCeMS วิเคราะห์
ถูกใช้สำหรับแต่ละตัวอย่าง.
PTX มีมวลโมเลกุลของดา 2680 ในการศึกษาครั้งนี้ทั้ง doubleand
ไอออนสามชาร์จถูกนำมาใช้เพื่อระบุ PTX doublecharged
ไอออนพร้อมกับหลาย ๆ ความสูญเสียของโมเลกุลของน้ำที่ถูก
ตั้งข้อสังเกตที่ M / z 1,351.23 [M Þ H Þนา] 2th, 1348.76 [M Þ H Þ NH4] 2th,
1340.24 [M Þ 2H] 2th, 1331.24 [M Þ 2H? H2O] 2th และ 1,322.23
[M Þ 2H? 2H2O] 2th และไอออนสามเรียกเก็บนอกจากนี้ยังได้ตรวจพบ
ที่ M / z 901.16 [M ÞÞ 2H นา] 3, 887.83 [M Þ 3H? H2O] 3, 881.82
[M Þ 3H? 2H2O] 3th และ 875.82 [M Þ 3H? 3H2O] 3 (Ciminiello
et al., 2010 2008).
รวม 64 อาณานิคมของพี tuberculosa ถูกเก็บรวบรวมจาก
การรวมตัว (รูป. 1B และ C) ซึ่งส่วนใหญ่ที่ชัดเจนของ 42 (65.6%)
มี PTX- บวก (ตารางที่ 1) ในบรรดาตัวอย่างบวก 17 ตัวอย่าง
ที่มีอยู่ congener 42 OH-PTX ขณะ congeners PTX อื่น ๆ
เช่น ostreocin และ ovatoxins ไม่พบในใด ๆ ของ
กลุ่มตัวอย่าง เนื้อหา PTX เชิงปริมาณของกลุ่มตัวอย่างพบว่ามี
การแพร่กระจายมากตั้งแต่ระหว่างวันที่ 12 นาโนกรัม / กรัมน้ำหนักเปียกอาณานิคม
และ 945 ng / g colonywet น้ำหนัก (ตารางที่เสริม S1) PTX
เนื้อหาของกลุ่มตัวอย่างบางคนต่ำกว่าช่วงปริมาณ แต่
นับเป็นบวกเป็นเนื้อหา PTX ของพวกเขาก็ยังคงดีกว่า
การตรวจสอบวงเงิน 42-OH-PTX ช่วงคือตั้งแต่วันที่ 27 ng / g เพื่อ
419 ng / กรัมน้ำหนักเปียกอาณานิคม (ตาราง S1) การค้นพบเหล่านี้อยู่ใน
ข้อตกลงกับการสังเกตว่าใน Palythoa ตัวอย่างเท่านั้น PTX
และ 42-OH-PTX ได้รับพบว่าจนถึงขณะนี้รวมทั้งในเชิงพาณิชย์
มาตรฐานที่บริสุทธิ์จากอาณานิคม Palythoa (รอสซี
et al., 2010) นอกจากนี้ยังเป็นที่น่าสนใจที่จะทราบว่า 42 OH-PTX ถูก
พบเพียงร่วมกับ PTX ในอาณานิคมเดียวกันในขณะที่บาง
อาณานิคม PTX บวกไม่ได้มี 42 OH-PTX ผลสำหรับ
พี อาณานิคม tuberculosa ได้รับการยืนยันการแพร่กระจายสูงของ PTX ใน Teniya
พื้นที่การสุ่มตัวอย่าง.
กลุ่มตัวอย่างอื่น ๆ ที่รวบรวมประกอบด้วยชุดหลากหลายทางทะเล
ชีวิตที่ถูกพบใกล้กับรวมที่เกิดขึ้นจาก
พี อาณานิคม tuberculosa (รูป. 1C) ทั้งหมด 55 ตัวอย่างที่ถูก
เก็บรวบรวม (ตารางที่ 1) และวิเคราะห์โดย NanoLCeMS ตามที่พวกเขา
จัดหมวดหมู่การจัดหมวดหมู่ดังต่อไปนี้ 11 กลุ่มรวม:
สาหร่ายสีเขียวสาหร่ายสีแดง, กัลปังหาสาหร่ายฟองน้ำนุ่ม
ปะการังปลาดาวหอย, กุ้ง zoantharians (สายพันธุ์อื่น ๆ กว่า
พี tuberculosa) ปลิงทะเลและ hydrozoans (ตารางที่ 1) ดังนั้น
ตัวอย่างตัวอย่างที่มีสิ่งมีชีวิตที่อาจเป็นเจ้าภาพ PTX