Enterohemorrhagic Escherichia coli

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC), a subset of Shiga toxin producing E. coli (STEC) is associated with a spectrum of diseases that includes diarrhea, hemorrhagic colitis and a life-threatening hemolytic-uremic syndrome (HUS). Regardless of serotype, Shiga toxins (Stx1 and/or Stx2) are uniformly expressed by all EHEC, and so exploitable targets for laboratory diagnosis of these pathogens. In this study, a sandwich ELISA for determination of Shiga toxin (Stx) was developed using anti-Stx2B subunit antibodies and its performance was compared with that of the Vero cell assay and a commercial immunoassay kit. Chicken IgY was used as capture antibody and a HRP-conjugated rabbit IgG as the detection antibody. The anti-Stx2B IgY was harvested from eggs laid by hens immunized with a recombinant protein fragment. Several parameters were tested in order to optimize the sandwich ELISA assay, including concentration of antibodies, type and concentration of blocking agent, and incubation temperatures. Supernatants from 42 STEC strains of different serotypes and stx variants, including stx2EDL933, stx2vha, stx2vhb, stx2g, stx1EDL933, and stx1d were tested. All Stx variants were detected by the sandwich ELISA, with a detection limit of 115 ng/ml Stx2. Twenty three strains negative for stx genes, including different bacteria species, showed no activity in Vero cell assay and produced negative results in ELISA, except for two strains. Our results show that anti-Stx2B IgY sandwich ELISA could be used in routine diagnosis as a rapid, specific and economic method for detection of Shiga toxin-producing E. coli.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC), ชุดย่อยของชิงะพิษผลิต E. coli (STEC) จะเกี่ยวข้องกับสเปกตรัมของโรคที่ colitis เลือดออก โรคท้องร่วง และการคุกคามชีวิต hemolytic ยูรีเมียอาการ (HUS) ไม่ serotype พิษชิงะ (Stx1 / Stx2) ใจสม่ำเสมอเมื่อเทียบเคียงแสดง โดยทั้งหมด EHEC, exploitable ดังนั้นเป้าหมายการปฏิบัติการวินิจฉัยโรคเหล่านี้ ในการศึกษานี้ แซนวิ ELISA สำหรับกำหนดพิษชิงะ (Stx) ถูกพัฒนาโดยใช้แอนตี้ต่อต้าน-Stx2B ย่อยและผลการดำเนินงานถูกเปรียบเทียบกับที่ของ Vero วิเคราะห์และเซลล์ชุด immunoassay พาณิชย์ ใช้ไก่ IgY เป็นแอนติบอดีและกระต่าย HRP กลวงเป็นการตรวจหาแอนติบอดี IgG IgY ต่อต้าน-Stx2B ถูกเก็บเกี่ยวจากไข่ที่วาง โดยไก่ที่ immunized ด้วยส่วน recombinant โปรตีน พารามิเตอร์หลายอย่างได้ทดสอบการเพิ่มประสิทธิภาพการทดสอบ ELISA รวมทั้งความเข้มข้นของแอนตี้ ชนิด และความเข้มข้นของตัวแทนบล็อก และอุณหภูมิบ่มแซนวิช ทดสอบ supernatants จาก STEC สายพันธุ์ที่ 42 serotypes ต่าง ๆ และตัวแปร stx, stx2EDL933, stx2vha, stx2vhb, stx2g, stx1EDL933 และ stx1d Stx ย่อยทั้งหมดตรวจพบ โดยแซนวิ ELISA มีจำนวน 115 ng/ml Stx2 ยี่สิบสามสายพันธุ์ค่าลบสำหรับ stx ยีน ตรวจหาแบคทีเรียต่างชนิด รวมถึงแสดงให้เห็นว่าไม่มีกิจกรรมในการวิเคราะห์เซลล์ Vero และผลิตผล ELISA ลบยกเว้นสองสายพันธุ์ ผลของเราแสดงแซนวิ IgY ต้าน Stx2B ที่สามารถใช้ ELISA ในการวินิจฉัยเป็นประจำเป็นวิธีที่รวดเร็ว เฉพาะ และเศรษฐกิจตรวจงะผลิตพิษ E. coli

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

enterohemorrhagic อีโค (EHEC) ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของการผลิตสารพิษชิเชื้อ E. coli (STEC) มีความเกี่ยวข้องกับคลื่นความถี่ของโรคที่มีอาการท้องเสียเป็นโรคลำไส้ใหญ่อักเสบและเป็นอันตรายถึงชีวิตโรค hemolytic uremic-(HUS) โดยไม่คำนึงถึง serotype สารพิษ Shiga (Stx1 และ / หรือ Stx2) จะแสดงอย่างสม่ำเสมอโดย EHEC ทั้งหมดและเป้าหมายเพื่อประโยชน์ในการวินิจฉัยในห้องปฏิบัติการของเชื้อโรคเหล่านี้ ในการศึกษานี้เป็นวิธี ELISA แซนวิชในการตรวจวัดสารพิษ Shiga (Stx) ได้รับการพัฒนาโดยใช้แอนติบอดีต่อต้าน Stx2B subunit และประสิทธิภาพการทำงานได้รับการเปรียบเทียบกับการทดสอบเซลล์เวโรและชุด immunoassay เชิงพาณิชย์ ไก่ IGY ถูกใช้เป็นแอนติบอดีที่จับภาพและ IgG กระต่าย HRP-ผันเป็นแอนติบอดีการตรวจสอบ ต่อต้าน Stx2B IGY เก็บเกี่ยวมาจากไข่วางโดยไก่วัคซีนที่มีส่วนโปรตีน ตัวแปรหลายได้รับการทดสอบเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการทดสอบ ELISA แซนวิชรวมทั้งความเข้มข้นของแอนติบอดีชนิดและความเข้มข้นของการปิดกั้นตัวแทนและอุณหภูมิบ่ม supernatants จาก 42 สายพันธุ์ของ STEC สายพันธุ์ที่แตกต่างกันและตัวแปร stx รวมทั้ง stx2EDL933, stx2vha, stx2vhb, stx2g, stx1EDL933 และ stx1d ได้รับการทดสอบ ทุกสายพันธุ์ Stx ถูกตรวจพบโดยวิธี ELISA แซนวิชที่มีขีด จำกัด ของการตรวจสอบของ 115 ng / ml Stx2 ยี่สิบสามสายพันธุ์เชิงลบสำหรับยีน stx รวมทั้งสายพันธุ์แบคทีเรียที่แตกต่างกันแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมในการวิเคราะห์เซลล์เวโรและผลิตไม่มีผลลบในวิธี ELISA ยกเว้นสองสายพันธุ์ ผลของเราแสดงให้เห็นว่าการต่อต้าน Stx2B IGY ELISA แซนวิชสามารถนำมาใช้ในการวินิจฉัยโรคเป็นประจำอย่างรวดเร็ววิธีการเฉพาะและเศรษฐกิจในการตรวจหาสารพิษ Shiga ผลิตเชื้อ E. coli

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

enterohemorrhagic Escherichia coli ( EHEC ) เป็นเซตย่อยของสารพิษชิกา การผลิตเชื้อ E . coli ( STEC ) เกี่ยวข้องกับสเปกตรัมของโรคซึ่งรวมถึงโรคท้องร่วง , hemorrhagic colitis และคุกคามชีวิตหลังไตวายเรื้อรังซินโดรม ( สา ) ไม่ว่าหรือ ( stx1 , สารพิษชิกาและ / หรือ stx2 ) จะขึ้นแสดงด้วย EHEC , และเป้าหมายเพื่อ exploitable สำหรับการตรวจวินิจฉัยโรคจากเชื้อโรคเหล่านี้ในการศึกษานี้ , แซนวิช ELISA สำหรับการหาปริมาณสารพิษชิกา ( STX ) ได้ถูกพัฒนาขึ้นโดยใช้ anti-stx2b ชนิดแอนติบอดีและประสิทธิภาพของมันเมื่อเทียบกับที่ของเวโรเซลล์ ) และทางพาณิชย์ kit igy ไก่ใช้เป็นแอนติบอดี IgG conjugated และชจับกระต่ายเป็นการตรวจหาแอนติบอดีการ anti-stx2b igy เก็บเกี่ยวจากไข่ โดยแม่ไก่ที่ฉีดกระตุ้นด้วยเศษโปรตีนรีคอมบิแนนท์ . ทดสอบหลายพารามิเตอร์ในการปรับแซนวิช ELISA การทดสอบ รวมทั้งความเข้มข้นของแอนติบอดี ชนิดและความเข้มข้นของสารบล็อก และอุณหภูมิการบ่ม supernatants จาก 42 STEC สายพันธุ์และสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน 3 แบบ ได้แก่ stx2edl933 stx2vha , ,stx2vhb stx2g stx1edl933 , , , และ stx1d ถูกทดสอบ ตัวแปรแบบทั้งหมดถูกตรวจพบโดย Sandwich ELISA ด้วยขีดจำกัดของ 115 ng / ml stx2 . 20 สายพันธุ์ทั้งสามเป็นแบบยีน รวมทั้งสายพันธุ์แบคทีเรียที่แตกต่างกันไม่พบว่ากิจกรรมในเซลล์ Vero และผลิตผลทางลบในวิธี ELISA ยกเว้นสองสายพันธุ์ผลของเราแสดงให้เห็นว่าแซนวิช anti-stx2b igy ) สามารถใช้ในการวินิจฉัยตามปกติเป็นอย่างรวดเร็ววิธีที่เฉพาะเจาะจงและเศรษฐกิจเพื่อการตรวจหาสารพิษชิกา การผลิตเชื้อ E . coli .